纳米TiO2-xNx对ALA-PDT体外灭活HL60效果影响实验研究

为研究在基于氨乙酰丙酸(ALA)的光动力治疗(PDT)法中添加适当N掺杂纳米TiO2-xNx对体外灭活白血病HL60细胞的效果影响,采用MTT分析法测试了各种实验条件下HL60细胞的相对存活率,从而研究了纳米TiO2-xNx对HL60细胞生长的影响、添加不同浓度的纳米TiO2-xNx后PDT对HL60细胞存活的影响以及基于ALA或TiO2-xNx或ALA和TiO2-xNx的PDT对HL60细胞的存活影响.实验结果表明:50～250 μg/mL浓度的纳米TiO2-xNx溶液对HL60细胞具有较强的灭活作用,其中150 μg/mL浓度的纳米TiO2-xNx溶液对任意接种浓度的HL60细胞均具有很好的灭活效果.添加纳米TiO2-xNx再进行PDT,HL60细胞的相对存活率均低于同浓度纳米TiO2-xNx颗粒单独作用后HL60细胞的相对存活率.在ALA的基础上添加纳米TiO2-xNx后进行光辐照,对HL60细胞的灭活效果最佳,当添加ALA浓度为1 mM/mL、纳米TiO2-xNx浓度为150 μg/mL和HL60细胞接种浓度为7.5×104/mL时,HL60细胞的存活率为25%,即基于添加合适浓度的ALA及纳米TiO2-xNx的PDT对HL60细胞的灭活效率达75%.     

基于ALA的PDT体外灭活HL60实验研究

利用自行设计的光动力疗法(PDT)反应室对HL60细胞进行了氨乙酰丙酸(ALA)PDT实验研究，获得灭活HL60细胞的最佳光学参量因子：ALA培养的终浓度为1．0mM／ml；ALA的培养时间为4h；辐射光波长为412nm；辐照光剂量为18J／cm^2；辐照光功率为5mW／cm^2；培养细胞的胎牛血清(FCS)浓度为8％～10％。在这些光学参数下对HL60的灭活能达89．9％，而单核淋巴细胞(PBMC)的损伤仅为15％，基本上能达到选择性地灭活肿瘤细胞HL60。     

ALA-PDT对健康人及银屑病患者PBMCs生物效应的实验研究

目的:通过研究ALA-PDT对体外培养的PBMCs的生物效应,探讨ALA -PDT对银屑病的免疫功能的影响、治疗的可行性及优化参数.方法:将健康人及银屑病患者新鲜外周血分别进行PBMCs分离与培养,分设空白对照组、单纯ALA组、单纯照光组以及不同ALA浓度与不同用药孵育时间组进行PDT.Annexin V/PI双染法、MTT法检测PBMCs存活率,以确定ALA最佳药物浓度和最佳用药孵育时间;TEM观察PBMCs细胞超微结构的变化;RT-PCR检测PBMCs表达Th1、Th2相关细胞因子的水平.结果:0.6 mmol/L ALA避光孵育1h后PDT组PBMCs存活率最低(P＜ 0.05); ALA-PDT后PBMCs结构呈现典型凋亡改变;银屑病患者PBMCs的IFN-γ、TNF-α mRNA表达量与健康人相比显著升高,ALA-PDT后表达量显著下降、IL-4 mRNA表达量较健康人显著降低,经ALA-PDT后显著升高(P＜0.05); IL-10mRNA表达量较健康人略有减低,经ALA-PDT后有所升高,但无统计学意义.结论:0.6 mmol/L ALA避光作孵育1h后PDT可明显促进PBMCs凋亡,银屑病患者PBMCs经ALA-PDT后由Th1优势应答向Th1/Th2平衡方向转变.     

优化ALA-PDT对正常人角质形成细胞凋亡的影响

目的:本文通过不同浓度的ALA与不同用药时间对体外培养的人角质形成细胞(KC)PDT的生物效应研究,观察PpⅨ荧光强度及KC凋亡和生长周期的影响,优化ALA最佳药物浓度和用药时间,探讨ALA-PDT抑制银屑病KC异常增生的可行性和最佳效果.方法:将新鲜包皮组织经两次酶消化法进行KC分离与培养,分设KC对照组、单纯ALA组、单纯照光组及0.1、0.6、1.2、1.8、3.6mmol/L ALA五个浓度组,经0.5、1、3、5h四个避光孵育时间后PDT.FCM、酶标仪、荧光显微镜检测KC中PpⅨ荧光强度,确定ALA最佳药物浓度和最佳用药时间;Hoechst33342 / PI双染法和Annexin V / PI双染法检测KC凋亡率和对生长周期的影响.结果: 0.6mmol/L ALA(用药1h)-PDT组为最佳药物浓度和最佳用药时间, 显示PpⅨ荧光强度表达与KC凋亡率最高,能明显抑制S期与G2期的细胞增值,使细胞增殖指数降为最低,与其他各组相比差异显著(P<0.05).结论: 0.6mmol/L ALA(用药1h)-PDT能明显抑制KC增殖,优化后的ALA-PDT更迅速有效地促进人KC凋亡.     

