生鲜猪肉中沙门氏菌的分离、鉴定及耐药性检测

调查本地区生鲜猪肉中沙门氏菌的污染情况及耐药性情况,为进一步对肉及肉制品中耐药性沙门氏菌的风险评估奠定基础。采集超市和集贸市场的生鲜猪肉,采用实时荧光定量PCR对生鲜猪肉中沙门氏菌污染进行初筛,然后根据沙门氏菌检验国家标准进行分离鉴定,并对分离到的沙门氏菌进行耐药性检测。结果从83份肉样中分离到21株沙门氏菌,沙门氏菌检出率为25.3%。21株沙门氏菌中有7株对11种抗生素中的至少一种产生耐药性,耐药率33.3%。结果表明本地区生鲜猪肉微生物污染较为严重,沙门氏菌检出率较高且四环素耐药严重;另外在菌落总数和沙门氏菌检出率方面冷却肉的质量好于热鲜肉,超市和集贸出售的肉的质量无显著差异。     

动物源性食品中抗生素残留、耐药细菌的分布及耐药基因的水平传播

目的：调查动物源性食品中抗生素的残留、耐药细菌的分布及抗生素对耐药基因水平转移的影响。方法：利用盐析辅助液液萃取/高效液相色谱/串联质谱法对市售动物源性食品中18种抗生素的含量进行检测;对样品中的需氧菌进行分离鉴定,利用PCR技术调查耐药基因的分布,通过接合转移试验调查抗生素胁迫对耐药基因水平传播的影响。结果：50份动物源性食品中检出环丙沙星、恩诺沙星、土霉素、金霉素、磺胺嘧啶和磺胺二甲嘧啶。162株分离株中磺胺甲基异恶唑耐药基因sul1的检出率最高。在环丙沙星胁迫下,三株供体菌中耐药基因qnrS的接合转移率均高于对照组。结论：动物源性食品中喹诺酮类、磺胺类和四环素类抗生素均有不同程度的残留。亚抑菌浓度抗生素促进耐药基因的接合转移。     

成都周边某奶牛养殖场及市售生鲜牛肉中产志贺毒素大肠埃希菌监测与分析

目的 通过连续3年监测成都周边某奶牛养殖场犊牛和成年牛粪便、饲养环境及菜市场和超市生鲜牛肉中的产志贺毒素大肠埃希菌（STEC）,了解本地区牛及牛肉中STEC菌株的携带及菌株特征情况,为评估该地区STEC污染状况、感染风险及防控策略提供科学依据。方法 采用荧光定量PCR法分离鉴定STEC,采用微量肉汤稀释法进行药敏试验。分离株全基因组测序后在EnteroBase数据库上获得MLST型别、菌株类型、血清型、毒力基因信息,使用Abricate软件比对得到stx亚型信息。用BioNumerics 7.6软件进行cgMLST聚类分析。结果 2019—2021年共采集奶牛养殖场牛粪和环境样品247份,25份检出STEC,检出率10.12%;采集生鲜牛肉294份,32份检出STEC,检出率10.88%;共分离到57株STEC。检出STEC菌株对氨苄西林耐药率最高,达42.11%（24/57）,其次为头孢噻肟和头孢唑啉（均占比38.60%,22/57）。多重耐药株占35.09%（20/57）。57株STEC共分离出30种血清型,其中可引起暴发的血清型有：O26：H11、O103：H25、O145：H12。通过毒力基因分析发现具有致病风险的亚型有：stx2a、stx2c、stx2d、stx2e、stx2g以及stx2k;及与疾病的严重程度密切相关eae-STEC及STEC/ETEC杂合株。结论 2019—2021年奶牛养殖场牛粪便和菜市场生鲜牛肉中STEC的污染持续存在。犊牛粪便检出率（21.43%）高于成年牛粪便检出率（0.91%）。菜市场生鲜牛肉STEC检出率高于超市。牛粪便中分离菌株比牛肉中分离菌株耐药情况严重。部分分离菌株因携带强毒力基因或其他致病相关基因而具有更强致病性。     

