电镜超薄切片真空染色法

介绍一种简便易行的超薄切片真空染色法。使用简单易得的工具及自制装置-真空保鲜盒、染色硅胶板和染色硅胶板架,能够得到较好的染色效果。结果显示,与目前现有的传统方法相比较,超薄切片真空染色法省时、省试剂,染色效果好,一次可进行大批量切片染色(一次可达200张超薄切片)。     

微波辐射超薄切片快速染色法

本文介绍一个微波辐射超薄切片快速染色法。该方法与常规染色方法相比具有以下突出优点:染色速度快且操作简便,整个染色过程可在数分钟内完成;经微波辐射染色处理的动植物组织切片染色均匀,污染少,反差比常规染色法稍强。动植物组织切片微波辐射染色的最佳辐射时间有所不同,铀染色动植物组织切片最佳辐射时间均为30秒;铅染色动物组织切片最佳辐射时间为30秒,而植物组织切片为20秒。染色液经微波辐射后的温度应控制在20～40℃。     

电镜超薄切片批量染色的新方法

超薄切片染色是透射电镜生物样本制备中的关键环节。本文介绍了一种透射电镜超薄切片染色的新方法,利用简单自制的染色液防污存储与批量染色装置,可对超薄切片载网进行批量化染色,不但极大提高染色效率,而且减少了染色过程中染色液、样品的污染,达到染色液的重复利用,同时减少重金属对操作者的伤害和对环境的污染。     

一种高效的超薄切片染色法

本文介绍使用“连通式”玻管染色装置(如图)的超薄切片染色法及在染色中应注意的事项。经多次使用证明,用该法染出的超薄切片电子着色均匀,结构清晰,有良好的反差。该法能保证切片染色条件的一致,有效地防止切片染色污染,提高染色质量。用该法染色,染液用量省,染20张载网只需1ml染液,降低了铀、铅污染环境的可能性。染色和冲洗时间大大缩短,染30张载网前后共只需30分钟,大大提高了工作效率。该染色装置由三部分组成,制作如下:A.染色管取一根长130mm、内径6mm的玻管,用酒精喷灯加热玻管的一端至内径缩为1mm。在距另一端20mm处,用喷射火焰打一个     

一种稳定的超薄切片铅染色方法

随着电子显微镜在生物医学研究中的广泛应用,对所观察样品的制备条件的要求也越来越严格。自从Watson(1958)首先提出铅化合物可以增加超薄切片中细胞超微结构的反差以来,目前国内外多采用Reynolds(1963)介绍的柠檬酸铅作为常规铅染液。但多年来,超薄切片的铅污染却是许多实验室普遍存在的问题,它直接影响着切片的质量和电镜观察效果,原因在于过去所用的铅染液在接触空气中的二氧化碳以后常产生碳酸铅沉淀,污染切片。而且铅染液不能长期贮存,否则污染会更加严重。为了解决这个问题,我们参照Hanaichi等(1986)改进的铅数染液配方和染色方法进行染色。获得了满意的结果,特报告如下。     

胃印戒细胞癌浸润转移与免疫超微结构特征的关系

胃印戒细胞癌是一种较其它类型胃癌恶性程度更高的肿瘤 ,其 5年生存率较低主要与肿瘤的生物学特征有直接关系。本文通过免疫组化及电镜技术对 5 3例胃印戒细胞癌进行功能与超微结构相结合的观察 ,对印戒细胞癌浸润性的特征进行探讨。材料与方法　收集 1 995年至 1 999年 2月病理标本中的 5 3例胃印戒细胞癌组织 ,标本均经 1 0 %中性福尔马林固定 ,石蜡切片 ,HE染色、免疫组化癌胚抗原 ( CEA)及层粘连蛋白 ( LN) S- P法检测。同时取其中 6例留取电镜样品 ,戊二醛、锇酸双重固定 ,低粘度包埋剂浸透包埋 ,半薄切片定位 ,超薄切片铀 -铅双重…     

脾气虚证骨骼肌线粒体超微结构图像分析研究

脾气虚证大白鼠骨骼肌的超微结构变化已作了观察研究,发现线粒体数显著减少,其结构改变表现为肿胀、嵴断裂、空泡化等。本文对线粒体的超微结构作进一步图像分析。实验动物Wistar大白鼠,取正常组、脾气虚证组、四君子汤复健组和自然恢复组的骨骼肌用4％戊二醛固定液作前固定,1％四氧化锇固定液后固定,Epon 812包埋。LKB V型超薄切片机切半薄和超薄切片,半薄切片作光学显微镜观察和修块定位,超薄切片用醋酸铀、柠檬酸铅双重染色,日立H-500透射电镜观察照相,Joyce-Loebl μMAGISCAN图像分析仪对四个组线粒体的面积、周长、长度、宽度(见图1)以及长度与宽度之比进行测定、统计分析,对四个组的上述参数分别作t测验。     

