具有标记靶作用的固相免疫电镜快速诊断法(SPA—G IEM)

目前广泛使用的免疫电镜技术,具有灵敏度高及快速等突出优点,但在实际应用中,尚存在各地结果判断不一致和判断困难的问题。针对这种情况,本文报道了国内首次使用金黄色葡萄球菌(Staphylococcal)菌体,作为标记靶吸附病毒,在电镜下观察的方法(SPA G IEM)。这种方法与常规免疫电镜技术相比,不仅具有免疫电镜的优点,还能有效地避免免疫电镜中,病毒自身聚集与免疫电镜效果二者难区别的缺点。同时也避免免疫电镜形成最佳复合物取决于抗原抗体最适比例的前带效应(Prozont effect)的影响。金黄色葡萄球菌菌体,体积大,电镜下容易识别。用该菌体作为病毒固相载体,可以大大提高观察判断效率。作者认为:这种方法在临床病毒诊断中,具有独特的优点。     

适配器-超速离心法提高电镜检测病毒的灵敏度

通过专用超速离心机将病毒直接离心至载网是重要的提高诊断电镜灵敏度的方法,作者尝试建立适配器-超速离心法实现相同目的。设计制造了外形类似离心管的载网适配器,其内部有一平底的凹槽,可以放置电镜载网,添加病毒悬液后,经过超速离心,能够将病毒粒子直接离心到载网上。利用重组腺病毒和重组腺相关病毒为模式病毒,适配器-超速离心法较悬滴法的病毒检测灵敏度提高了50～200倍;对人腺病毒41型（Ad41）细胞培养物进行电镜检测,灵敏度提高了50倍。如果将免疫凝集法（immune clumping）与适配器-超速离心法相联合进行电镜制样,检测灵敏度较常规免疫凝集法提高1～2个数量级。这些结果说明适配器-超速离心法能够高效地富集病毒,可以应用于病毒的电镜检测工作。     

葡萄球菌A蛋白在电子显微镜观察病毒中的应用研究

本文报导了国内首次使用葡萄球菌A蛋白(Stophylococca Protein A,简称SPA)在电镜观察病毒中的应用。并使用SPA所建立的固相免疫电镜方法(简称SPA-SPIEM)对轮状病毒、脊髓灰质炎病毒、类SV_(40)猴病毒分别进行了实验和检查。对比了各种浓度SPA、各种稀释度抗血清对检测病毒结果的影响。同时对直接电镜(简称DEM-PTA)、SPA-SPIEM和直接抗原抗体免疫电镜(简称IEM)三种制样方法所观察到的病毒形态结构进行了比较。结果表明:SPA-SPIEM法在镜下检出的病毒颗粒数比DEM-PTA法提高100—300倍左右,在显示病毒形态结构方面接近DEM-PTA法,比IEM法好。整个SPA-SPIEM制样过程,在1小时内可以全部完成。作者认为:SPA-SPIEM制样方法,在电镜检测病毒中是一种用材量微、灵敏度高、分辨率好、特异性强、快速准确的检测方法。在病毒分型、混合病毒分别检测、低滴度未知病毒检测等方面,具有独特的优点。是一种有发展前途,可应用于各种病毒检测的新方法。     

甜菜黑色焦枯病毒电镜与免疫电镜观察

甜菜黑色焦枯病毒电镜与免疫电镜观察孙晓陆王钫肖英王建梅（新疆农科院中心实验室，乌鲁木齐８３００００）甜菜黑色焦枯病是世界范围的甜菜种植中的毁灭性病害。本文报告了甜菜黑色焦枯型病原病毒（ＢＢＳＶ）的电镜与免疫电镜观察结果。寄主鉴别在防虫网室中以常规摩擦...     

用免疫电镜技术检测和研究甜菜坏死黄脉病毒和黑色焦枯病毒

本文利用免疫电镜技术准确地检出带有甜菜坏死黄脉病毒的病株，从而正确评价甜菜丛根病防治效果，对甜菜黑色焦枯病毒进行了免疫电镜形态学观察并证实了抗血清制备试验效果良好。     

电镜在病毒感染诊断中的应用

本文系统温习了动物病毒分类与命名以及人类重要致病病毒电镜诊断的形态学指征。自１９６９年以来，我们应用超薄切片，负染和免疫电镜技术对６００余份病毒感染的培养细胞，实验动物组织以及少数临床样品（血清和粪便病毒提取液以及皮肤活检组织等）进行了电镜检查和诊断。检出的病毒有：触染性软疣病毒、鼠痘病毒、疱疹病毒、原病毒、人乳头瘤病毒、马脑炎病毒、乙型脑炎病毒、登戈病毒、流感病毒、鼠副流感病毒、合胞病毒、狂犬病     

