实时荧光定量PCR检测人肝癌组织皮层肌动蛋白基因

目的建立实时荧光定量PCR检测皮层肌动蛋白基因表达水平的方法。方法提取人肝癌组织总RNA,RT—PCR扩增CTTN和GAPDH基因片段并分别构建两片段阳性表达载体。采用SYBR Green I实时荧光定量PCR绘制两基因拷贝数标准曲线,实测人肝癌标本并进行方法学评价。结果成功构建pMD18-T（＋）／CTTN和pMD18-T（＋）／GAPDH重组质粒。CTTN和GAPDH基因模板拷贝数分别在1．6×10^3-1．6×10^7和1．6×10^4-1．6×10^7之间时标准曲线有良好线性关系,R^2分别为0．996和0．985。由Ct值统计两基因组内变异系数分别为0．11％～2．25％和0．75％-3．63％;组间变异系数分别为0．83％～1．48％和0．47％～1．36％。组间无统计学差异（P〉0．05）。结论成功建立实时荧光定量PCR检测人肝癌组织CTTN基因的方法,为研究人肝癌组织CTTN基因表达水平奠定了方法学基础。     

实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA性能验证的临床应用

目的:探讨一种适合于临床实际应用的荧光定量PCR检测HBV-DNA性能验证方法。方法:参考美国临床实验室标准化协会(CLSI)性能验证的相关文件,应用实验室检测病人标本,室内质控数据,能力验证结果,按方法学性能评价指标设计验证试验,通过对实验结果的统计学分析,评价检测方法的性能是否符合临床预期用途。结果:本文荧光定量PCR检测HBV-DNA批内CV高、中、低水平分别为2.9%、2.6%和9.7%;批间CV高、低水平分别为3.7%和4.5%;实验室结果与参考靶值比较的回归方程为:y=0.9909x+0.0008;r2=0.9945;线性范围验证为7.30E2~2.51E7,线性回归方程为:y=1.0247x-0.2232;r2=0.9941;溶血时血红蛋白≤5g/l对本实验结果无影响。结论:经验证本实验荧光定量PCR检测HBV-DNA性能指标满足临床预期要求,常规应用结果满意;荧光定量PCR的性能验证是保证其检验质量的必要手段,选择适合的验证方案将会大大提高性能验证的临床应用。     

刚地弓形虫培养上清对人肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的作用

目的:研究刚地弓形虫RH株培养上清对体外培养的肝癌细胞HepG2增值的影响,并探讨其可能的影响机制.方法:取对数生长期的HepG2细胞,分别接种于96孔细胞培养板及50mL培养瓶中,加入200μL不同数量(3×107/mL、6×107/mL、12×107/mL)弓形虫RH株速殖子培养上清孵育24、48、36、72h后,四甲基氮噻唑蓝(MTT)法检测其对HepG2细胞增殖抑制作用;不同浓度弓形虫培养上清作用HepG2细胞48h后,DAPI染色,荧光显微镜观察细胞核形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞内钙离子浓度([Ca2+]i),Western-blot检测凋亡HePG2细胞内Caspase-3的表达.结果弓形虫培养上清能抑制HepG2细胞株增殖和诱导其凋亡,且呈时间剂量依赖性,各实验组与对照组比较有统计学意义(P＜0.05);HepG2细胞凋亡率和[Ca2+]i随浓度增加逐渐增加,12×107/mL时凋亡率和[Ca2+]i分别达到41.46％、128.4(荧光计数单位);Caspase-3的表达随上清浓度增加表达增强.结论:刚地弓形虫培养上清能够抑制肝癌HepG2细胞增殖,其诱导HepG2细胞凋亡可能与细胞内钙离子浓度上调和Caspase-3的表达增强相关.     