大熊猫精子的超微结构

近年来,人们研究大熊猫的生态、生理、饲养和繁殖,取得了一些成绩。1978年大熊猫人工授精繁殖在北京动物园试验成功,开辟了新的繁殖途径。目前国外有人研究大熊猫精子的发生及发育状况,搜集冷冻精液活力等数据,但对精子超微结构的研究较少。笔者对大熊猫精子进行电镜观察,了解精子的超微结构特征,为提高大熊猫繁殖率提供资料。方法将新鲜的大熊猫精液离心,取沉淀用琼脂预包埋,经戊二醛与四氧化锇双重固定,按常规方法包埋、制作超薄切片,铀铅双重染色,JEM—100cX电镜观察。结果和讨论电镜下大熊猫精子主要由头部、颈部和尾部组成。头部有细胞核和顶体,细胞核电子密度较高,     

透射电镜超薄切片滴管式染色法的改进

在应用透射电镜超薄切片滴管式染色法的基础上,对其进行了一些改进,使其操作更为方便高效,在避免染色操作中铅污染的同时也很好地避免了铀污染,取得了比较好的效果。     

基于Ansys/Flotran的夹持型超薄切片染色板优化设计

电镜超薄切片样品制备中,重金属染色是不可缺少的关键步骤.本文基于夹持型超薄切片染色板工作原理,建立4种不同染色孔形状的染色板模型(染色孔底部与侧壁夹角90°,105°,120°和135°),对水流冲洗染色板过程进行二维模拟,采用Ansys/Flotran方法计算超薄切片表面的实际冲洗液流速度和湍流动能.结果表明,随着染色孔底部与侧壁夹角的增加,超薄切片表面的水流冲洗速度逐渐增加,且不同染色孔内的湍流动能逐渐变得均匀,在染色孔的壁与底面的夹角为105°时,湍流动能最大,即水流与超薄切片表面残余的重金属染液之间交换程度最大,此结构被确定为最优化设计.根据计算流体动力学研制的产品,操作简便、安全有效,为提高透射电镜的样品染色效率和质量提供理论基础.     

不同包埋剂对半薄切片甲苯胺蓝染色效果的影响

目的:探讨不同包埋剂对半薄切片甲苯胺蓝染色效果的影响。方法:切取大鼠的坐骨神经及肾脏组织,经戊二醛-锇酸双重固定,乙醇、丙酮梯度脱水后,分别用Epon812和Eponate12包埋聚合,利用超薄切片机制备厚度为1.5μm的半薄切片,切片经甲苯胺蓝染色,在光镜下观察半薄切片的染色效果。结果:Eponate12包埋的半薄切片经甲苯胺蓝染色后,颜色更鲜艳,微细结构更清晰,图像反差更好。结论:Eponate12包埋的半薄切片经甲苯胺蓝染色后更有利于在光镜下观察组织的微细结构。     

精索静脉曲张不育者精子的超薄切片和冷冻蚀刻的电镜观察

精索静脉曲张影响精子发生和精液质量,导致男性不育。为探讨不育的原因,本实验采用超薄切片和冷冻蚀刻复型膜的电镜观察。材料和方法:两例青年男性不育者,年龄为29岁,31岁,婚后三年不育,有双侧中度精索静脉曲张。超薄切片制备:2.5％二醛,1％锇酸双固定,酒精脱水,环氧树脂812包埋,超薄切片厚度500埃左右,铀、铅双染色。冷冻蚀刻复型膜制备:新鲜精液固定于2.5％戊二醛,经30％甘油生理盐水处理12小时,BAF—400D高真空冷冻蚀刻仪制成复型膜,电镜观察。观察结果:超薄切片:精索静脉曲张患者精液内可见头帽期和顶体期精子细胞,且形态异常,如顶体扩张,细胞核染色质松散,核内出现大空腔。发育成熟的精子头畸形,中段线粒体排列紊乱等。冷冻蚀刻复型膜:患者     

