木瓜凝乳蛋白酶的分离纯化

采用硫酸铵分级沉淀与离子交换相结合的方法从市售的木瓜蛋白酶干粉中分离纯化木瓜凝乳蛋白酶。结果表明Macro-Prep High S Support离子交换树脂比SP-Sepharose Fast Flow离子交换树脂能更好的分离纯化木瓜凝乳蛋白酶，经Macro-Prep High S Support交换树脂二次纯化的木瓜凝乳蛋白酶已达到了与标准品同样的纯度。     

单环刺螠纤溶酶UFE-Ⅱ的分离纯化及其酶学性质

目的分离纯化单一组分的单环刺螠纤溶酶UFE-Ⅱ,并分析其酶学性质。方法单环刺螠体腔液经离心、超滤、离子交换层析、凝胶过滤等方法进行分离纯化,得到单一洗脱峰酶组分,经Native-PAGE、SDS-PAGE和飞行质谱分析,测定其纯度和相对分子质量;并以酪蛋白为底物,Folin-酚试剂法测定酶活力,对其酶学性质进行分析。结果分离纯化的UFE-Ⅱ具有水解纤维蛋白的活性,其水解酪蛋白的比活力达到375.6U/mg,纯化倍数为10.3倍,回收率为14.0%。UFE-Ⅱ为单一组分,纯度达99%以上,相对分子质量为24329。UFE-Ⅱ的最适反应温度约为45℃;最适反应pH值为7.0;Ca2+、Mn2+和Fe2+是该酶的强激活剂;Fe3+、Cu2+和Pb2+对该酶活力具有一定的抑制作用;SBTI和PMSF能完全抑制酶活力,表明该酶为丝氨酸蛋白酶;糜蛋白酶抑制剂可部分抑制酶活力,亮抑酶肽、抑蛋白酶肽、苯甲脒可较弱地抑制酶活力。结论从单环刺螠体内成功分离纯化出纤溶酶UFE-Ⅱ,并分析了其酶学性质,该酶具有进一步开发利用价值。     

大肠杆菌L- 天冬酰胺酶的分离纯化及其特性

目的 建立简单有效的L- 天冬酰胺酶分离纯化工艺，研究L-天冬酰胺酶的特性。方法 采用冷丙酮破壁处理，经稀碱液抽提、离子交换层析和亲和层析进行纯化。通过温度试验、pH试验、SDS－PAGE图谱、紫外吸收光谱等研究酶的特性。结果 建立了简单高效的纯化工艺，可使L-天冬酰胺酶的纯度达94．4％，比活为520u/mg蛋白，总收率为65．7％。L-天冬酰胺酶的相对分子质量分别为143900和166700，均为有抗癌活性的EC－2组分，在270nm有最大吸收。最适作用温度为40－50℃，最适作用州为8.0-9.0在40℃以下能保持稳定。结论建立了大肠杆菌L-天冬酰胺酶的分离纯化工艺，并研究了L-天冬酰胺酶的酶学特性。     

酸性蛋白酶AP-10分离纯化及其酶学性质

采用活性炭吸附脱色、硫酸铵分级沉淀、脱盐和凝胶层析等技术对酸性蛋白酶AP-10浓缩液进行了分离纯化,并对其酶学性质进行了研究。结果表明,分离纯化后得到的酸性蛋白酶AP-10纯组分比酶活为5 800 U·mg^-1,纯化倍数为6倍;最适反应温度为40℃,热稳定范围为30～45℃;最适反应pH值为3.0,pH值稳定范围为3.5～6.5;Mn²⁺对酸性蛋白酶AP-10具有强烈的激活作用,Fe²⁺对酸性蛋白酶AP-10具有强烈的抑制作用。为拓展酸性蛋白酶AP-10的应用及开发高品质产品奠定了基础。     

微生物酶分离纯化研究进展

在对常规的微生物酶分离纯化方法如沉淀法、疏水层析、凝胶过滤、离子交换层析及亲和层析等的特点、原理及应用进行介绍的基础上,概述了膜处理技术、免疫纯化技术、双水相体系萃取等新颖微生物酶分离纯化技术。指出常规方法和新颖方法的结合为微生物酶带来了高效的分离纯化效果,开发先进、灵活的蛋白质化学技术分离纯化天然酶、重组酶、人工模拟酶及杂合酶势在必行。     

