CYP2C19基因多态性真核表达载体的构建及稳定转染细胞系的建立

目的: 构建细胞色素P450 CYP2C19^*1、^*2、^*3真核表达载体,并分别转染人肝癌细胞(HepG2),建立高表达目的基因的稳定转染细胞系。方法: 应用化学合成法合成CYP2C19^*1(野生型)序列,再以此为模板,体外定点突变PCR法构建^*2、^*3(突变型)。DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.l(-),经菌落PCR、酶切以及测序鉴定后,脂质体转染法转染HepG2细胞,通过G418选择培养,建立稳定转染细胞系,RT-PCR、Western Blot 分别检测CYP2C19^*1、^*2、^*3 mRNA以及蛋白的表达。结果: 成功构建了pcDNA3.1(-)-CYP2C19^*1、^*2、^*3表达质粒,并建立了相应稳定转染细胞系。进一步的RT-PCR和Western Blot检测结果表明,目的基因均得到了稳定的表达。结论: 人CYP2C19^*1、^*2、^*3稳定表达细胞系为研究创新药物或新药先导化合物临床前代谢性质的筛选和预测以及为临床潜在药物相互作用提供了有效实验平台。     

氯沙坦钾片的生物等效性及CYP2C9*3基因多态性对氯沙坦药代动力学的影响

目的: 评价试验制剂氯沙坦钾片(杭州民生药业)与参比制剂氯沙坦钾片(杭州默沙东制药)的生物等效性及CYP2C9^*3基因多态性对氯沙坦药代动力学的影响。方法: 采用PCR测序法对健康中国汉族受试者CYP2C9^*3(rs1057910 A>C)位点进行基因分型,筛选36名受试者入组本试验,其中CYP2C9^*1/^*1(AA)基因型个体32例,CYP2C9^*1/^*3(AC)基因型个体4例。本研究为两制剂、两周期交叉设计,单次、开放口服给药的单中心试验,给药剂量为氯沙坦钾片(50 mg/片)1片。通过液相色谱-串联质谱法同时测定人血浆中氯沙坦钾及其代谢产物E-3174的浓度,采用DAS3.2.2非房室模型药动学参数计算的方法求算药动学参数。结果: 受试试剂对参比制剂的相对生物利用度分别为氯沙坦(101.5±20.2)%、E-3174(100.0±13.8)%;同CYP2C9^*3为AA基因型受试者相比,AC基因型受试者中氯沙坦的药代动力学参数AUC_0-12、AUC_inf以及C_max升高,其中AUC_0-12、AUC_inf差异有统计学意义;E-3174的药代动力学参数AUC_0-48和AUC_inf降低,不同基因型间差异无统计学意义。结论: 两种制剂生物等效; CYP2C9基因1075A>C突变可导致氯沙坦代谢减慢,但氯沙坦临床剂量可能不需要根据CYP2C9基因型进行调整。     

中国汉族儿童CYP3A5*3基因型与急性淋巴细胞白血病易感性的关联研究

目的: 在中国汉族儿童中探讨白血病易感性与CYP3A5^*3的频率之间的相关性。方法: 共收集172名中国汉族儿童血液,包括52名急性白血病患者(27女性,25男性)和120名健康儿童(53女性,67男性)。提取DNA,然后用PCR-RFLP方法检测基因型。结果: CYP3A5^*3在人群中的分布符合Hardy-Weinberg 平衡。儿童白血病中CYP3A5^*3频率为0.721(95% CI: 0.549, 0.893),而健康儿童中为0.758 (95% CI: 0.674, 0.842),两者之间无明显差异,并且也无男女性别差异。结论: CYP3A5^*3是健康儿童和白血病患者中的常见基因型,健康儿童和白血病患儿中CYP3A5^*3频率一致, 因此CYP3A5^*3与儿童白血病易感性之间无关联。     

CYP2D6 PCR 基因型与DXT表型和基因芯片检测的比较1

目的: 为了评价 CYP2D6 的基因型和表型的联系以及基因芯片在 CYP2D6 多基因分析中的应用。方法: 242 健康志愿者, 口服 dextromethorphan 后收集尿液测定其代谢率, 收集 20 ml 血提取DNA, 并通过基 因 特 异性 PCR 和/(或) 基 因芯 片 分 析CYP2D6 *2———*11, *17 和多拷贝 CYP2D6 基因, 其中 5 个基因(*3、*4、*6、*7 和 *9) 用 PCR和CYD450 基因芯片同时分析。 结果: CYP2D6 基因型比表型更富有信息和更能反映 CYP2D6 酶的表达。 CYP2D6 *3、*4、*6、*7 和*9 的基因检测在CYP450基因芯片和基因特异性 PCR 中显示高度的一致性。结论: 基因芯片在检测基因多位点的多基因中是一个有发展前途和可靠的方法。     