BPD-MA光动力作用对膀胱癌细胞凋亡及bcl-2蛋白表达的影响

目的:研究激光活化BPD-MA光动力诱导肿瘤细胞凋亡及其可能机制。方法:应用流式细胞仪分析BPD-MA光动力作用后细胞凋亡及免疫组化染色检测凋亡相关蛋白bcl-2蛋白表达水平。结果:激光活化BPD-MA光动力实验组人膀胱癌细胞株BIU-87凋亡发生率达26.11±2.59%,与对照组相比,差异非常显著性(P<0.01);光动力作用后膀胱癌细胞线粒体相关调控蛋白bcl-2表达显著低于对照组(P<0.05)。结论:激光活化BPD-MA光动力作用具有诱导人膀胱癌细胞株BIU-87凋亡的生物效应,而线粒体相关调控蛋白bcl-2表达水平的降低可能是激光活化BPD-MA光动力诱导人膀胱癌细胞株BIU-87凋亡的重要机制之一。     

Drosha蛋白在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨胰腺癌组织中Drosha蛋白表达状况及其临床意义。方法:收集胰腺癌样本85例及对应癌旁组织53例,采用HE和免疫组化法检测胰腺癌组织标本中Drosha蛋白的表达并分析其与临床病理因素之间的关系。采用定量PCR方法检测Drosha基因表达。结果:胰腺癌组织中Drosha的表达阳性率为72.9%(62/85),而相应癌旁Drosha表达阳性率为100%(53/53),两者表达差异有统计学意义(P=0.000),Drosha蛋白在胰腺癌中的阳性强度平均积分值由10.3分降至2.3分。Drosha蛋白的表达与肿瘤的分期(c2=19.2,P=0.0003)、分级(c2=10.8,P=0.013)、淋巴结转移(c2=23.6,P=0.00003)等密切相关。与对应癌旁组织相比,Drosha基因在胰腺癌组织中表达下调(P=0.000)。结论:Drosha蛋白在胰腺癌组织中表达下降,Drosha可能在胰腺癌的发生、发展中具有重要作用。     

5-ALA介导的光动力治疗在耐药白血病中的作用机制研究

目的: 本研究观察了5-氨基乙酰丙酸介导的光动力治疗(ALA-PDT)对耐药白血病细胞株HL-60/ADR的杀伤作用及对耐药白血病原代细胞存活率的影响。方法: 以耐药白血病细胞株HL-60/ADR为实验模型, 同时在11例白血病患者原代细胞中进行检测。实验分为4组, 对照组、单纯ALA组、单纯光照组及ALA＋PDT组。用MTT法测定细胞的存活率, 采用阳离子脂质荧光探针JC-1检测线粒体跨膜电位, 用Real-time PCR检测PDT前后HL-60/ADR细胞株中bcl-2基因及多药耐药基因MRP的表达变化。结果: ALA-PDT后HL-60/ADR细胞株线粒体跨膜电位出现快速下降, 0, 2, 4 h时线粒体跨膜电位崩塌的细胞比例分别升高至55.91%±2.60%、64.27%±1.08%、82.17%±0.43%, 与对照组相比皆有显著差异(P＜0.05), 呈时间依赖性。而单纯ALA组和单纯光照组则无明显变化。HL-60/ADR细胞株在ALA-PDT后Bcl-2和MRP基因均呈明显下降趋势。在初发和复发难治急性白血病原代细胞中ALA＋PDT组均显示较强的光动力效应。结论: ALA-PDT诱导的HL-60/ADR细胞的杀伤可能与其影响线粒体跨膜电位有关, 即通过影响线粒体功能促进细胞凋亡。同时表明ALA介导的光动力作用部分是通过在基因转录水平下调抗凋亡基因Bcl-2而促进凋亡的发生, 另一方面通过下调耐药基因MRP的表达而部分逆转耐药。同时ALA-PDT对原代白血病细胞同样有较大的抑制作用。     