产芽孢梭菌纤溶酶的纯化及特性

目的 从产芽孢梭菌的培养上清中分离纯化出具有纤溶活性的蛋白质。方法 以产芽孢梭菌的培养上清为材料，经过滤、硫酸铵盐析、离子交换层析纯化纤溶酶，并对其理化特性和纤溶活性进行鉴定。结果 所分离纯化的纤溶酶相对分子质量为67000，系由相对分子质量45000和20000的2个亚基组成，具有较强的溶解纤维蛋白的作用。此酶属丝氨酸蛋白酶类，胰蛋白酶类。结论 为纤溶酶的开发和应用提供了依据。     

沙蚕消化道细菌D2胞外蛋白酶的分离纯化及其性质

目的分离纯化沙蚕消化道菌D2胞外蛋白酶,并对其性质进行分析。方法收集48 h发酵液上清,经80%饱和硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose阴离子交换层析、Superdex G-75凝胶过滤层析逐步纯化D2蛋白酶,分析其酶学性质,并用ESI-MS/MS测定其酶解后的部分氨基酸序列。结果经纯化,得到电泳纯的D2蛋白酶,纯化倍数为4.9倍,活性回收率为33%,相对分子质量约42 000,纯度大于99%;最适作用温度为60℃,最适pH为9,在pH6~11及0~60℃具有较好的稳定性,水解酪蛋白的Km值为2.44 mg/ml;Cu2+、Ca2+、Mg2+、K+等金属离子对酶活力有明显促进作用,EDTA和PMSF对酶活力有强烈抑制作用;该酶对尿素、SDS、DTT等变性剂有较好的耐受性,其两个内部肽段经质谱测序,序列分别为AHGFLPLTK和APSATG-GSALYPLEFVVGK。结论该酶为一高温碱性丝氨酸蛋白酶,具有较高的工业开发价值和较大的应用潜力。     

Candida sp.脂肪酶的纯化及其性质

采用简单的两步法-离子交换层析和疏水层析法,对Candida sp. 99-125脂肪酶进行了纯化,比活提高了10.0倍,达到27200 U/mg,回收率为35.5%. SDS-PAGE电泳分析显示该酶的分子量约为38 kDa. 酶学性质研究表明,该酶最适反应温度为40℃,最适反应pH值为8.5,在室温下具有良好的稳定性. 钙离子和Tween80能够促进提高脂肪酶的活性,而铁离子、铜离子和SDS对其有明显的抑制作用.     

木瓜凝乳蛋白酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

目的构建木瓜凝乳蛋白酶(CP)的表达载体,并在大肠杆菌中表达。方法从生番木瓜中提取mRNA后进行反转录,得到木瓜凝乳蛋白酶的cDNA,PCR产物克隆到pET22-b(+)载体中,重组质粒转化至大肠杆菌BL21,进行诱导表达及表达产物的检测。结果表达产物的SDS-PAGE显示单一条带,相对分子质量约为26000。Western blot表明表达产物可与抗木瓜凝乳蛋白酶特异性抗体结合。结论CP基因已成功在大肠杆菌中克隆表达,为进一步纯化和动物实验奠定了基础。     

真菌细胞溶壁酶的分离纯化及其酶学性质研究

采用长梗木霉(Trichoderma Longibrachiatum Rifai)958-11菌株,经过发酵,分离提纯出一种真菌细胞溶壁酶,并对其进行酶学性质研究。长梗木霉培养,利用:(NH4)2SO4沉淀,sartobind S离子交换层析和Sephacryl S-200柱层析对该发酵液进行分离纯化,用担子菌做为酶反应的底物研究该酶的酶学性质。经发酵获得的酶液,可在最佳反应条件下,1～2h内产出原生质体105～106个/毫升酶液。酶反应最适温度为30℃,最适pH为5.4,可以在0.6mol/L的氯化钾或0.6mol/L的硫酸镁为等渗液的条件下,溶解部分担子菌的细胞壁,得到高活力的原生质体。     

电渗析过程传质模型的研究进展

电渗析是一种利用离子交换膜和电势差从溶液及其他不带电组分中分离出离子的物质分离过程，该技术具有适应性强、预处理简单、能耗低、环境污染小等优点，被广泛应用于化工、生物等领域的分离纯化过程。本文主要介绍了用于电渗析分离过程的6种传质模型，总结了各模型的优势及存在的问题，指出限制电渗析技术进一步发展的主要原因是对包含物质传递、浓差极化、流体流动行为、电解质溶液-膜平衡等复杂现象的电渗析过程进行理论和实验研究难度大，而传质模型化为电渗析分离过程的物质传递研究提供了一条有效途径，有助于深入研究电渗析过程中物质的传递机理，准确预测分离性能并导向性优化电渗析结构设计和操作工艺。并且提出未来电渗析传质模型的研究方向是结合经验方程或传质系数进一步优化传质模型，并采用仿真工具模拟传质过程，提高模型的准确性和普适性。     

