毕赤酵母木聚糖酶的活力测定条件研究

为探讨毕赤酵母木聚糖酶的催化特性以及更好地发挥其催化功能,从pH、温度、底物浓度、反应时间、DNS用量、DNS显色时间等几个方面研究了木聚糖酶活性测定的最佳条件。研究结果表明,木聚糖酶酶活测定的适宜条件为:1%的木聚糖用0.05mol/L pH6.0的柠檬酸缓冲液配制;测定温度70℃,且该酶的热稳定性较好.在55～60℃下放置2h能保持68%以上的酶活;酶促反应时间10min;DNS用量3mL;DNS显色时间5min。     

木聚糖酶活力的二硝基水杨酸(DNS)测定法

采用DNS法研究不同稀释倍数、底物用量、pH值和反应温度对木聚糖酶活力的影响.结果表明:木聚糖酶的活力随酶稀释倍数、底物木聚糖量的提高而增加,但应控制好酶的稀释倍数和底物用量,否则会引起测定误差.酶处理反应的较佳工艺为:时间20 min,pH值6,反应温度60℃.木聚糖酶在60℃恒温稳定0-4 h,相对酶活都在85%以上,稳定性较好.其它前处理用酶制剂对木聚糖酶活力的影响不明显.不同类型的化学助剂对木聚糖酶的影响不同.     

微量测定木聚糖酶活力的新方法——MBTH法

建立一种木聚糖酶活力的微量测定新方法--3-甲基-2-苯并噻唑酮腙(MBTH)法。根据木聚糖及其酶解产物的特殊性,研究MBTH法的显色条件,并以多点测定法对酶活力测定中的几个关键参数进行探讨。结果表明：蛋白质在其质量浓度低于30μg/mL时对测定无干扰;木聚糖溶液的最佳测定质量浓度为4mg/mL;较高的酶解温度会使木聚糖酶在测定过程中失活,因此,酶活力测定的最佳温度为30℃,而远低于该酶的最适温度;酶解时间为60min以内;酶解产物与MBTH试剂的反应时间应控制在13～16min之间,以15min为最佳。以酶解时间为30min计,本法检测限为0.135mU/mL,定量限为0.451mU/mL,适当延长酶解时间可相应提高酶活力检测灵敏度。该法准确度高,结果稳定,灵敏度远高于DNS法。     

紫外诱变球毛壳霉选育木聚糖酶高产菌株

木聚糖酶具有重要的潜在应用价值,为获得一株遗传性状稳定的木聚糖酶高产菌株,以木聚糖酶的酶活为评价指标,采用紫外线诱变的方法,利用单因素试验确定紫外线照射时间,通过含木聚糖的初筛培养基对紫外诱变后的菌株进行初筛,然后采用DNS法测定木聚糖酶活性对诱变菌株进行复筛.将筛选出的木聚糖酶活力最高的诱变菌株进行传代培养,测定其酶活,探讨其遗传稳定性.试验结果表明:紫外灯功率20W,照射距离30cm,照射时间120s,球毛壳霉致死率为92.35％.在此条件下进行菌株的紫外诱变获得高产木聚糖酶的正突变株15株,其中1株高产菌株Z30 - 56的酶活为9850IU/mL,比出发菌株提高53.7％,并且遗传性能稳定.     

用正交法探讨木聚糖酶活性的最佳测定条件

通过正交试验，探讨了不同测定条件对木聚糖酶活性的影响。研究结果表明：木聚糖酶活性测定的最佳条件是温度为50℃、反应时间为30min、pH值为4．0—5．3。还表明，温度和反应时间是木聚糖酶活性测定结果的主要影响因素。     

竹鼠肠道耐碱性木聚糖酶菌株的筛选及酶学性质研究

为获得良好耐酸碱性的木聚糖酶,以解决木聚糖酶在实际工业中的应用问题。本研究以木聚糖为唯一碳源,从宜宾竹鼠肠道及粪便中,采用刚果红褪色法初筛和DNS法测定木聚糖酶活进行复筛,筛选了1株具有耐碱性木聚糖酶活性的菌株JZF,16S rDNA序列分析,鉴定为蕈状芽孢杆菌（Bacillus mycoides）,对蕈状芽孢杆菌JZF的生长曲线、产酶曲线以及产耐碱性木聚糖酶的酶学性质进行初步的探索。结果显示,该菌株于37 ℃,180 r/min培养48 h酶活达到15.17 U/mL;培养28 h后菌体量达到最大值,72 h后木聚糖酶活力达到最大值为29.65 U/mL,所产木聚糖酶最适合反应温度为50 ℃,最适pH9.0;40~60 ℃,pH8.0~9.0条件下相对酶活能保持在60%以上,金属离子Mn2+与Ca2+对该菌株的木聚糖酶有明显的促进作用,本研究所得菌株所产的木聚糖酶在碱性条件下具备良好的活性,为后续耐碱性木聚糖酶的实际应用研究提供了菌种来源与数据基础。     

