几种免疫电镜方法在病毒检测中的应用

应用免疫电镜技术(IEM)直接检测病毒和抗体的免疫复合物,对于低浓度病毒的电镜检查具有很大价值。它能有效地提高病毒粒子捡出率,并可根据免疫反应的特异性鉴别病毒,灵敏度高,方法简捷。目前得到公认的方法有吸附法、装饰法、吸附结合装饰二步法、集群法四种,传统的离心沉淀法已趋淘汰。我们以长叶车前草花     

适配器-超速离心法提高电镜检测病毒的灵敏度

通过专用超速离心机将病毒直接离心至载网是重要的提高诊断电镜灵敏度的方法,作者尝试建立适配器-超速离心法实现相同目的。设计制造了外形类似离心管的载网适配器,其内部有一平底的凹槽,可以放置电镜载网,添加病毒悬液后,经过超速离心,能够将病毒粒子直接离心到载网上。利用重组腺病毒和重组腺相关病毒为模式病毒,适配器-超速离心法较悬滴法的病毒检测灵敏度提高了50～200倍;对人腺病毒41型（Ad41）细胞培养物进行电镜检测,灵敏度提高了50倍。如果将免疫凝集法（immune clumping）与适配器-超速离心法相联合进行电镜制样,检测灵敏度较常规免疫凝集法提高1～2个数量级。这些结果说明适配器-超速离心法能够高效地富集病毒,可以应用于病毒的电镜检测工作。     

具有标记靶作用的固相免疫电镜快速诊断法(SPA—G IEM)

目前广泛使用的免疫电镜技术,具有灵敏度高及快速等突出优点,但在实际应用中,尚存在各地结果判断不一致和判断困难的问题。针对这种情况,本文报道了国内首次使用金黄色葡萄球菌(Staphylococcal)菌体,作为标记靶吸附病毒,在电镜下观察的方法(SPA G IEM)。这种方法与常规免疫电镜技术相比,不仅具有免疫电镜的优点,还能有效地避免免疫电镜中,病毒自身聚集与免疫电镜效果二者难区别的缺点。同时也避免免疫电镜形成最佳复合物取决于抗原抗体最适比例的前带效应(Prozont effect)的影响。金黄色葡萄球菌菌体,体积大,电镜下容易识别。用该菌体作为病毒固相载体,可以大大提高观察判断效率。作者认为:这种方法在临床病毒诊断中,具有独特的优点。     

胶体金免疫电镜技术用于植物病毒的检测

胶体金免疫电镜技术具有步骤简便。胶体金探针能精确定位、电镜下分辨率高等优点,给细胞化学标记体系带来了一种改革,近年来越来越多地应用于生物学和医学研究中,如:细胞内某些生物活性物质的定位研究、组织细胞形态发生研究、酶的研究等,但在农业科研中的应用还很少。尤其在病毒检测方面,目前国内只见到以胶体金免疫电镜技术检测动物病毒的报道,而用于植物病毒检测的报道尚无。本文报道了以改良的柠檬酸钠—鞣酸还原法制备大小适于植物病毒标记的胶体金颗粒的方法,制备的胶     

扫描电镜微量血不同制备方法对红细胞的影响

扫描电镜微量血不同制备方法对红细胞的影响洪大蓉，万美玲，宋继志（南京铁道医学院电镜室，南京２１０００９）扫描电镜观察红细胞形态的报导较多。虽采用的制样方法各有差别，但各种方法对形态影响的报导甚少。为了探索既方便、简单又不致影响细胞形态的制样方法，作者...     

苜蓿夜蛾核型多角体病毒超微结构的电镜观察

昆虫核型多角体病毒形态发生的研究,国内外均有许多报导,但关于苜蓿夜蛾核型多角体病毒(简称HdNPV)形态发生的研究还未见报导。本文主要介绍了应用电镜超微技术研究苜蓿夜蛾核型多角体病毒在感染脂肪体细胞中的形态发生及装配过程。图A.示HdNPV多角体外形。图B.经碱解后多角体内的病毒粒子。图C.细胞核内的病毒发生基质     

核酸分子的暗场成象

本文扼要地介绍了暗场成象的基本原理和在核酸分子研究中的应用及其优越性。着重叙述和讨论了样品制备的主要环节和倾斜照明法的成象条件。应用暗场电镜技术和不同的制样方法研究了几种核酸和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的核衣壳,并报导了所取得的初步结果。     