天津地区乳房炎奶样中金黄色葡萄球菌耐药性研究

为了解天津地区奶牛乳房炎中金黄色葡萄球菌的致病情况以及对抗生素药物的敏感性,为科学治疗奶牛乳房炎提供参考以及防控兽药残留提供依据,采用甘露醇高盐培养基和冻干兔血浆对采自天津地区7个牛场50个样品进行分离鉴定,采用纸片扩散法进行药敏试验。经分离鉴定确定分离29株金黄色葡萄球菌,4株其他致病性葡萄球菌。对分离出的金葡菌进行8类29种常用抗生素的耐药性分析。对金黄色葡萄球菌分离株进行PCR扩增耐药基因,并通过琼脂糖凝胶电泳进行检测。结果表明,29株金葡菌分离株对8类29种常用抗生素均有不同程度耐药性。其中对大环内酯类、林可酰胺类药物耐药率普遍较高,平均耐药率为77.01%和89.66%,对β-内酰胺类、喹诺酮类和氨基糖苷类药物耐药率均低于50%。分离株对青霉素G、乙酰螺施霉素和林克霉素表现为完全耐药(100%),对头孢哌酮、头孢噻肟、阿莫西林、氨苄西林、恩诺沙星、新霉素和大观霉素等耐药率在20%~40%之间。分离株的耐药基因检测结果表示,耐药基因阳性检出率普遍小于耐药基因表型的检出率。     

上海市市售水产品中耐碳青霉烯类抗生素细菌分布及耐药基因谱研究

目的 了解上海市市售水产品中耐碳青霉烯类抗生素细菌的分布及抗生素耐药基因谱。方法 采用美洛培南抗性平板筛选上海市市售水产品中耐药性细菌,利用微生物质谱鉴定仪对其进行鉴定,同时对上述分离细菌进行药敏性实验,对多重耐药菌进行全基因组测序,分析耐药基因谱。结果 上海市市售水产品中耐碳青霉烯类抗生素的耐药细菌分离率较高（75.0%~90.5%）,嗜麦芽窄食单胞菌为优势细菌,其次为假单胞菌属、气单胞菌和肠球菌;多重耐药现象比较严重,表现出对头孢类、四环素类、氨苄西林较高的耐药性。全基因组测序结果显示共检测出64个耐药基因,耐碳青霉烯酶基因以bla_NDM-1、bla_OXA55和bla_OXA280为主。结论 上海市市售水产品中耐碳青霉烯类细菌分布较为广泛,同时存在多重耐药现象,且携带的耐药基因谱呈多样性,提示应加强水产品中耐药细菌及耐药基因谱的监测,为食品安全评估提供依据。     

北京市售鸡肉和猪肉中大肠杆菌污染情况及耐药特征分析

目的 分析北京市售生鸡肉和生猪肉中大肠杆菌的污染情况以及耐药表型及耐药基因型。方法 从北京市辖6个区的大型超市和农贸市场随机采集259份生鲜肉类样品（鸡肉168份、猪肉91份）,增菌后分离大肠杆菌,并使用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱和16 s rRNA测序对分离菌株进行鉴定。对分离菌株进行药物敏感性测定和全基因组测序,对耐药基因和耐药表型进行比较分析。结果 从259份样品中分离出169株大肠杆菌,检出率为65.25%,其中鸡肉和猪肉中大肠杆菌的检出率分别为77.38%和42.86%。药敏试验结果表明大肠杆菌对甲氧苄氨嘧啶-磺胺甲恶唑（鸡肉83.33%,猪肉91.67%）高度耐药,其次是多西环素（鸡肉32.35%,猪肉38.89%）,同时,它们对庆大霉素、妥布霉素、头孢噻肟、黏菌素等药物都呈现出了不同程度的耐药性。耐药基因分析发现β-内酰胺类基因ampC1与ampC2携带水平最高,检出率分别为93.10%、98.28%,另外也检测到ESBL、NDM-1、mcr-1等重要耐药基因,其中bla_TEM-1D和blaCTX-M_-9是主要存在的ESBL耐药基因。结论 目前北京市售鸡肉存在较为严重的大肠杆菌污染,分离菌株呈现复杂的耐药表型并携带多样的耐药基因,应加强对生鲜肉类样品的微生物污染和细菌耐药性控制,尤其是产ESBL耐药大肠杆菌,为预防控制由其引起的食源性疾病提供科学依据。     