量子点CdS与纳米TiO2复合物对HL60存活率的影响

采用自组装的方法制备了纳米QDs-CdS/TiO2复合物,并将其以及TiO2用于HL60白血病细胞的光动力实验.在可见光区以5种波长光(412 nm、432 nm、462 nm、511 nm、583 nm)及不同的光能流密度辐照后,用CCK-8法测量光密度OD值.实验结果表明TiO2灭活HL60的PDT效率在5种波长光辐照下都比较低,对应于412 nm、432 nm、462 nm、511 nm、583 nm灭活效率分别为:68.3%、66.5%、65.9%、64.7%、64.1%.在同等实验条件下QDs-CdS/TiO2对HL60的灭活效应要明显高于TiO2,在412 nm处QDs-CdS/TiO2对HL60细胞灭活效率最高达86.5%.     

PSD007-PDT对鼠肝癌细胞MM45T-Li抗增殖效应的实验研究

探讨血卟啉甲醚介导的光动力疗法(PSD007-PDT)对鼠肝癌细胞MM45T-Li的抗增殖效应.实验分为细胞组、对照组(单纯PSD007)及PDT组.利用荧光显微镜观察不同浓度PSD007在细胞中的吸收;多功能酶标仪定量分析细胞内PSD007在不同时间点的荧光强度;以PSD007为光敏剂,630 nm激光为光源的PDT作用于细胞,MTT法检测PDT对细胞增殖活性的影响.结果显示PSD007与细胞孵育3h后均匀分布细胞内,PSD007在细胞内的荧光值随孵育时间、药物浓度增加而增强,4h趋于饱和.在功率密度一定的情况下,细胞的存活率随能量密度的增加而降低.与对照组相比,功率密度为1.8、2.7、4.5、9 J/cm2时细胞存活率明显降低,具有统计学意义.PSD007介导的PDT对鼠肝癌细胞MM45T-Li有明显的杀伤作用,与激光能量密度成一定的依赖性.     

ALA-PDT在耐药白血病细胞株HL-60/ADR中的实验研究

目的:本研究观察5-氨基乙酰丙酸介导的光动力疗法(ALA-PDT)对耐药白血病细胞株HL-60/ADR的诱导凋亡作用.方法:以耐药白血病细胞株HL-60/ADR为实验模型.实验分为4组,对照组、单纯ALA组、单纯光照组及ALA PDT组.用MTT法检测细胞的存活率,瑞特染色观察细胞形态学改变,用双染法检测细胞凋亡率,并用共聚焦激光显微镜观察凋亡细胞的特征.结果:ALA PDT组光照后瑞特染色可见凋亡改变;MTT法显示细胞存活率明显下降,24h为(48.67±8.14)%,48h进一步降低至(22.23±6.07)%,两者比较差异有统计学意义;流式细胞仪检测显示细胞凋亡率3h、4h和24h分别为(6.35±1.40)%、(8.07±1.87)%和(57.66±7.55)%,与对照组相比差异有统计学意义;LSCM观察AnnexinV-FITC单阳性及AnnexinV-FITC/PI双阳性细胞均具有典型的凋亡特征,而单纯ALA组、单纯光照组及对照组则无上述改变.结论:ALA-PDT能灭活耐药白血病细胞株HL-60/ADR,主要通过诱导凋亡的方式实现的,并呈一定的时间依赖性.     