一株产木聚糖酶放线菌的液体发酵条件优化及水解特性研究

以木聚糖为唯一碳源制作选择培养基,利用透明圈法筛选高产木聚糖酶菌株,对其中一株产酶较高的菌株L10608进行液体发酵条件优化并对所产木聚糖酶的水解特性进行研究。结果表明:菌株L10608最佳产酶条件为以质量浓度25g/L、80目的水不溶性玉米芯木聚糖为碳源,10g/L大豆蛋白胨和5g/L酵母浸膏为复合氮源,初始pH6.0、培养温度40℃、转速200r/min、表面活性剂吐温-80质量浓度4g/L,最佳产酶条件下木聚糖酶活力达1074.8U/mL。以桦木木聚糖、榉木木聚糖和燕麦木聚糖为底物研究菌株L10608所产木聚糖酶的水解特性,结果表明该木聚糖酶为内切型木聚糖酶,水解主要产物为木二糖和木三糖。表明菌株L10608有望作为功能性低聚木糖的生产菌株。     

紫外诱变球毛壳霉原生质体选育木聚糖酶高产菌株

[目的]对球毛壳霉原生质体进行紫外诱变处理筛选出一株高产木聚糖酶菌株.[方法]实验在不同条件下制备球毛壳霉(Chaetomium globosum AS3.3601)原生质体,分析不同酶浓度、酶解温度和时间对原生质体生成率和再生率的影响,利用单因素实验确定了紫外线诱变剂量,经初筛和复筛后,DNS法测定木聚糖酶活性.[结果]结果表明:结合原生质体的生成率和再生率确定其最佳制备条件为酶浓度1.5％,酶解温度30℃,酶解时间4h,在紫外照射时间60s下处理过的原生质体,木聚糖酶活性可达到9980IU/mL.[结论]获得的诱变菌株YZ-8比原始菌株提高了92.6％,此菌株经多次传代,遗传性能稳定.     

木聚糖酶基因XynB在毕赤酵母中的表达及酶学性质研究

目的:将来源于Thermotoga maritima的酸性耐高温木聚糖酶基因Xyn B通过密码子优化整合到毕赤酵母GS115基因组上,构建高效表达木聚糖酶Xyn B的毕赤酵母工程菌并研究其酶学性质。方法:通过分子克隆手段构建目的基因重组质粒以及二拷贝重组质粒,并将重组质粒导入毕赤酵母进行发酵表达,用DNS法测定发酵液酶活,并对酵母工程菌分泌的木聚糖酶进行一系列的酶学性质研究。结果:木聚糖酶的最适p H和温度分别为6.0和60℃;在p H4~6之间,稳定性较好,相对比酶活均在80%以上;在60℃和70℃保温2 h残留酶活分别为80%和70%左右;Co~(2+)对木聚糖酶活性有较明显的促进作用,Fe~(2+)、K~+和Zn~(2+)对酶的活性有微弱的促进作用,而Cu~(2+)、Ca~(2+)、Mg~(2+)、Mn~(2+)、Na~+对木聚糖酶活性有不同程度的抑制作用。TLC检验该木聚糖酶可以将木聚糖水解为二糖和少量单糖。通过10 L发酵罐发酵,最大酶活达到了8000 U/m L。结论:木聚糖酶在毕赤酵母中实现了高效表达,并获得了木聚糖酶的最适反应条件等一系列酶学性质,该酶性质优良适合用于饲料添加剂。     

啤酒原料小麦及其麦芽木聚糖含量与木聚糖酶活的研究

通过间苯三酚-冰醋酸法测定10种小麦及其麦芽的阿拉伯木聚糖含量、DNS法测定其木聚糖酶酶活,反应在间苯三酚-冰醋酸法和DNS法的最适反应条件下进行。结果表明：间苯三酚-冰醋酸法的最适条件是反应液用量10mL、反应20min,冷却后30min内基本稳定（P〉0.05）。DNS反应最适条件为反应液用量3mL、反应15min,反应完成后35min内基本稳定（P〉0.05）。8、9、10号小麦中碱溶性阿拉伯木聚糖含量最低（P〉0.05）,分别为0.5811±0.0127%、0.6605±0.0620%和0.6603±0.0301%;9、10号麦芽中碱溶性阿拉伯木聚糖最低（P〉0.05）,含量分别为0.9746±0.0085%和0.7797±0.0508%。4、8、10号小麦中水溶性阿拉伯木聚糖含量最低（P〉0.05）,分别为0.5423±0.0645%、0.4681±0.0127%和0.3828±0.0403%;而在麦芽中,7、8号品种最低（P〉0.05）,含量为0.3362±0.0518%和0.2429±0.0467%。小麦发芽后,大部分品种碱溶性阿拉伯木聚糖含量升高,增大最多的是4、7、8号品种（P〉0.05）,只有3号品种略微减少;水溶性阿拉伯木聚糖含量都降低。小麦发芽后木聚糖酶酶活均增大,小麦的酶活都在60.00～75.00IU/g之间,而在麦芽中各个品种间的差异不显著（P〉0.05）,都在100.00～120.00IU/mL之间。