槲皮素对BGC823胃癌细胞p53、Bcl-2/Bax、PCNA表达影响与抑癌作用研究

目的：观察槲皮素对胃癌细胞BGC823生长及p53、Bcl-2／Bax、PCNA的影响。方法：以台盼蓝拒染法计数胃癌细胞的生长抑制率，透射电镜从形态变化上了解凋亡的发生，流式细胞术检测细胞周期变化，免疫细胞化学检测p53、Bcl-2／Bax、PCNA蛋白的表达。结果：台盼蓝拒染法计数显示槲皮素抑制BGC823细胞增殖的作用明显，且呈浓度和时间依赖性，槲皮素处理48h后的Ic50为28．12μm。形态学检测显示出细胞凋亡的特征变化，流式细胞仪检测表明经10—20μm／L的槲皮素处理，BGC823细胞周期阻滞于S期，药物浓度呈正相关。细胞呈现核固缩、染色质边集、凋亡小体形成等典型凋亡表现。经槲皮素处理后BGC823细胞株bax蛋白表达明显增加，bcl-2、PCNA、p53蛋白表达降低。结论：槲皮素能抑制胃癌细胞的生长，呈时间剂量依赖性，能诱导BGC823发生凋亡，使细胞周期阻滞于S期，抑制增生与诱导凋亡的机制可能与下调p53、PCNA的表达，降低bcl-2／Bax比值有关。     

Salubrinal保护心肌细胞内质网应激凋亡的实验研究

目的探讨Salubrinal对衣霉素诱导的乳鼠原代心肌细胞凋亡的保护作用及机制。方法采用消化贴壁法获得乳鼠原代心肌细胞,分别给与不同浓度的Salubrinal(10μmol、20μmol、40μmol)预处理,30min后加入TM(5μg/ml),继续培养24h后通过流式细胞和TUNEL检测方法对乳鼠心肌细胞凋亡进行检测;Western印迹法检测凋亡过程中Caspase-12蛋白酶的表达变化。结果经Salubrinal预处理的细胞同单独使用衣霉素相比,细胞凋亡率和细胞凋亡指数均显著下降;Caspase-12表达明显减少。结论Salubrinal对衣霉素诱导的乳鼠原代心肌细胞凋亡具有保护作用,其机制可能是通过抑制内质网应激凋亡通路。     

组蛋白乙酰化/去乙酰化在冬凌草甲素诱导Molt-4细胞凋亡中的作用

目的:探讨组蛋白乙酰化/去乙酰化在冬凌草甲素(oridonin,Ori)诱导Molt-4细胞凋亡中的作用.方法不同浓度Ori(2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L)作用于Molt-4细胞,MTT法检测细胞增殖;瑞氏染色光镜下观察细胞形态学变化;Western blot检测Caspase-3、组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylase inhibitor,HDAC1)及组蛋白H3乙酰化水平.结果:Ori抑制Molt-4细胞增殖,诱导细胞凋亡,呈时间-剂量依赖性;光镜下Molt-4细胞染色质固缩,凋亡小体出现.Ori活化Caspase-3,下调HDAC1表达,使组蛋白H3乙酰化水平上调.结论:Orr可能通过提高组蛋白H3乙酰化水平,抑制HDAC1活性诱导Molt-4细胞凋亡.     

改良游离细胞扫描电镜制样方法适用于凋亡细胞观察

利用常规游离细胞扫描电镜制样方法制备的凋亡细胞样品,镜下凋亡检出率较低,细胞容易脱落变形,不能满足观察要求。本文采用200μmol／L双氢青蒿素作用前列腺癌PC-3细胞48h,诱导细胞凋亡;通过改良的制样方法制样并观察凋亡细胞超微结构。结果显示,凋亡细胞和凋亡小体阳性率明显提高,细胞贴附紧密、分布均匀,凋亡细胞超微结构比透射电镜更直观形象。     