中华绒螯蟹鳃的超微结构观察

中华绒螯蟹 ( Eriocheir sinensis)是我国著名水产品和创汇水产品。鳃是水栖十足类甲壳动物的呼吸器官。本文对中华绒螯蟹鳃进行了超微结构研究 ,旨在弥补国内这方面研究之不足 ,同时为蟹类的循环生理、呼吸生理以及病理研究提供有价值的资料。材料与方法1 999年 9月 1 5日于苏州东山湖地区的一个成蟹养殖场采集健康中华绒螯蟹 ,取样后用 4%戊二醛固定。组织块进一步修小后 ,锇酸固定 ,Epon81 2包埋 ,半薄切片定位后进行超薄切片 ,醋酸双氧铀和柠檬酸铅双重染色 ,日立 H- 6 0 0型透射电镜观察并拍照。结果与讨论中华绒螯蟹的鳃可明显分为…     

一种用硅橡胶载网夹进行超薄切片染色的有效方法

本文介绍了一种能减少污染、省时省力的电镜超薄切片染色方法。     

一种减少超薄切片污染的简单方法

电镜的超薄切片在染色过程中的污染是很难避免的，用传统的染色方法进行染色，操作麻烦且易污染，虽然现在有报道介绍各种避免切片污染的染色方法，但操作程序大都比较复杂，我们经过多次试验，认为采用以下方法可以基本上避免污染，且操作程序简单方便，染色效果也有了很大提高，方法如下。     

睡莲(Nymphaea tetragona)叶部厚壁细胞内钙的定位

睡莲(Nymphaea tetragona)叶部厚壁细胞(1),将透过细胞化学法加以钙定位的研究,应用锇酸/焦锑酸钾(osmium tetroxide—potassium pyroantimonate,OTPA)与钙作用产生沉淀,再介著电子显微镜之观察,可成功地对于植物细胞内之钙加以定位(2)。不同发育时期之叶片切成小片之后,经过2.5％戊二醛/2％焦锑酸钾/0.1％单宁酸/0.1M磷酸缓冲液加以2小时的前固定后,再经1％锇酸/2％焦锑酸钾/0.1M磷酸缓行冲液的后固定,经过丙酮系列脱水后再包埋于Spurr胶中,超薄切片将直接观察,或经漂浮处理于50mM EGTA(pH7.9)或蒸馏水(pH 7.9),60℃,1 hr后再加以观察,部分切片则经由醋酸铀及柠檬酸铅双重染色,超薄切片以日立 TEM,H—600,75KV观察。     

栉孔扇贝（Chlamys farreri）外套膜两种肌纤维的电镜观察

有材料指出栉孔扇贝外套膜 (以下简称套膜 )内有两组肌肉 :一是放射肌 ;二是环状肌。有关这两组肌肉的类型、微细结构等可供查阅的资料并不多见。作者在检查标本时 ,注意到栉孔扇贝套膜肌纤维有两种 :平滑肌与横纹肌。现整理如下。材料与方法取成体栉孔扇贝套膜组织 ,按常规电镜术固定、包埋 ,经半薄切片定位作超薄切片 ,经铀和铅双重染色 ,ＪＥＭ 12 0 0ＥＸ透射电镜观察。观察结果1　半薄切片光镜观察套膜厚约 1ｍｍ ,两面覆盖单层上皮。上皮下各有一薄层平滑肌 ,两层平滑肌之间为密集的大块肌组织。有的标本可清楚地看出为横纹肌纤维 ,有…     

Sato′S铅染液的改良及长期贮存法

Ｓａｔｏ′Ｓ铅染液的改良及长期贮存法杨传红赖晃文（广州军区广州总医院医学实验科，广州５１００１０）目的：解决铅离子与空气中的ＣＯ２结合，形成铅颗粒沉淀在超薄切片上，污染超薄切片的问题。方法：使用改良后经双层微孔滤膜过滤的Ｓａｔｏ′Ｓ铅染液，并在使用前...     

SARS CoV感染Vero E6的电镜研究

我们用广州地区临床确诊的SARS病人的咽拭子标本感染Vero E6细胞,将感染3天即严重病变的Vero E6细胞进行3％戊二醛和l％锇酸双固定,经乙醇脱水后用Spurt包埋剂包埋。样品进行超薄切片和用醋酸氧铀和柠檬酸铅双染色后即可用透射电子显微镜进行观察。正常的Vero E6细胞也同上操     

透射电镜电子染色方法的改良

为提高透射电镜生物样品超薄切片的染色效率,在传统染色方法基础上进行改良,使用自制染色装置,在较短时间内完成大批生物样品超薄切片的电子染色。与传统方法相比较省时省药,减少污染机率,电镜观察的超微结构清晰,反差较好。