江苏省鸡肉产品中弯曲菌耐药特征及Ⅰ型整合子分析

为探讨鸡肉产品中弯曲菌的耐药特征,本研究以2016~2017年分离于江苏省市售鸡肉中弯曲菌分离株为研究对象,采用K-B纸片扩散法测定分离株对9大类21种抗生素的敏感性,同时应用PCR法检测Ⅰ型整合子的整合酶基因、3’-CS以及可变区耐药基因。研究显示:弯曲菌分离株对环丙沙星、头孢噻肟、氧氟沙星、卡那霉素、氨苄西林耐药率较高,分别为83.16%、80.0%、68.0%、65.0%和64.2%。47.3%(45/95)的菌株为Ⅰ型整合酶基因阳性,10株分离株具有3’-CS端,其中5株分离株为可变区阳性,其耐药基因盒为aad A1。结论:鸡肉产品中分离到的弯曲菌多重耐药现象严重,整合子介导的多重耐药在江苏地区并不是主导的耐药机制,但其携带的耐药基因可在不同细菌间传递从而通过食物链传递给人类,应严格监测鸡肉产品中弯曲菌的耐药特征及Ⅰ型整合子的流行情况。     

食源性沙门氏菌耐药表型与耐药基因的研究

为了解食源性沙门氏菌（Salmonella）的耐药状况以及耐药基因与耐药表型的关系,从基因水平上探究Salmonella的耐药机制。本研究对215 株分离自1 093 份市售新鲜肉类中的Salmonella进行了耐药状况检测,设计了16 种引物对耐药基因进行聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增,并对扩增产物进行克隆测序。结果显示,分离株对磺胺异恶唑耐药率最高（71.7%）,其次为四环素（69.8%）、甲氧嘧啶（67.9%）和复方新诺明（52.8%）,分离株对环丙沙星、呋喃妥因和头孢类比较敏感。三重及以上耐药的菌株占60.5%,最多可以耐受13 种抗生素;PCR共扩增到10 种耐药基因,测序结果表明扩增到的序列与GenBank上相应参考序列的相似性均在99%以上;β-酰胺类以及四环素类的耐药基因检出情况与耐药表型具有很高的一致性,符合率均在90%以上,其次为磺胺类（81.6%）。说明本研究中的食源性Salmonella分离株的耐药率高,多重耐药情况较为严重,耐药表型与耐药基因检测结果基本一致。     

广州市售散装熟肉制品中细菌的耐药性及耐药基因研究

本文以广州市售散装熟肉制品为研究对象,通过16S rDNA序列分析及生理生化试验对菌株进行鉴定,同时检测菌株对四环素和复方新诺明的耐药性及耐药基因的分布。40份熟肉制品中共筛选出169株细菌,其中肠杆菌属、假单胞菌属和柠檬酸杆菌属所占比例较大。所有分离株中有55株(32.54%)对四环素表现出耐药,40株(23.67%)对复方新诺明表现出耐药。在7种四环素耐药基因中,tetM(14.20%)的检出率为最高,其次分别为tetA(10.06%)、tetS(5.92%)和tetB(2.96%);磺胺类耐药基因中sulI的检出率最高,为10.65%。169株受试菌中有19株(11.24%)同时含有两种或两种以上耐药基因。熟肉制品中耐药菌株及相关耐药基因的广泛分布表明这些食源性细菌已成为潜在的耐药基因库,并且可能通过食品链将耐药性传递给人类,从而引起人类的感染以及耐药菌株的流行。     