刚地弓形虫培养上清对人肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的作用

目的:研究刚地弓形虫RH株培养上清对体外培养的肝癌细胞HepG2增值的影响,并探讨其可能的影响机制.方法:取对数生长期的HepG2细胞,分别接种于96孔细胞培养板及50mL培养瓶中,加入200μL不同数量(3×107/mL、6×107/mL、12×107/mL)弓形虫RH株速殖子培养上清孵育24、48、36、72h后,四甲基氮噻唑蓝(MTT)法检测其对HepG2细胞增殖抑制作用;不同浓度弓形虫培养上清作用HepG2细胞48h后,DAPI染色,荧光显微镜观察细胞核形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞内钙离子浓度([Ca2+]i),Western-blot检测凋亡HePG2细胞内Caspase-3的表达.结果弓形虫培养上清能抑制HepG2细胞株增殖和诱导其凋亡,且呈时间剂量依赖性,各实验组与对照组比较有统计学意义(P＜0.05);HepG2细胞凋亡率和[Ca2+]i随浓度增加逐渐增加,12×107/mL时凋亡率和[Ca2+]i分别达到41.46％、128.4(荧光计数单位);Caspase-3的表达随上清浓度增加表达增强.结论:刚地弓形虫培养上清能够抑制肝癌HepG2细胞增殖,其诱导HepG2细胞凋亡可能与细胞内钙离子浓度上调和Caspase-3的表达增强相关.     

毫米波辐照诱导鼻咽癌细胞凋亡及分子机制的实验研究

采用细胞计数、光镜和FOM等方法检测毫米波对人鼻咽癌CNE1细胞增殖、细胞凋亡及相关基因表达的影响,结果发现：波长为7.1mm,频率为42.2GHz,功率密度为1mW/cm^2的毫米波辐照,1次／日,30min／次,照射4次,能显著抑制CNE1细胞增殖和克隆形成;并诱导细胞凋亡,光镜下可见到明显的凋亡细胞,FCM示调亡百分比显著增加。FCM结果表明其增殖抑制作用与P21表达上调及Cyclin D1表达下调有关,其调亡诱导机制可能是非P53依赖的途径,而主要通过上调c-Myc、下调Bcl-2和Fas基因的表达来实现。     

5-杂氮-2’-脱氧胞苷调控UCHL1基因表达对人前列腺癌PC-3细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨5-杂氮-2’-脱氧胞苷（5-Aza—CdR）对人前列腺癌细胞（PC-3）株增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法以2．5、5．0、10．0kenol／L的5-Aza—CAR作用于PC-3细胞48h后,采用流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率;逆转录聚合酶链式反应（tiT—PcR）检测UCHL1 mRNA表达;甲基化测序聚合酶链反应（BsP）检测UCHLlCpG岛的甲基化状态;蛋白质印迹法（Western Blot）检测UCHL1蛋白的表达。结果：5-Aza—CAR对PC-3细胞生长有抑制作用;与对照组相比细胞凋亡率明显增高（P〈0．01）;5-Aza—CdR处理细胞后UCHL1的启动子甲基化水平明显降低（P〈0．01）;UCHL1 mRNA表达水平显著上调（P〈0．01）;UCHL1蛋白表达水平上升（P〈0．01）。结论：5-Aza—CAR能诱导前列腺癌PC-3细胞株凋亡的作用,其机制可能是5-Aza—CdR能逆转PC-3细胞UCHLl启动子CpG岛的异常甲基化,诱导mRNA转录和蛋白的表达。     

NF-κB在冬凌草甲素诱导急性淋巴细胞白血病Molt-4细胞凋亡中的作用

目的:探讨核因子-κB(nuclear factor-KB,NF-κB)在冬凌草甲素(Oridonin,Ori)诱导急性淋巴细胞白血病Molt-4细胞凋亡中的作用.方法Ori单用或联合NF-κB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC,50μmol/L)处理Molt-4细胞,MTT法检测细胞增殖的变化,流式细胞术检测细胞凋亡,Westem blot技术检测NF-κB p65蛋白表达水平.结果Ori对Molt-4细胞生长有显著抑制作用,可诱导细胞凋亡并抑制NF-κBp65蛋白表达,PDTC增加了Ori的上述作用.结论:Ori可诱导Molt-4细胞凋亡,其机制可能与抑制NF-κB活性有关.     