5-ALA介导的光动力治疗在耐药白血病中的作用机制研究

目的: 本研究观察了5-氨基乙酰丙酸介导的光动力治疗(ALA-PDT)对耐药白血病细胞株HL-60/ADR的杀伤作用及对耐药白血病原代细胞存活率的影响。方法: 以耐药白血病细胞株HL-60/ADR为实验模型, 同时在11例白血病患者原代细胞中进行检测。实验分为4组, 对照组、单纯ALA组、单纯光照组及ALA＋PDT组。用MTT法测定细胞的存活率, 采用阳离子脂质荧光探针JC-1检测线粒体跨膜电位, 用Real-time PCR检测PDT前后HL-60/ADR细胞株中bcl-2基因及多药耐药基因MRP的表达变化。结果: ALA-PDT后HL-60/ADR细胞株线粒体跨膜电位出现快速下降, 0, 2, 4 h时线粒体跨膜电位崩塌的细胞比例分别升高至55.91%±2.60%、64.27%±1.08%、82.17%±0.43%, 与对照组相比皆有显著差异(P＜0.05), 呈时间依赖性。而单纯ALA组和单纯光照组则无明显变化。HL-60/ADR细胞株在ALA-PDT后Bcl-2和MRP基因均呈明显下降趋势。在初发和复发难治急性白血病原代细胞中ALA＋PDT组均显示较强的光动力效应。结论: ALA-PDT诱导的HL-60/ADR细胞的杀伤可能与其影响线粒体跨膜电位有关, 即通过影响线粒体功能促进细胞凋亡。同时表明ALA介导的光动力作用部分是通过在基因转录水平下调抗凋亡基因Bcl-2而促进凋亡的发生, 另一方面通过下调耐药基因MRP的表达而部分逆转耐药。同时ALA-PDT对原代白血病细胞同样有较大的抑制作用。     

基于TiO2、掺铁TiO2纳米粒灭活HL60细胞研究

以不同时间培养添加有不同剂量TiO2、掺铁TiO2纳米粒的HL60细胞,研究TiO2、掺铁TiO2纳米颗粒对HL60白血病肿瘤细胞活性的影响,并对比分析细胞在接受可见光照射和不接受光辐照的情况下细胞的活性,探讨基于TiO2、掺铁TiO2纳米颗粒作为光敏剂PDT灭活肿瘤细胞的可能性.实验结果表明纳米颗粒对细胞的生长具有一定的抑制/毒性作用,培养时间越久、纳米浓度越大,抑制/毒性作用越明显;添加了纳米颗粒的PDT灭杀效率比不加纳米颗粒的PDT灭杀效率高,但交互效应不显著.     

PDT对反义bcr-abl寡核苷酸k562细胞转染的影响

目的 :体外研究光动力治疗 (PDT)对b3a2型反义bcr-abl寡核苷酸 (ASO)慢性髓细胞性白血病 (CML)细胞株K5 6 2转染的影响 ,为PDT合并反义技术应用于CML患者治疗提供实验基础。方法 :半导体激光 ,波长 6 5 0nm ,剂量 9J cm2 垂直照射。光敏剂为血卟啉单甲醚(HMME) ,采用体外细胞培养技术 ,流式细胞仪检测PDT实验组与对照组荧光标记的反义bcr-abl寡核苷酸 (ASPO)K5 6 2细胞摄入率及荧光强度。结果 :①PDT可显著提高k5 6 2细胞对反义bcr-abl寡核苷酸的摄入 ,比直接转染增加转染率可达 4-1 0倍。且k5 6 2细胞对反义bcr-abl寡核苷酸的摄入和反义bcr-abl寡核苷酸浓度及作用时间有关。②光敏剂量浓度为 0 .9μmol·L- 1 时转染的效率最高 ,4小时点细胞内平均荧光强度最强 (P <0 .0 1 ) ,且细胞内平均荧光强度随ASPO浓度的增加而增高。但直接转染时 ,6小时才达到高峰。浓度为 0 .6 μmol·L- 1 ～ 0 .9μmol·L- 1 时K5 6 2细胞对荧光物质的摄入即达饱和。结论 :PDT可以增加反义bcr -abl寡核苷酸K5 6 2细胞转染率     

光敏寡核苷酸介导光动力净化白血病细胞

如何有效清除造血干细胞移植物中残留白血病细胞一直是血液病学中的重要课题之一。目前,所有药物净化方法收效甚微,这促使人们寻求新的高效净化策略。试图通过光敏剂修饰反义寡核苷酸介导光动力净化白血病细胞,以期为临床有效净化造血干细胞移植物中残留白血病细胞提供新方法。     