胶体金免疫电镜技术用于植物病毒的检测

胶体金免疫电镜技术具有步骤简便。胶体金探针能精确定位、电镜下分辨率高等优点,给细胞化学标记体系带来了一种改革,近年来越来越多地应用于生物学和医学研究中,如:细胞内某些生物活性物质的定位研究、组织细胞形态发生研究、酶的研究等,但在农业科研中的应用还很少。尤其在病毒检测方面,目前国内只见到以胶体金免疫电镜技术检测动物病毒的报道,而用于植物病毒检测的报道尚无。本文报道了以改良的柠檬酸钠—鞣酸还原法制备大小适于植物病毒标记的胶体金颗粒的方法,制备的胶     

长叶车前花叶病毒血清关系的免疫电镜研究

长叶车前花叶病毒(RMV)寄主范围广,为重要植物病毒,本实验室自70年代发现研究和明确了病毒基本特性,但对它和TMV不同株系间的相互关系了解甚少,且难以用常规方法进行研究,用免疫吸附电镜技术进行研究将是很有益的探索。本文选用YMV_(15),RMV_(ha),TMVⅠ,TMVⅡ,TMV_(no)等五种毒株,并制得相应的抗血清Anti YMV_(15),Anti RMV_(ha),Anti TMVⅠ,Anti TMV_(no),以正常血清为对照,分别用经不同抗血清(1:100)处理的载网吸附病毒(2.5μg/ml),染色后,在10000倍的电镜视野下观察拍照,并分别记数10个电镜视野下病毒的吸附量,把所得结果整理列表如下:     

流行性出血热患者外周血细胞病毒抗原的免疫金标记

应用流行性出血热(EHF)病毒抗体及胶体金探针对EHF患者外周血细胞进行病毒抗原的定位·光镜免疫金银染色(IGSS)结果显示患者外周血淋巴细胞及血小板表面EHF病毒抗原阳性。采用LowicrylK4M低温快速包埋电镜免疫金染色(IGS)方法,发现金探针特异性定位于淋巴细胞胞质的大小空泡和液泡内(可能为病毒芽生、成熟部位增生、扩大的高尔基囊泡)以及血小板质膜、开放管道系统扩张的管腔内。结果表明EHFV能在人外周血淋巴细胞中复制成熟。血小板表面IGSS阳性物质主要为循环血中EHFV抗原与抗体形成的免疫复合物。     

应用免疫吸附电镜技术检测草鱼出血病病毒

免疫吸附电镜技术[ISEM]是免疫学与超微形态学相结合的一种新的检测技术。它快速,灵敏、特异性强,是可靠的病毒诊断技术之一。我们应用免疫吸附电镜技术对草鱼出血病病毒进行了检测,并获得了理想的效果。方法: 将兔抗草鱼出血病病毒血清分别稀释为1:200、1:400、1:800、1:1600、1:3200、1:6400倍,然后取不同稀释度的抗血清分别滴在蜡盘上,把铜网漂浮在液面上(室温18-20(3)孵化5分钟后,将铜网移至病毒粗制样品中悬浮,室温反应15分钟,捞起吸干,用蒸馏水漂洗,2％PTA染色3-5分钟。同时设酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫复合物及PTA负染色电镜观察作比较。     

侵染唐菖蒲的两种杆状病毒的电镜观察

唐菖蒲(Gladilus hybidus Hort)病毒病是危害唐菖蒲生长的重要病害。从全国21个城市的花卉调查其表现症状主要有:斑驳花叶、条斑花叶、皱缩变型、植株矮化及混合症状型。其中以花叶型和花叶混合型最普遍。由于病毒病的危害,造成种球退化、植株变态,使艳丽多姿、花叶并美的唐菖蒲花卉失去了观赏的价值。本文就沈阳地区栽培唐菖蒲的两种混合症状病株,应用免疫电镜技术、超薄切片技术及其病毒的提纯,进行了电镜观察。其结果,从两种混合症状病株的浸渍液中,用免疫电镜法都观察到球状病毒粒体;从斑驳皱缩花叶型病株粗提取物中还观察到一种直杆状病毒粒体;从条斑花叶花瓣褪色型病株提取物中还     

胶体金免疫电镜技术检测番茄环纹斑点病毒

本实验利用胶体金免疫电镜技术检测番茄环纹斑点病毒（ tomato zonate spot virus, TZSV）,分别以TZSV的N 蛋白多克隆抗体及TZSV的Gn蛋白多克隆抗体为一抗,然后以胶体金标记羊抗兔IgG?gold（10 nm）为二抗对病毒进行胶体金标记,电镜观察用TZSV Gn蛋白抗体标记的胶体金颗粒能很好地结合到病毒粒体上。结果表明该方法可以实现对TZSV更为准确可靠地检测。     