Nd:YAG激光照射对培养癜痕疙瘩成纤维细胞凋亡相关基因表达的影响

目的：探讨Nd：YAG激光诱导癜痕疙瘩成纤维细胞凋亡的机制。方法：以波长1064nm、功率密度100mW／cm^2的Nd：YAG激光照射培养瘢痕疙瘩成纤维细胞，采用流式细胞仪测定细胞凋亡和Bcl-2，P53和survivin蛋白的表达。结果：在培养增生性瘢痕成纤维细胞有Bcl-2，P53和survivin蛋白低表达，Nd：YAG激光照射后，Bcl-2和survivin表达降低，P53的表达无变化。结论：Nd：YAG激光诱导的瘢痕成纤维细胞凋亡与Bcl-2和survivin表达蛋白有关。     

绿茶多酚对鱼藤酮致PC12细胞损伤保护作用的研究

目的:建立鱼藤酮诱导的帕金森病细胞模型,观察绿茶多酚对细胞活性、凋亡指标及多巴胺(DA)含量的影响。方法:以高度分化的PC12细胞作为细胞模型,采用鱼藤酮诱导细胞损伤,用不同浓度的绿茶多酚及阳性药B型单胺氧化酶抑制剂司来吉兰预处理后,再分别用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性、流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率,测定caspase-3活性和多巴胺的含量,并对结果进行统计学分析。结果:绿茶多酚预处理组(5、15、45μmol/L)和司来吉兰(50μmol/L)预处理组的细胞活力均显著高于鱼藤酮对照组(2.5μmol/L)。流式细胞仪检测结果显示,鱼藤酮对照组、绿茶多酚(51、5、45μmol/L)预处理组、司来吉兰(50μmol/L)预处理组、正常对照组的细胞凋亡率依次为(28.7±1.8)%;(15.8±1.2)%(、10.2±1.3)%、(3.2±0.6)%;(7.24±1.0)%和(1.2±0.3)%。与鱼藤酮对照组相比,绿茶多酚处理组也能降低细胞caspase-3活性。绿茶多酚预处理后,可以增加鱼藤酮诱导PC12细胞模型中的DA含量,但仍然低于正常对照组。结论:绿茶多酚能抑制鱼藤酮诱导的PCI2细胞损伤,其神经细胞保护作用可能与抗凋亡蛋白,维持多巴胺含量有关。     

海藻硫酸多糖对HPM辐射致GC-2细胞损伤保护作用研究

探讨了海藻硫酸多糖(SP)对高功率微波(HPM)致小鼠精母细胞系GC-2细胞的损伤防治作用及其机制,为新型抗电磁辐射药物开发提供基础。将GC-2细胞分为药物组、药物对照组、辐射组和正常对照组,采用平均功率密度为30 mW/cm2的S波段HPM辐照15 min,药物组和药物对照组于照射前24 h加入SP(终浓度25μg/ml)。辐照后立即检测细胞的活性氧(ROS)、凋亡相关蛋白Caspase3、p53、Bax和Bcl-2及氧化应激信号通路MAPK中蛋白p-38MAPK和p-JNK1/2等指标的活化,并于1 h、3 h、6 h、12 h、24 h检测细胞活力。与正常组相比,辐照后6 h辐射组细胞活力显著降低,细胞即刻的ROS、Caspase3、p53、Bax、p-38MAPK和p-JNK1/2表达显著升高,Bcl-2显著降低;与辐射组相比,药物组和药物对照组细胞即刻的ROS、Caspase3、p53、Bax、p-38MAPK以及p-JNK1/2的表达显著降低,Bcl-2显著升高。结果表明,30 mW/cm2 S-HPM辐射可引起GC-2细胞产生氧化应激损伤,预防性给予SP可通过抗氧化机制对HPM辐射损伤起保护作用。     

汉防己甲素对兔眼角膜基质细胞增殖和凋亡作用的比较研究

目的：探讨汉防己甲素（Tet）对离体兔眼角膜基质细胞抑制增殖作用,及其对增殖率和凋亡率的作用程度比较。方法：选用原代及传代兔角膜基质细胞,实验组加入含不同浓度Tet的培养液,对照组加入含等量PBS的培养液。通过免疫细胞化学技术了解细胞的PCNA表达来枪测细胞增殖情况,计算增殖率并测定变化;流式细胞仪（FCM）测定细胞周期和凋亡率的变化。结果：Tet质量浓度为2μg／ml,3μg/ml,4μg／ml时,作用48h,随着Tet浓度的增大,PCNA阳性细胞数明显减少,角膜基质细胞的增殖率呈递减趋势,存在剂量一效应关系（P〈0．05）;FCM结果显示,随着Tet的浓度增大,实验组G0／G1期细胞增加,细胞删期阻滞在G1期,见细胞凋亡峰,凋亡率也随浓度增大而升高（P〈0．05）;Tet对增殖率影响的曲线斜率绝对值明显大于对调亡率作用的斜率绝对值,结论：Tet对角膜基质细胞的PCNA的表达具有明显抑制作用,随Tet浓度增大,角膜基质细胞的增殖率下降,Tet通过将细胞阻滞在G1期而发挥其抗增殖作用,且存在剂量效应关系;Tet诱导细胞凋亡,且也存在剂量效应关系,随浓度增大,凋亡率增加;在2μg/ml．3μm/ml,4μg／ml的浓度内,Tet对角膜基质细胞同时具有抑制增殖和诱导凋亡作用,但以抑制增殖作用为主.     