中国人群CYP2D6基因多态性对美托洛尔药代动力学的影响

目的:研究中国人群CYP2D6基因多态性对美托洛尔药代动力学的影响。方法:使用基因芯片技术测定中国健康志愿者CYP2D6的基因型,按照分型结果将志愿者分为四组,第1组:CYP2D6*2W*10W,第2组:CYP2D6*2H*10W或CYP2D6*2M*10W,第3组:CYP2D6*2M*10H,第4组:CYP2D6*2M*10M,每组筛选10人,共40人。各组志愿者单次口服100mg美托洛尔后,使用HPLC方法测定血和尿中美托洛尔及其代谢产物α-羟基美托洛尔(HM)的浓度,研究其在不同基因型志愿者体内的药代过程。结果:第2组美托洛尔及其HM的主要药动学参数与第1组相比均没有统计学差异。第3组美托洛尔的t_1/2、AUC、C_max显著高于第1组(P<0.05);而HM的t_1/2延长47.3%,AUC降低56.0%(P<0.05)。第4组美托洛尔的t_1/2、AUC、C_max均显著高于第1组(P<0.05)和第3组(P<0.05);HM的t_1/2、AUC、C_max与第1组和第3组相比均有统计学差异(P<0.05),且呈现基因剂量效应。第3组和第4组的口服清除率和肾清除率均低于第1组,而0～24h代谢比率分别为第1组的1.82倍和3.96倍。结论:CYP2D6*2对于美托洛尔的药代动力学过程没有影响;但CYP2D6*10可降低酶活性,且CYP2D6*10纯合子变异比杂合子变异对美托洛尔药代动力学的影响更大,呈现基因剂量效应。     

钙通道阻滞剂对肾移植患者环孢素血药浓度/剂量的影响与 CYP3A5 基因多态性有关

目的: 研究CYP3A5基因多态性对合用钙通道阻滞剂(CCBs)患者环孢素(CsA)血药浓度/剂量(C/D) 的影响。方法: 利用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP) 分析技术对 69例肾移植患者 CYP3A5 基因进行分型, 研究患者在合用CCBs后CsA C/D 的差异及与 CYP3A5 基因型的关系。结果: CYP3A5 基因型为 ＊1/＊1、＊1/＊3 和＊3/＊3 型的患者分别有8例、23例和38例。肾移植患者的 CYP3A5 A6986G 多态性(CYP3A5＊3) 发生频率为 71.74%。未用CCBs的CYP3A5＊1/＊3 和CYP3A5＊3/＊3 患者其 CsA CD 分别是野生型患者的 1.73 倍和 2.43 倍,CYP3A5 ＊1/＊1、＊1/＊3 型患者在合用 CCBs 前后CsA 的C/D 明显提高( 19.90±7.66 vs 36.01±8.18, 34.33 ±7.87 vs 46.16 ±9.63 ng·mL^-1 per mg·kg^-1;P <0.01, P <0.05) , 而 CYP3A5 ＊3/＊3 型患者CsA的C/D无明显变化(48.27±10.60vs 46.42 ±9.24 ng.mL^-1 per mg·kg^-1)。结论: CCBs对肾移植患者CsA 的 C/D的影响与 CYP3A5基因多态性相关。     

CYP2B6 基因多态性及其功能意义的研究进展

CYP2B6 是一个在药理和毒理学上均占有重要地位的代谢酶, 参与约7 %临床上常用药物代谢, 其中包括一些治疗窗较窄的药物。CYP2B6具有高度基因多态性, 在基因编码区和非编码存在许多单碱基突变。到目前为止, 已发现并被命名的等位基因有CYP2B6^*1 ~^*29。本文主要对CYP2B6 的基因多态性、种族差异及其在药物代谢上的功能意义等方面的研究进展进行综述。     

染料木素临床不良反应与CYP1A2、UGT1A7基因多态性研究

目的:探讨染料木素临床不良反应与CYP1A2、UGT1A7基因多态性的相关性。方法:114例健康志愿者随机分为试验组与对照组,试验组分别口服染料木素一个剂量50、100、200mg,每人服药1次,观察3d了解有无不良反应发生;用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(RFLRPCR)扩增基因片段并酶切电泳观察分析CYP1A2G2964A、C734A和UGT1A7Trp208Arg的多态性。结果:试验组及对照组的基因型及等位基因分布差异无统计学意义(P>0.05)。试验组受试者根据有无不良反应的出现分为两组基因,CYP1A2G2964A基因:不良反应组14例受试者中有10例的基因型为G/A(占71.43%),而无不良反应组41例受试者中有22例的基因型为G/G(占53.66%);CYP1A2C734A基因:不良反应组13例受试者中有7例的基因型为C/A(占53.85%),而无不良反应组32例受试者中有16例的基因型为A/A(占50.00%);UGT1A7Trp208Arg基因:不良反应组15例受试者中有12例的基因型为Trp/Trp(占80.00%),并且无不良反应组53例受试者中有32例的基因型也为Trp/Trp(占60.38%)。结论:染料木素不良反应组中CYP1A2G2964A基因以G/A型较高,CYP1A2C734A基因以G/G型较高;UGT1A7基因以TrpTrp型较高。     