2015~2018年北京市食源性金黄色葡萄球菌耐药性分析

目的 掌握北京市食源性金黄色葡萄球菌对常用抗生素的耐药谱和耐药趋势。方法 收集2015?2018年北京市食源性致病菌监测网分离到的金黄色葡萄球菌103株, 采用CLSI推荐的微量肉汤稀释法检测金黄色葡萄球菌对11种常用抗生素的敏感性。结果 103株菌中有102株表现为对至少1种抗生素耐药, 耐药率排在前三位的是青霉素、红霉素和克林霉素, 其中对青霉素的耐药率最高, 为99.0%。检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌8株, 占7.8%, 未见万古霉素耐药株。45.6%(47/103)的菌株同时耐受3类和3类以上抗生素, 表现为多重耐药, 同时耐受抗生素种类最高为7类。共存在26种耐药谱, 优势耐药谱为青霉素、青霉素-红霉素-克林霉素-复方新诺明-庆大霉素和青霉素-红霉素。结论 2015~2018年北京市食源性金黄色葡萄球菌整体耐药水平较高, 且多重耐药情况严重, 并出现MRSA株, 应继续加强北京市食源性金黄色葡萄球菌的耐药性监测。     

市售鸡肉及内脏中磺胺耐药菌污染特征

为评价抗生素耐药基因通过市售鸡肉产品进行迁移的风险,从上海5个大型超市和综合市场采集的9个鸡肉样品和4个内脏样品中分离对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶不敏感的细菌(Sul/Trir),研究其耐药特征,并用Southern杂交对耐药基因进行定位。结果表明,所有样品均分离到了Sul/Trir菌,菌落数为2.0×102~1.0×107 CFU/g,占总可培养菌的1.42%~82.00%。297株Sul/Trir菌的多重耐药现象普遍,耐药基因sul1、sul2、tetA、tetB、tetC、tetE、tetG、tetL、tetM和intI的检出率分别为11.33%、32.81%、6.64%、12.89%、2.73%、6.25%、9.38%、18.75%、39.84%和28.52%。耐药基因的寄主菌包括Escherichia sp.、Pedobacter sp.、Staphylococcus sp.、Enterococcus sp.、Sphingobacterium sp.和Acinetobacter sp.等,大多数的磺胺最小抑菌浓度大于512 μg/mL,其中一株葡萄球菌的质粒上有sul2基因。综上,耐药菌和耐药基因可能通过市售鸡肉及内脏产品进行迁移。     

食源性乳酸菌安全性的评价

从不同来源的样品中分离得到36 株乳酸菌,对其进行常见抗生素如氯霉素、四环素、红霉素抗药性分析,结果表明,26 株菌具有抗药性,其中4 株携带抗生素抗性基因,并且菌株Enterococcus faecium KN9所携带的四环素抗性基因tet（M）和tet（L）能通过接合作用,转移到受体菌Lactococcus lactis MG1614中。对这些乳酸菌产生有害代谢产物分析结果表明,部分菌株可以产生生物胺,所有的菌株都不产生硝基还原酶和偶氮还原酶。所以,本实验分离到的大部分乳酸菌是安全的,只有携带有抗四环素基因的E. faecium KN9具有潜在的安全隐患。因此,需要在食用前对乳酸菌进行安全性评价,以减少可能的安全隐患。     