辛伐他汀对A549细胞阿米洛利敏感型钠离子通道α亚基表达的影响

目的;通过体外给药的方式观察辛伐他汀对人类肺泡上皮细胞（A549细胞代替）膜上阿米洛利敏感型钠离子通道α亚基（ENaC-α）表达的影响。方法：细胞株培养,分为空白组、2.5μM组、5μM组、10μM组,培养24小时,western blot检测ENaC-α膜蛋白表达,RT-PCR检测ENaC-αmRNA表达。结果：结果显示：2.5μM组ENaC-α膜蛋白与空白组无明显差别（P〉0.05）,5μM组高于空白组（P〈0.05）,10μM组明显高于空白组（P〈0.01）;2.5μM组ENaC-αmRNA与空白组无明显差别（P〉0.05）,5μM组表达增加（P〈0.05）,10μM组显著增加（P〈0.01）。结论：大剂量辛伐他汀增强A549细胞膜上ENaC-α膜蛋白及mRNA的表达。     

黄芪甲苷对镉致大鼠支持细胞损伤的保护作用

目的：探讨镉对原代培养大鼠睾丸支持细胞的毒性机制及黄芪甲苷的保护效果。方法：空白对照组、0.5%二甲基亚砜（DMSO）组、镉（50μmol/L）组、镉（50μmol/L）加黄芪甲苷（分别为5、10、20mg/L）组的培养支持细胞用于四甲基偶氮唑盐（MTT）细胞活性实验,DMSO组比较用于验证0.5%DMS0溶剂是否对细...     

姜黄素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

目的：探讨姜黄素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其可能机制。方法：采用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,随机分成假手术组、对照组、100mg/kg姜黄素组及300mg/kg姜黄素组及300mg/kg姜黄素组,分别在脑缺血再灌注后24h处死,观察大鼠神经功能缺失的评分,应用TTC染色观察梗死体积,尼氏染色观察神经元形态结构特征,TUNEL染色计数凋亡神经元,荧光免疫组化及Western-blot检测caspase-3蛋白的表达变化。结果：姜黄素能明显改善大鼠缺血再灌注后的神经功能缺损,缩小梗死体积,明显减少TUNEL染色阳性细胞数,下调caspase-3蛋白的表达。结论：姜黄素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有良好的神经保护作用,这可能与其减少caspase-3的表达,抑制缺钱神经元的凋亡密切相关。     

竹红菌乙素光动力对人舌鳞癌Tca8113细胞杀伤作用的初步研究

目的：本文是用实验的方法,初步探讨中药光敏剂竹红菌乙素（HB）在光动力（PDT）作用下,对体外人舌鳞癌Tca8113细胞的杀伤作用。方法：常规培养、选取对数生长期人舌鳞癌Tca8113细胞,用含有竹红菌乙素（HB）浓度分别为0μM、0．25μM、0．5μ／M、1μM、2μM的RPMI-1640培养液孵育细胞4h后,经470nmLED定制多光源半导体激光光照处理（PDT）,能量密度设置分别为0J／CM^2、1J／CM^2、2J／CM^2、3J／CM^2、4J／CM^2。PDT处理后细胞继续孵育24h后,分别在光学显微镜和荧光显微镜下观察细胞形态学变化,并用甲基噻唑四唑法（MIT法）检测竹红菌乙素（HB）对细胞的抑制作用。并分别在激光照射6h及24h后,用流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果：经PDT处理后细胞在光学显微镜及荧光显微镜下均可观察到细胞坏死和凋亡样改变;在一定浓度范围和光照能量密度范围内,竹红菌乙素（HB）在PDT作用下对人舌鳞癌Tca8113细胞生长增殖的抑制和诱导凋亡作用与药物浓度和能量密度成正相关变化。结论：竹红菌乙素（HB）在光动力（PDT）作用下,对人舌鳞癌Tca8113细胞具有显著的杀伤作用,并在一定范围内呈浓度剂量和光剂量正相关依赖性。     