人小肠粘膜免疫酶的定位研究—光镜和电镜免疫组织化学染色法

本文对免疫酶组织化学的样品制备程序和染色方法做了详细的阐述。用直接法、间接法和ABC法,对人小肠免疫酶的定位,进行了光镜和电镜的观察,染色阳性反应显著,获得了满意的效果。并对染色技巧做了分析和探讨。     

人类腹泻粪便中小圆形病毒的电子显微镜研究

我们在研究婴幼儿急性胃肠炎和腹泻及成人流行性腹泻的病原学时,用直接电镜和免疫电镜技术,从患者粪便标本中检出了4种小圆形病毒颗粒。粪便标本用生理盐水制成20～50％的悬液(水样便可不稀释),经超声波粉碎处理(振幅4μ,每次30秒钟,共3～5次),3000rpm离心30分钟,上清为被检样品。被检样品制备直接电镜或免疫电镜标本,用3％磷钨酸(pH6.4)做负染色。     

应用免疫电镜技术对烟草试管苗中病毒的鉴定

马铃薯病毒源,即作为抗血清抗原其浓度和纯度,直接关系到利用ELISA等方法鉴定马铃薯茎尖脱毒试管苗实验的可靠性和灵敏度。黑龙江省马铃薯研究所建立的用烟草试管苗保存毒源的方法,虽可使马铃薯病毒源在试管中长期生长和保存,但烟草试管苗经过数次转接后,常使其病毒浓度和纯度发生变化。为提高抗血清质量,当保存的毒源试管苗作为制造抗血清的抗原,最好先用免疫电镜直观测出它们的浓度和纯度。试验方法试验用复合抗血清Anti TMV+Anti PVX+Anti PVY制作免疫电镜样品对PVX_1、PVX_2、     

肾综合症出血热(HFRS)病毒的形态学研究

应用铁蛋白和辣根过氧化物酶标记抗体间接法染色免疫电镜超薄切片技术对经Vero E—6细胞从HFRS患者血清中直接分离到的二株病毒(H—8205及H—8278株)的形态作了观察。结果在细胞基质内、胞浆空泡内及细胞外查见为免疫复合物和铁蛋白颗粒或酶反应沉淀物包绕的病毒颗粒,园形或卵园形,平均直径108nm,变化范围50—156nm。颗粒有双层膜结构及表面突起,有的囊膜不连续,有小孔通过,颗粒内部为疏松的细颗粒状及微管状结构。两株病毒在形态上无差别。对照组(包括用正常人血清取代恢复期病人血清的对照)未见到类似     

在可能的生物恐怖袭击中病毒的电镜诊断附:微波和数码图像技术应用于快速电镜诊断简介

本文介绍了在可能的生物恐怖袭击中,电镜在病毒诊断和鉴别诊断的应用.文中重点描述了痘病毒科和4种不同科的出血热病毒,包括:丝状病毒科、沙拉病毒科、布尼病毒科和黄病动毒科所属病毒在电镜下的形态学和形态发生学特征.电镜在痘病毒与疱疹病毒的鉴别诊断中也是快速和可靠的方法.在附录中还简要介绍了微波和数码图像技术在快速电镜诊断中的应用.     

冷冻电镜样品制备的生物安全评估

冷冻电镜是发现、鉴定病原微生物，解析病原微生物结构的有力工具。对冷冻电镜的实验过程中，样本是否会扩散到环境中导致污染，继而引发生物安全的问题，国内外目前都缺少相关实验探究。本研究利用当前广泛使用的直接投入式冷冻电镜样品制备设备，对病毒和细菌样品进行冷冻电镜样品制备，探究冷冻电镜制样过程中可能出现的样品泄露以及造成的污染问题，进行生物安全评估。实验结果表明：被滤纸吸附的样品可透过滤纸进一步污染制样设备，使用封口膜可有效避免样品进一步污染；病毒性样品实验结果表明即使用封口膜也可由多种原因而扩大污染范围。这些结果为冷冻电镜样品制备生物安全评估提供了实验依据。     

应用电镜及电镜原位杂交法观察和分析SARS-CoV在人体细胞内的定位

本文通过电镜及电镜原位杂交方法,观察和分析SARS患者外周血淋巴细胞和SARS尸体解剖肺组织内的SARS CoV病毒颗粒的分布,并对SARS CoV病毒颗粒进行定性鉴定。在SARS患者外周血淋巴细胞和Ⅱ型肺泡上皮细胞内均发现了SARS CoV病毒样颗粒,直径大小80～120nm,圆形或椭圆     

病毒感染电镜诊断和病毒分类命名的新进展

病毒感染电镜诊断和病毒分类命名的新进展陈德蕙张贺秋王国华（军事医学科学院基础医学研究所，北京１００８５０）电镜是检出病毒感染和对病毒进行分类、鉴定的有力工具。从理论上讲，电镜可以检出任何在体外或体内组织细胞内复制、增殖的病毒及其所产生的细胞病变，并提...