全基因组测序分析2018年江西省临床分离非伤寒沙门菌耐药性研究

目的 掌握2018年江西省食源性疾病病例的非伤寒沙门菌分离株的耐药特征、耐药表型与耐药基因之间的对应关系,评价全基因组测序(whole genome sequencing,WGS)技术在耐药监测的应用前景。方法 本研究以2018年江西省食源性疾病病例分离的58株非伤寒沙门菌为研究对象,用微量肉汤稀释法检测菌株对14种抗菌药物的耐药性,对58株非伤寒沙门菌进行WGS,拼接后的序列经过与ResFinder数据库比对,注释耐药基因。结果 58株非伤寒沙门菌对四环素耐药率最高(77.59%,45/58),其次是氨苄西林(72.41%,42/58),对亚胺培南全部敏感。耐3类及3类以上抗生素的多重耐药菌株占56.90%(33/58),最高为6重耐药菌株占3.45%(2/58)。58株非伤寒沙门菌共筛选出47种11类耐药基因,喹诺酮耐药决定区(quinolone resistance-determining region, QRDR)存在gyrA、gyrB和parC基因突变。菌株对氨基糖苷类耐药基因携带率最高为100.00%(58/58),其次是四环素类耐药基因 携带率为72.41%(42/58),大环内酯类耐药基因携带率最低为3.45%(2/58)。携带3类及3类以上耐药基因的菌株占77.59%(45/58),1.72%(1/58)菌株最高携带9类耐药基因。58株非伤寒沙门菌的药敏试验结果与检测出的已知耐药基因总体符合率达93.43%(611/654)。除喹诺酮类外,其他类别的抗生素耐药表型与耐药基因符合率均高于91%,部分种类的抗生素耐药表型与基因符合率达100%。结论 非伤寒沙门菌耐药现象较为严重,其耐药表型与耐药基因有很高的一致性,WGS可作为预测沙门菌耐药性的有效手段。     

Prevalence, antibiotic resistance, and molecular characterization of Salmonella serovars in retail meat products

The prevalence of Salmonella was determined in chicken meat (n = 26), beef (n = 49), and pork (n = 56) collected from wholesale markets, retail stores, and traditional markets in Seoul, South Korea, in 2009. Antibiotic resistance was assessed, and the molecular subtypes of Salmonella isolates were ascertained using an automated repetitive sequence-based PCR (rep-PCR) system (DiversiLab). A total of 18 Salmonella strains were isolated from 17 of 131 samples: 16 strains from each of 16 samples and 2 strains from the same pork sample. The prevalence of Salmonella from the retail meats was 2.0% in beef, 8.9% in pork, and 42.3% in chicken meat. Among 10 different serotypes, Salmonella enterica Panama was recovered from a beef sample, and Salmonella London and Salmonella Montevideo were the predominant serotypes from pork and chicken meat, respectively. The highest antibiotic resistance observed was to erythromycin (100%) followed by streptomycin (22.2%) and tetracycline and chloramphenicol (16.7%). Of the 18 isolates, 5 (27.8%) were resistant to two or more antibiotics, and 1 isolate from chicken meat was resistant to eight antibiotics, including cephalosporins. Differentiation between all of the Salmonella isolates except between Salmonella Montevideo and Salmonella London was successfully performed with the automated rep-PCR system, indicating that it can be added to the toolbox for source tracking of foodborne pathogens associated with outbreaks.     

乌鲁木齐牛羊肉源沙门氏菌对喹诺酮类药物的耐药状况及相关基因分析

目的:研究牛羊肉源沙门氏菌对15种抗生素的药敏性以及对喹诺酮类药物的相关耐药基因,更好地了解沙门氏菌耐药性的产生和传播途径,为预防与控制沙门氏菌疾病提供基础信息。方法:用琼脂稀释法测定沙门氏菌的药敏性,用聚合酶链式反应和基因序列测定法确定耐药沙门氏菌中与喹诺酮类抗生素耐药相关的喹诺酮类抗性决定区基因突变及质粒携带的耐药基因。结果:30株沙门氏菌中对甲氧苄啶、氯霉素、萘啶酮酸、四环素、磺胺异甲二唑、链霉素、甲氧嘧啶/磺胺异恶唑、阿莫西林、氨苄西林的耐药率分别为100%、86.7%、66.7%、60.0%、50.0%、33.3%、26.7%、6.7%、6.7%,对环丙沙星、头孢曲松、庆大霉素、卡那霉素、头孢西丁、阿米卡星均表现为敏感;qnr B、qnr A、qnr S、aac(6′)-Ib-cr基因的检出率分别为5.0%、45.0%、0%、5.0%;30株沙门氏菌发生gyr A基因突变的菌株数为14株,主要突变类型是Ser83Phe,发生par C基因突变的菌株数为25株,主要突变类型是Thr57Ser。结论:乌鲁木齐牛羊肉源沙门氏菌的耐药情况较为严重,对喹诺酮类药物的耐药状况应当予以关注,其耐药突变基因及质粒携带的耐药基因在一定程度上是导致沙门氏菌耐药的重要原因。     