生长抑素对人红白血病K562细胞超微结构的影响

目的：观察生长抑素（somatostatin,SMS)对人红白血病K562细胞超微结构的影响。方法：采用体外细胞培养，加入不同浓度的8肽生长抑素（奥曲肽，octreotide)作用于K562细胞，透射电镜下观察不同浓度SMS对K562细胞超微结构影响的变化。结果：空白对照组细胞质内有各种发达的细胞器；SMS处理组随SMS浓度的增加细胞器有不同程度的变化，以10^-7mol/L-10^-6mol/L变化最明显，细胞核染色质靠核膜边集呈块状或新月形，胞浆中见核碎裂团块与空泡，线粒体基质深染、空泡样变和髓样变。结论：生长抑素可影响K562细胞的增殖，并呈现典型的细胞凋亡的超微结构变化。     

毛细胞白血病和伴绒毛淋巴细胞脾淋巴瘤的超微结构分析

毛细胞白血病和伴绒毛淋巴细胞睥淋巴瘤均为少见的淋巴源性恶性肿瘤,两者在临床表现和光镜形态上很难区别.本文利用电子显微镜观察了14例毛细胞白血病和2例伴绒毛淋巴细胞脾淋巴瘤的瘤细胞超微结构特征,分析了它们之间的超微结构差异,提示了电镜检查在淋巴源性恶性肿瘤诊断中的作用.     

毛细胞白血病中毛细胞的超微结构特征

应用透射电镜观察6例毛细胞白血病（HCL）患者外周血、骨髓血和脾细胞悬液中毛细胞的超微结构特征。结果显示，毛细胞表面微绒毛较多，呈细长指状或环状，或为粗大细胞突起；胞质内细胞器丰富，偶见核糖体-板层复合体（RLC）。结果提示毛细胞表面的微绒毛是HCL超微病理诊断的重要依据，而RLC是HCL诊断和治疗的参考依据。     

光子+光敏剂修饰TFO净化白血病细胞的新设想

本文依据化学效应和反基因治疗的原理，提出利用光子照射联合光敏剂修饰的三螺旋结构寡核苷酸净化白血病细胞的新策略，以期为临床净化白病细胞提供新的手段。     

ALA-PDT在白血病中的研究进展

ALA-PDT是一种较新型的肿瘤治疗手段。由于肿瘤细胞对ALA产生的内源性光敏剂原卟啉IX(PpIX)的优先摄取,使肿瘤细胞被选择性地杀伤。目前在白血病领域,ALA-PDT仍限于基础研究。本文将就ALA-PDT在白血病细胞株中的作用机制、白血病耐药、自体移植体外净化中的应用及前景进行综述。     

电子显微镜在疑难病例病理诊断中的应用

目的：通过对4例疑难病例的诊断,进一步探讨电镜在疑难病例诊断中的作用及意义。方法：采用电镜技术对4例疑难病例进行超微结构观察。结果：Merkel细胞癌含有许多神经内分泌颗粒,Wilson’s病肝细胞溶酶体吞噬较多铜颗粒;毛细胞白血病的细胞表面有许多长突起,甲状腺玻璃样小粱状腺瘤细胞胞质内有成束中间丝等。结论：电镜对疑难病例的确诊具有重要价值。     

白血病的电镜诊断

应用电镜分别对5例不同类型白血病患者骨髓穿刺细胞进行了观察,观察结果表明例一、二均为急性早幼粒细胞白血病,两例骨髓细胞中均见有许多异常早幼粒细胞胞浆内含有Auer小体,但两例细胞内Auer小体结构呈明显差异,例三、四为不同类型毛细胸白血病,即典型毛细胞白血病（Ⅰ型）及变异型毛细胞白血病（Ⅱ型）,两型细胞在结构上的差异主要表现为细胞膜表面毛样突起的长度及数量不同,变异型毛细胞白血病细胞的特点仅在电镜下才能辨认。例五为急性粒细胞白血病的部分分化型,其中早幼粒细胞胞浆内仅具极少数小的电子致密颗粒,电镜对该种细胞的分辨显示出光镜所不具有的优势,并提示电镜在白现诊断中的重要意义。     

人急性粒细胞白血病细胞的无丝分裂现象

用电子显微镜观察了8例急性粒细胞白血病的外周血标本。结果发现在2例标本中存在白血病细胞的无丝分裂现象。无丝分裂过程先是细胞核中部缢缩形成哑玲状细胞核，然后分裂成两个子细胞核，最后细胞一分为二、完成细胞分裂。在这一过程中核膜不消失，不形成染色体。由于目前对白血病的治疗是以白血病细胞的动力学规律为基础的，没有考虑到白血病细胞无丝分裂的因素，因此白血病细胞的无丝分裂现象可能是化疗后残存白血病细胞的原因之一。