肾综合症出血热(HFRS)病毒的形态学研究

应用铁蛋白和辣根过氧化物酶标记抗体间接法染色免疫电镜超薄切片技术对经Vero E—6细胞从HFRS患者血清中直接分离到的二株病毒(H—8205及H—8278株)的形态作了观察。结果在细胞基质内、胞浆空泡内及细胞外查见为免疫复合物和铁蛋白颗粒或酶反应沉淀物包绕的病毒颗粒,园形或卵园形,平均直径108nm,变化范围50—156nm。颗粒有双层膜结构及表面突起,有的囊膜不连续,有小孔通过,颗粒内部为疏松的细颗粒状及微管状结构。两株病毒在形态上无差别。对照组(包括用正常人血清取代恢复期病人血清的对照)未见到类似     

植物病毒样品的超薄切片技术研究

应用超薄切片技术及电镜检测植物病毒在寄主细胞中内含体的形态,是确认病毒的可靠手段之一。然而由于超薄切片的效果与取样及固定处理程序等有直接关系,植物细胞内含物质对观察病毒在细胞中的存在影响很大,目前常规的生物处理程序,对观察病毒在细胞内的形态都不理想,作者近两年在植物病毒样品的前处理上进行了一系列实验研究。样品先经0.1M磷酸缓冲液(pH7.0)处理12小时,再行常规固定、包埋切片程序,获得了明显效果。选三种病毒材料,萝卜(TuMV)、克里夫兰烟(CMV)、蔓陀岁(PXV)。样品采集后,切成1     

人类腹泻粪便中小圆形病毒的电子显微镜研究

我们在研究婴幼儿急性胃肠炎和腹泻及成人流行性腹泻的病原学时,用直接电镜和免疫电镜技术,从患者粪便标本中检出了4种小圆形病毒颗粒。粪便标本用生理盐水制成20～50％的悬液(水样便可不稀释),经超声波粉碎处理(振幅4μ,每次30秒钟,共3～5次),3000rpm离心30分钟,上清为被检样品。被检样品制备直接电镜或免疫电镜标本,用3％磷钨酸(pH6.4)做负染色。     

一种智能型的病毒检测方法

目前由于传统的病毒检测算法缺乏智能性,因而使得杀毒软件在检测病毒时产生的漏检和误检比率较高,因此解决当前病毒检测算法的智能性十分必要。不论是过去还是现在每种程序都有自身的属性,因此本文从程序属性的角度出发,提出一种基于程序属性的病毒检测算法。该算法以病毒的传染模块具有的属性作为检测未知程序是否为病毒的前提条件。本文提出的病毒检测算法在检测未知程序时分为三步:第一步提取程序的所有属性,第二步将需要检测程序的各种属性值与病毒的特有属性的属性值进行比较。第三步根据比较的结论,再根据实体与属性存在的内在联系来判断该未知程序是不是病毒。本文提出的算法具有一定的智能性,能够作为现有病毒检测算法的补充。     

恒河猴SV_(40)的电子显微镜研究——恒河猴SV_(40)的隐性感染及其原代肾组织培养细胞SV_(40)的电镜观察

SV_(40)即猴乳多空病毒,是猴的一种潜在病毒。SV_(40)对恒河猴的隐性感染,可致原代恒河猴肾组织培养细胞(PRMK)的严重污染,从而影响用PRMK制备的疫苗质量及安全性。目前,国内许多实验室还难以检查PRMK中的SV_(40),故使用电镜检查SV_(40)具有实际价值。本文报告国内使用电镜首次检查到SV_(40)。对所分离到的4株病毒进行阴性染色制样,同时用国际标准SV_(40)及     

免疫复型技术的应用

自Faulk和Taylor(1971)报导应用胶体金电镜免疫金染色研究细胞表面抗原的分布以来,许多学者进一步证实了胶体金作为特异细胞成份的标记物具有许多独特的优点。近年来金探针标记技术得到了飞速发展。在电镜下定位各种抗原准确而不遮盖超微结构,可以说已发展成为常规技术。但是对于不同的样品,不同的实验要求,细胞表面或细胞内标记等,还需要摸索出各自的理想的制样方法才能达到预期目的。     

应用免疫吸附电镜技术检测草鱼出血病病毒

免疫吸附电镜技术[ISEM]是免疫学与超微形态学相结合的一种新的检测技术。它快速,灵敏、特异性强,是可靠的病毒诊断技术之一。我们应用免疫吸附电镜技术对草鱼出血病病毒进行了检测,并获得了理想的效果。方法: 将兔抗草鱼出血病病毒血清分别稀释为1:200、1:400、1:800、1:1600、1:3200、1:6400倍,然后取不同稀释度的抗血清分别滴在蜡盘上,把铜网漂浮在液面上(室温18-20(3)孵化5分钟后,将铜网移至病毒粗制样品中悬浮,室温反应15分钟,捞起吸干,用蒸馏水漂洗,2％PTA染色3-5分钟。同时设酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫复合物及PTA负染色电镜观察作比较。     