食源性普罗威登斯菌的分离鉴定和耐药性研究

本文研究了食源性普罗威登斯菌在肉类食品中的的分布,以及其耐药表型与I型整合子的携带状况。本文采集了市售猪肉、鸡肉和牛肉等肉类食品,对普罗威登斯菌进行分离与鉴定;采用纸片扩散法对已分离鉴定的普罗威登斯菌进行药敏实验;利用聚合酶链式反应技术筛选携带I型整合子的菌株。结果表明,85份样品中,有38份样品检出普罗威登斯菌,检出率达44.70%。38株普罗威登斯菌中,有44.74%的分离株是多重耐药菌株,最多耐6种抗生素。有两株普罗威登斯菌携带I型整合酶,一株拉氏普罗威登斯菌携带耐药基因盒。这是在国内肉类食品分离的普罗威登斯菌中首次发现I型整合子阳性菌株,表明食品中这种携带有多重耐药的菌株有可能通过食物链向人类传播,是对人类健康造成威胁的潜在危险因素。     

Antibiotic Resistance Traits and Molecular Subtyping of Staphylococcus aureus Isolated from Raw Sheep Milk Cheese

The main objective of the present research was to evaluate the antibiotic resistance profiles of Staphylococcus aureus isolated from raw sheep milk cheese. A total of 150 strains were isolated from curd cheese samples and identified as S. aureus. The survey on antibiotic resistance was carried out on 47 strains, selected among isolates showing differences in the banding pattern after Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE) screening or, belonging at the same pulsotype but isolated from different cheese samples. On selected strains antimicrobial resistance against ampicillin, penicillin, cloxacillin, tetracycline, erythromycin, and vancomycin was assessed by broth microdilution method. The presence of the genes coding for antibiotic resistance and virulence factors (agr alleles, sea‐see, and tst) was also investigated by PCR. Thirty‐one isolates belonging to agrI and agrIII groups carried at least one gene coding for enterotoxins or toxic shock syndrome toxin. Approximately 60% of the selected strains were susceptible to the tested antibiotics. Twelve of 47 isolates showed multiple resistance against ampicillin and penicillin. Only 1 strain, represented by a unique PFGE profile showed simultaneous resistance to ampicillin, penicillin and cloxacillin. Single resistance against tetracycline was found in 5 isolates belonging to 2 different pulsotypes. The results of this study suggest that the recovery of S. aureus resistant strains in raw milk cheese samples is quite common but it is limited to few antibiotic classes, mainly β‐lactams and tetracyclines. None of the strains showed resistance to erythromycin and vancomycin.     

北京市食源性非伤寒沙门菌的分子分型和耐药性研究

目的了解北京市食源性非伤寒沙门菌的分子特征及耐药情况。方法对2004—2010年北京市食源性致病菌监测网收集的100株沙门菌进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型和抗生素敏感性检测。结果 100株非伤寒沙门菌通过PFGE分型分为62个不同的带型,每个带型包含1~11株菌。抗生素敏感性结果显示,100株菌中有55株菌表现为对至少1种抗生素耐药,其中多重耐药菌株15株。菌株对各抗生素的耐药率为萘啶酸40%、四环素30%、氯霉素15%、庆大霉素10%、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑10%、环丙沙星9%、头孢西丁1%、头孢噻肟0%。结论沙门菌PFGE带型和耐药谱均与血清型存在很高的一致性。提示北京市食源性非伤寒沙门菌的耐药情况比较严重,开展对该菌分子分型与耐药特征分析的联合监测意义重大。