以CYP2C19基因多态性指导经皮冠状动脉介入治疗术后抗凝临床疗效观察

目的: 对进行经皮冠状动脉介入治疗术（PCI）的患者体内CYP2C19的基因多态性进行分析,并根据基因分型对术后患者进行不同的抗凝治疗,以观察临床疗效。方法: 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性检测技术对进行PCI手术患者体内CYP2C19的基因型进行分析并分组,分为快、中、慢三种代谢型组,快代谢型组和中间代谢型组在术前24 h内给予负荷剂量氯吡格雷300 mg,之后分别服用氯吡格雷75 mg/d和150 mg/d;对于慢代谢型组起始单次负荷剂量替格瑞洛180 mg,维持量90 mg,bid;上述三组患者术后均联合服用阿司匹林100 mg/d,均连用12个月;观察术后一年内患者主要不良心血管事件的发生率。结果: 178例患者中共检测出5种CYP2C19的基因分型,分别为*1/*1型、*1/*2型、*1/*3型、*2/*2型和*2/*3型;其中快代谢型（*1/*1型）67例,占37.6%,中间代谢型（*1/*2型和*1/*3型）99例,占55.6%,慢代谢型（*2/*2型和*2/*3）12例,占6.8%;术后一年主要不良心血管事件的发生率在三组之间相近（P>0.05)。 结论: CYP2C19基因分型可以用于PCI术后患者的用药指导,对于快代谢型的患者可以给予常规剂量的氯吡格雷,对于发生突变的患者可以考虑增加氯吡格雷的剂量或更换其他抗凝药物。     

安徽地区汉族人群CYP2C9*3和VKORC1-1639G>A基因多态性分布及对华法林稳定剂量的影响

目的：研究CYP2C9*3及VKORC1-1639G>A基因多态性在安徽地区汉族人群中的分布情况及对患者华法林稳定剂量的影响。方法：选取安徽省5个地区6家三级综合型医院2020年1月至2021年12月1 169例患者血液样本,采用原位杂交荧光染色分析技术检测患者CYP2C9*3及VKORC1-1639G>A基因型。结果：1 169例患者CYP2C9*3基因型分布情况：AA型、AC型、CC型基因频率分别为90.16%、9.24%、0.60%;VKORC1基因型分布情况：AA型、AG型、GG型基因频率分别为84.26%、14.71%、1.03%;两基因型在患者性别、年龄及地区分布上差异无统计学意义（P>0.05）;755例达到华法林稳定剂量患者CYP2C9*3 AA基因型华法林日平均剂量（3.02±0.59）mg/d,显著高于AC与CC基因型患者（P<0.05）;VKORC1-1639AA基因型患者华法林日平均剂量（2.72±0.40）mg/d,显著低于AG与GG基因型患者（P<0.05）;达到华法林稳定剂量与未达稳定剂量患者在性别、年龄以及临床诊断上存在统计学差异（P<0.05）。结论：CYP2C9和VKORC1基因型与华法林稳定剂量有关联,以CYP2C9和VKORC1基因型为导向实施临床抗凝治疗,可为华法林个体化用药提供指导。     

CYP2A6*4基因多态性对右美托咪定药动学的影响

目的: 在CYP2A6*4突变频率高的中国人中测定CYP2A6*4等位基因对右美托咪定药代动力学的影响,为临床提供参考。方法: 31名手术患者通过静脉泵接受0.5 μg/kg右美托咪定后,抽取多个时间点的血样,测定血药浓度以及CYP2A6*4的多态性,并进行统计分析。结果: 9名患者为*1/*4或*4/*4,22名患者为*1/*1。主要药代动力学参数如下,曲线下面积（AUC）为（1 396.19±332.47）h·ng·L^-1,峰值血药浓度（C _max）为（495.50±104.90）ng/L,分布容积（V）为（0.68±0.20）L/kg,清除率（CL）为（0.38±0.11）L·h ^-1·kg^-1,分布半衰期（t _1/2α）为（0.05±0.01）h,消除半衰期（t _1/2β）为（2.53±0.04）h。在CYP2A6*1/*1,*1/*4和*4/*4患者中未发现显著的药代动力学差异。结论: 中国患者使用右美托咪定后,t _1/2β与公布的一致,但t _1/2α,V和CL较低。在制定右美托咪定的精准治疗方案时,可不予考虑CYP2A6*4突变。     

体外“鸡尾酒法”研究5-羟基雷公藤内酯醇对人肝微粒体CYP450酶亚型的抑制

目的: 评价(5R)-5-羟基雷公藤内酯醇(T8)在体外对人肝微粒体CYP450酶7种主要亚型CYP3A/5、CYP2D6、CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2B6和CYP2C8的直接抑制作用和时间依赖性抑制作用,为临床药物-药物相互作用研究提供指导。方法: 本实验分别利用IC₅₀和IC₅₀ 偏移进行评价。结果: T8对上述7种亚型的直接抑制IC₅₀ 都高于 100 μmol/L,时间依赖性抑制研究中没有出现 IC₅₀ 偏移。结论: T8对7种主要的CYP450酶亚型没有直接抑制和时间依赖性抑制作用。临床上发生由于T8抑制上述7种亚型的CYP450酶导致的药物-药物相互作用的可能性较小。