人参皂苷Rg1协同rhBMP-2对人牙髓干细胞成牙分化作用研究

目的：探讨不同浓度人参皂苷Rg1、重组骨形态发生蛋白2（rhBMP-2）及两者联合应用对体外培养的人牙髓干细胞（DPSCs）成牙分化的影响。方法：酶消化法获得DPSCs,采用碱性磷酸酶（ALP）活性检测和实时荧光定量RT—PCR测定牙本质涎磷蛋白1（DSPP）和牙本质基质蛋白1（DMP1）mRNA的表达以检测不同浓度人参皂苷Rgt（0．1,0．5,2．5,5,10,20μmol／L）及rhBMP-2（25,50,100,200rig／ha）单独及联合应用对DPSCs成牙分化的影响。结果：人参皂苷Rg1（2．5,5和10μmol／L）组的ALP活性明显高于同期对照组（P〈0．001）,5μmol／L组ALP活性明显高于其它浓度组（P〈0．001）;浓度为50,100,200mg/ml的rhBMP-2其ALP活性明显高于同期对照组（P〈0．001）,100ng／ml rhBMP-2组ALP活性最强。联合应用人参皂苷Rg1（5μmol／L）和rhBMP-2（100ng／ml）DSPP和DMP1 mRNA的表达明显高于单独应用组（P〈0．001）。结论：人参皂苷Rg1可促进体外培养的DPSCs成牙本质分化,人参皂苷：Rg1协同rhBMP-2能明显增强DISCs成牙本质分化。     

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对人子宫内膜癌JEC细胞生长及形态影响的研究

目的:通过DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人子宫内膜样癌JEC细胞(中分化)中p57^kip2基因启动子区去甲基化干预,研究5-Aza-CdR对JEC细胞生长抑制及形态改变的影响。方法:Ⅰ.用亚硫酸氢盐测序PCR (BSP)法检测不同浓度5-Aza-CdR干预后JEC细胞中p57^kip2基因启动子区甲基化状态。Ⅱ.将实验组分为12.5μmol·L^-1组、12.5μmol·L^-1组(48h换液时追加一次5-Aza-CdR),对照组不加任何浓度的5-Aza-CdR:(1)干预24 h、72 h,倒置显微镜下观察各组细胞的生长情况。(2)干预72 h,电镜观察各组细胞的超微结构改变情况。结果:Ⅰ. JEC细胞中p57^kip2基因启动子区甲基化水平:未加药组(0μmol·L^-1)p57^kip2基因启动子区呈高甲基化状态(88.1%),12.5μmol·L^-1组总体甲基化率最低(76.2%)。Ⅱ. JEC细胞的生长情况及形态改变情况:(1)光镜:对照组JEC细胞呈多角形或不规则形,梁索状、巢团状、小巢状或散在分布,局部形成微腺泡样结构。随着培养时间的延长,细胞密度逐渐增加,微腺泡样结构更加明显。与对照组比较,干预24 h后,两实验组细胞密度均有所减少;干预72 h后,12.5μmol·L^-1组细胞密度仅比对照组略有减少,12.5μmol·L^-1组细胞密度比对照组明显稀少。(2)电镜:对照组JEC细胞呈不规则形,表面可见短小的微绒毛;胞质内可见线粒体、粗面内质网、分泌泡、脂滴和自噬溶酶体等结构;胞核不规则形,以常染色质为主,可见篮网状核仁,偶见核分裂像及凋亡的细胞。干预72 h后,两实验组细胞表面微绒毛均较对照组增多,胞质内分泌泡、自噬溶酶体增多,扩张的内质网腔内充满合成的蛋白质,未见线粒体肿胀,12.5μmol·L^-1组比12.5μmol·L^-1组的结构改变更明显。结论:5-Aza-CdR可下调人子宫内膜样癌JEC细胞中抑癌基因p57^kip2启动子区甲基化水平,从而发挥其抑制JEC细胞生长与增殖的作用,还可使细胞向较好的分化方向转化;浓度为12.5μmol·L^-1的5-Aza-CdR对JEC细胞不具备细胞毒性作用,追加用药比单纯一次用药对JEC细胞生长与增殖的抑制的效果更好。