人舌鳞癌组织超薄切片的AFM成像和切割

利用一种基于电镜超薄切片法改进的制样方法，将人舌鳞状细胞癌病理组织以环氧树脂包埋并切片后，将薄片平整地贴附在云母上，用原子力显微镜(AFM)对切片表面进行研究，可以得到高分辨率的细胞超微结构图像，局部的亚细胞水平的形态结构可以与电镜下得到的图像相比拟。在此基础上，利用AFM针尖对肿瘤细胞核内特定区域进行切割和操纵，形成生物分子的堆积，从而为拾取(pjck—up)和进一步用分子生物学手段在亚细胞基因水平研究人舌鳞癌的病理学奠定了基础。     

马铃薯脱毒组培苗的电镜检测研究

马铃薯脱毒组培苗生产是马铃薯脱毒种薯繁育体系的重要环节,脱毒效果是脱毒组培苗质量的主要评价指标,直接影响到核心种薯的质量及整个体系的运行,因此,脱毒效果的检测是该体系的一个重要的技术组成部分。本项研究应用电镜技术系统地试验了对马铃薯脱毒组培苗的检测方法。(1)负染液的选择。应用烟草花叶病毒(TMV)、香石竹斑驳病毒(CarMV)、马铃薯病毒X(PVX)三种具有代表性的不同形态的植物病毒,对钼酸铵、磷钨酸钠、钨酸钠、醋酸铀等四种染液进行选择,其中2％钼酸铵(pH6.4)对球形病毒CarMV染色极佳,     

免疫扫描电镜样品的简单制备方法

本文介绍一种用免疫扫描电镜技术研究病毒感染的细胞表面的简易制样方法。适当控制镀金膜的厚度(约5nm厚),即可观察到直径仅20nm胶体金标记物的二次电子图象。与近年来发展起来的背散射成象法比较,细胞表面甚至病毒粒子的形貌更为清晰。     

小双壳腹泻病毒的发现及初步研究

1983年作者用多价抗体—免疫电镜法从23例秋季婴幼儿胃肠炎病人粪中检出3例小双壳腹泻病毒(SmallDouble Capsids Diarrhea Virus SDCDV)。测算205个SDCDV颗粒的直径为32.1～36.7平均34.1±1.1nm。外观呈球形,由核心和核壳组成,无包膜。核心大而明显,有的如蜂窝样。核壳内层厚、外层薄。壳粒为点状和杆状,似辐条,与外核壳相连成“T”形,有10～16个。与有关病毒的形态作比较表明:(1)与小呼肠孤病毒、小轮状病毒和“Fuzzy—Wuzzys”相似但不尽相同,从核心、核壳和壳粒形状可加以区别;(2)与轮状病毒和呼肠孤病毒虽都有双层核壳,但其大小仅大     

微波照射技术用于电镜植物样品的制备

电镜已作为研究生物科学的基本检测工具。但由于超薄切片制样周期长,影响检测速度。自八十年代末,在国内开始应用微波照射样品制备技术,但在农业科学中,有关植物样品的微波制备方法,未见报导。作者尝试了微波照射技术应用于电镜植物样品制备的全过程中。采用烟草花叶病毒感染的心叶烟叶片,在制备的每一步用不同时间、不同功率进行处理,切片经电镜观察与常规制样相比较,较好地保存了细胞结构,同时也大大缩短了制样时间。     

制备植物SEM样品的微波浸软法

近年来电子显微学工作者研制出许多揭示生物细胞内部结构的扫描电镜制样方法,其中最受欢迎的方法之一是O-D-O法(Tanaka 1981)。为了充分暴露细胞的膜性结构,使其在扫描电镜下具有立体化和高分辨效果,经冷冻断裂后的样品碎片要在0.1％锇酸(浸软溶液)中浸软72hr(20℃环境中),对细胞基质进行较长时间的提取。这样制备一次样品需一周左右的时间。由于制样周期长,对温度要求严格,在某种程度上限制了这种方法的推广使用。微波炉问世以后,国外科学工作者把它应用于很多试验方面并取得了可喜的进展,特别是在微波辐射免疫组织化学、免疫细胞化学技术及微波辐射电镜制样技术方面可供我们借鉴。国内这一方面的工作也已开始,但应用微波辐射浸软制备高分辨植物扫描电镜样品的技术尚未见报道。作者根据植物细胞的特点,