PTEN在氯化锂-匹罗卡品癫痫模型中的表达研究

目的：检测第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten ,PTEN）在癫痫模型大鼠中的表达情况,初步探讨其在癫痫发病中的作用。方法：成年雄性SD 大鼠腹腔注射氯化锂-匹罗卡品（lithium -pilocarpine ）构建癫痫模型,分别在癫痫发作后不同时间点（1 d、3 d、7 d、14 d、30 d）提取海马组织,利用荧光定量PCR和western blot分别测定PTEN mRNA和蛋白质的表达。结果：荧光定量PCR和western blot显示,PTEN mRNA 和蛋白质在癫痫发作后1 d的表达显著降低（P＜0．05）,到30 d 时仍维持在较低的水平（P＜0．05）。结论：PTEN在氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠海马组织中表达的降低,提示PTEN可能参与了癫痫的发生发展过程。     

拟南芥转录因子WRKY18在花粉发育中的功能分析

WRKY蛋白是近年来在植物中发现的一类转录因子家族,本研究从拟南芥中克隆得到转录因子WRKY18的DNA序列,利用荧光体式显微镜观察酵母单杂交菌落,确定了该转录因子与DNA序列TTGACT结合。分别通过半定量、实时荧光定量PCR技术检测其在不同组织及花药发育不同时期的表达,发现该转录因子为组成型表达。该基因在成熟拟南芥根、茎、叶、花的各个组织中均有表达,而在花药发育的9、10时期表达量显著高于其它时期。分别使用扫描电子显微镜和光学显微镜观察比较突变体与野生型植株的花粉形态差异和花粉萌发情况,发现WRKY18对拟南芥花粉发育有重要影响,WRKY18缺失造成拟南芥花粉外形异常、花粉萌发率降低。本研究对进一步分析转录因子WRKY18在拟南芥花粉发育过程中的表达与调控作用具有一定的基础意义。     

临床血清循环miRNAs定量技术的建立

目的建立可靠的临床血清(浆)循环miRNAs定量技术。方法常规收集血清(浆)标本,mirVana PARIS试剂盒法抽提血清(浆)总RNA,采用DNaseI消化总RNA提取液,以miRNAs特异性茎-环引物引导反转录,通过TaqMan实时荧光定量PCR对U6及靶miRNAs进行检测。结果10份新鲜血浆总RNA浓度介于3.5～35.4ng/μl之间。对常规收集的400μl临床血清标本中U6、miR-16、miR-224均能实现特异扩增及定量,相应的平均Ct值约为30、25及32。6份不同留置时间血清标本总RNA浓度分别10.24和4.46ng/μl,定量PCR结果显示其中相应miR-16和miR-224的丰度却相对稳定。结论血清(浆)总RNA抽提及循环miRNAs定量切实可行。     

Cs(6P)激发态的辐射及与Ne碰撞的能量转移

应用激光吸收和荧光方法,测量了Cs(6P)态与Ne碰撞的精细结构转移和碰撞猝灭截面.Cs原子被激光激发到6P3/2态,将与泵浦激光束反向平行的检测激光束调到6PJ→8S1/2的跃迁,测量6PJ激发态的密度及空间分布,由此计算了6PJ→6S的有效辐射率.在T=337 K和Ne密度0.5×1018＜N＜4×1018cm-3范围内测量了6P1/2→6S1/2(895 nm)发射的敏化荧光强度I895,量N/I895与N有抛物线型的关系,表明6PJ的猝灭是由于与Ne原子的碰撞产生的,而不是由与Cs基态原子碰撞产生的.由最小二乘法确定的二次多项式的系数得到6P态与Ne碰撞精细结构转移截面σ21=(1.90±0.82)×10-19 cm2,猝灭截面σD=(8.97±3.85)×10-19 cm2.     