过氧化氢中无机杂质净化技术进展

综述了过氧化氢中无机杂质的来源和高纯过氧化氢生产中无机杂质的净化技术研究进展,这些技术包括：精馏法、离子交换树脂法、吸附法、结晶法、絮凝法、膜分离技术,以及这些技术的组合净化技术等.精馏净化产品纯度不高,但技术成熟,可工业放大;膜分离净化技术较安全,但膜的寿命短;离子交换树脂工艺简单,净化效率高,但树脂易被氧化.指出以精馏为前净化技术,再与膜分离、树脂法相结合是无机杂质去除技术的发展趋势.     

湿法磷酸除镁技术研究进展

湿法磷酸中金属离子杂质的净化一直是磷酸净化技术的难点,特别是镁离子的分离。主要介绍了反胶团溶剂萃取法、离子交换法、液膜分离法、化学沉淀法、反渗透法和浓缩法在湿法磷酸净化除镁过程中的研究进展,分析了各种方法的优缺点和工业应用上的局限,展望了湿法磷酸除镁技术研究的发展方向。着重指出了液膜分离法具有选择性强、分离效果好、传质效率高、流程简单、能耗低等特点,和其他方法的结合能有效净化湿法磷酸中的金属阳离子,在工业上有十分广阔的应用前景。     

Purification and concentration of gluconic acid from an integrated fermentation and membrane process using response surface optimized conditions

A response surface method was used to optimize the purification and concentration of gluconic acid from fermentation broth using an integrated membrane system. Gluconobacter oxydans was used for the bioconversion of the glucose in sugarcane juice to gluconic acid (concentration 45 g·L^-1) with a yield of 0.9 g·g^-1. The optimum operating conditions, such as trans-membrane pressure (TMP), pH, cross-flow rate (CFR) and initial gluconic acid concentration, were determined using response surface methodology. Five different types of polyamide nanofiltration membranes were screened and the best performing one was then used for downstream purification of gluconic acid in a flat sheet cross-flow membrane module. Under the optimum conditions (TMP=12 bar and CFR=400 L·h^-1), this membrane retained more than 85% of the unconverted glucose from the fermentation broth and had a gluconic acid permeation rate of 88% with a flux of 161 L·m^-2·h^-1. Using response surface methods to optimize this green nanofiltration process is an effective way of controlling the production of gluconic acid so that an efficient separation with high flux is obtained.     

离子交换法的发展趋势及应用

离子交换法是利用离子交换剂与溶液中的离子发生交换作用而使离子分离的方法。如今,离子交换分离技术取得了突飞猛进的发展,成为了现代各个工业中净化与分离的中流砥柱。阐述了离子交换分离法的发展以及最新的应用进展,从重金属污水处理、食品工业、医药卫生以及清洁能源等方面综合阐明离子分离技术以及离子交换树脂在诸多领域中的重要作用。     

中性蛋白酶的单甲氧基聚乙二醇修饰

目的利用单甲氧基聚乙二醇(mPEG)化学修饰中性蛋白酶,并考察修饰酶的酶学性质。方法采用氰脲酰氯对mPEG5000进行活化,再对中性蛋白酶进行化学修饰,制得mPEG-中性蛋白酶,并比较中性蛋白酶在修饰前后的红外光谱和酶学性质。结果中性蛋白酶的修饰率为41.7%;红外光谱分析表明,修饰酶红外光谱图的多处特征峰有较大的改变;其最适温度和最适pH值未发生变化,但修饰酶的热稳定性显著提高。结论确定了经mPEG化学修饰中性蛋白酶的最适温度和最适pH值,获得的修饰酶热稳定性高于天然酶。     

膜分离技术在医药医疗中的研究和应用

论述了膜分离技术在医药生产和医疗中的应用以及国内外在这一领域的研究进展,如中药的提取和精制;西药和生物制剂的分离、浓缩和纯化;人工肾和人工肺。分析了膜分离技术在医药生产中的优点、存在的题及解决措施,并指出其发展趋势。     

双水相萃取法分离纯化黄酮类化合物的研究进展

综述双水相体系的组成、特点和双水相萃取法分离纯化黄酮类化合物的研究进展。双水相萃取是一项利用不复杂的设备,并在温和条件下进行简单的操作就可获得较高收率和有效成分的新型分离技术,该技术在黄酮类化合物的分离分析中取得了较好的效果,有望成为一种新型的黄酮类化合物的分离纯化方法。