杂质吸收对光子晶体滤波器设计的影响

为了研究杂质的吸收对光子晶体滤波器设计的影响,引入复折射率并利用特征矩阵法,计算了滤波透射峰的峰值和半峰全宽。滤波透射峰的峰值随杂质的消光系数增加而迅速减小,滤波通道透射峰的半峰全宽随消光系数增加而增大,滤波透射峰的峰值和半峰全宽都随吸收杂质的光学厚度的增加而减小。结果表明,设计光子晶体滤波器时,必须考虑杂质吸收这一重要因素,应选择消光系数小于0.002的掺杂材料,并且杂质的光学厚度应设计在2(λ0/4)左右。     

非同相口径场瞬态辐射的计算

利用电磁脉冲的口径瞬态辐射场计算公式,针对圆形口径的线性相移、平方律相移等非同相口径场情况,计算了辐射高斯脉冲时的能量方向图、半能量波瓣宽度、面积利用系数等参数.计算表明,对于圆形口径非同相口径场,最大辐射场的方向为口径面法线方向,同时能量方向图关于口径面法线方向对称;随着口径的增大,波瓣变窄,无副瓣;随着平方律相移的滞后参数的增加,波瓣变宽,主瓣不分裂.     

电工学课件的研制

介绍了将Authorware用于制作《电工学》课件过程和方法,该软件制作的课件具有良好的动态画面及特技效果、体系完整、操作方便、易学易用。     

两种自适应杂波抑制技术的比较：AMTI及ADPCA技术性能的分析和比较

本文在讨论机载雷达地面杂波回波的基础上，分析了ＡＭＴＩ和ＡＤＰＣＡ系统的性能。对这两个系统从原理上，并利用计算机模拟结果及实验结果进行了比较。本文将有助于工程实现。     

近红外光谱技术在水果品质无损检测中应用的研究与现状

简单概述了我国水果产业的发展现状,着重阐述了国内外利用近红外光谱技术进行水果品质无损检测的最新研究进展,分析了当今研究中存在的问题,并对利用近红外光谱技术进行水果检测的前景进行了展望,提出了一些建议。     

水的光学特性对水下光学成像质量影响的分析

水的光学特性对光学成像质量有着重要的影响,水对光的吸收、散射作用可造成光在水介质传播中的衰减,本文就水的光学特性及其对水下光学成像质量的影响进行了分析,以为成像系统在水下的应用提供基础的理论依据。     

中文电子签名认证的预处理技术研究

中文电子签名认证的预处理技术包括阈值技术、字切分和规范化。文章对这几种技术进行了全面的分析，并给出了相应的实验结果。     

星载差分吸收光谱仪转动部件测试系统设计

基于星载差分吸收光谱仪转动部件控制需求,设计了星载光谱仪转动部件的测试系统。采用微动开关复位加定步的电机运动方式实现电机的精确定位。采用脉冲调制（PWM）的方式实现驱动电流的精细调节。并搭建平台对系统进行重复性测试,实验结果表明,测试系统具有较高的可靠性和稳定性,能够满足光谱仪的精确定位要求,使电机在工作寿命内按计划完成定标工作。     

汉语双音节中第一音节的元音共振峰轨迹研究

汉语中,协同发音主要取决于相邻前一音节末尾的元音,以及相邻后一音节首的辅音。主要考察在汉语普通话双音节中,第一音节元音韵母和不同第二音节声母组合时对第一个音节元音共振峰轨迹的影响。元音韵母选用元音三角形的3个顶点的元音,总结了轨迹变化的规律。     

电子技术基础实验课程混合式教学设计

近年来,在线学习掀起了一场席卷全球的教育革命,MOOC/SPOC、翻转课堂、混合式教学对高等教育带来了前所未有的冲击。电子技术基础实验课程地位特殊,传统教学方式已无法满足创新性人才培养的需要,文章从其教学特点出发,提出了“线上教学+自主实验+翻转课堂”的混合式教学模式,同时还阐述了与此密切相关的集约化线上教学资源平台、智能化翻转教学环境以及多元化过程性考核评价机制三个重要环节。经研究发现,学生的课堂主动参与度、自主学习能力、创新思维能力、动手实践能力以及教师的教学创造力得到全面提升。教学环境支持课堂互动和全周期教学行为数据采集,体现了教学过程的信息化、教学实施的精准化和教学评价的客观化,实现了信息技术与实验教学的深度融合。