缬氨酸薄荷酯制备及生物活性研究

以L-缬氨酸和薄荷为原料,以二环己基碳二亚胺(DCC)及4-二甲氨基吡啶(DMAP)为催化剂合成了缬氨酸薄荷酯,利用核磁、质谱及红外对产物进行表征。利用电休克惊厥实验及抑制HeLa细胞增殖实验分别对缬氨酸薄荷酯的抗癫痫及体外抑制肿瘤活性进行了初步研究。在最大电休克惊厥实验中,小鼠腹腔注射给药,当缬氨酸薄荷酯给药量为100mg/kg时,与生理盐水组及卡马西平组相比, 4只预筛选过的小鼠,在0.5 、1、2、3、4 h后出现的惊厥数分别为2、2、1、0、0只,显示出了与对照品卡巴列平类似的抗癫痫活性;在体外抗肿瘤活性实验中,与对照组相比,抑制率最高达到52.5%,显示出了明显的抑制肿瘤细胞增殖的能力。     

Fe~(2+)活化H_2O_2/PS降解卡马西平的主要影响因素研究

采用亚铁离子活化H_2O_2/PS(过硫酸盐)降解水中的卡马西平(CBZ),对亚铁离子活化H_2O_2/PS降解卡马西平的影响因素进行了研究。结果表明,n(H_2O_2)/n(PS)为3∶1、Fe~(2+)的浓度为0. 1 mmol/L、pH=3、反应时间为30 min时,卡马西平的降解率达到62. 9%。增加Fe~(2+)的浓度能提高卡马西平的降解效率,增加卡马西平的初始浓度会降低卡马西平的去除率,但提高了卡马西平总的去除量。通过甲醇和叔丁醇淬灭实验验证了在亚铁离子活化H_2O_2/PS体系中HO·是主要的反应自由基。该研究为降解水中卡马西平提供了一种技术支持。     

氨氯地平对小鼠肝癌H_(22)细胞的抑制作用及其机制

目的探讨氨氯地平对小鼠肝癌H22细胞的抑制作用及其机制。方法采用MTT法检测氨氯地平对小鼠肝癌H22细胞增殖的影响。建立肝癌H22荷瘤小鼠模型,观察氨氯地平对荷瘤小鼠肿瘤的抑瘤率;HE染色观察肿瘤组织的病理改变;免疫组织化学方法检测肿瘤组织中bcl-2和bax蛋白的表达水平。结果氨氯地平作用48h可显著抑制小鼠肝癌H22细胞增殖,且呈剂量依赖性,其半数抑制浓度为5.6×10-3mg/ml。体内试验显示,氨氯地平(3和10mg/kg·d)灌胃给药10d能显著抑制H22荷瘤小鼠肿瘤生长;HE染色可见,氨氯地平给药组小鼠肿瘤细胞核染色变浅,细胞排列紧密;免疫组化显示,氨氯地平给药组小鼠肿瘤组织内bcl-2蛋白表达下调,而bax蛋白表达上调。结论氨氯地平具有明显的抑瘤作用,其抑瘤机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡相关。     

热活化过硫酸盐降解水中卡马西平

以典型抗癫痫药物卡马西平为目标污染物, 研究热活化过硫酸盐(thermally activated persulfate, TAP)技术对其的降解效果。此外, 还考察了过硫酸盐初始浓度、温度和零价铁投加量等对降解效果的影响。结果表明, 随着过硫酸盐初始浓度的增加, 降解速率常数提高, 不同温度下卡马西平降解速率常数与过硫酸盐初始浓度表现出良好的线性关系。提高系统温度能够提高卡马西平的降解速率。TAP氧化卡马西平符合拟一级动力学, 反应活化能E_a为(120.4±2.6)kJ·mol^-1。在TAP系统中加入少量零价铁能够显著地提高卡马西平的降解速率和矿化度。当温度为60℃时, 零价铁的最佳投加量为0.05 g·L^-1。硫酸自由基易于对卡马西平分子结构中氮杂卓环的烯烃双键进行攻击, 主要生成羟基化卡马西平、环氧卡马西平、吡啶类醛和酮等中间产物。     

灵芝精粉与灵芝孢子粉对Lewis肺癌模型小鼠免疫功能的影响

目的研究灵芝精粉与灵芝孢子粉对Lewis肺癌模型小鼠免疫功能的影响,并比较二者在肿瘤治疗中的免疫调节作用。方法经C57BL/6小鼠右腋皮下接种1×106个Lewis肺癌细胞,建立小鼠Lewis肺癌模型。于接种肿瘤细胞次日至第20天,分别隔日灌胃灵芝孢子粉(D1)、灵芝精粉001(D2)及灵芝精粉002(D3),剂量均为0.5g/kg,同时设立对照组和肿瘤组(灌胃等体积生理盐水)。监测各组小鼠体重及瘤体积,第21日处死小鼠,称量瘤重,并无菌制备脾细胞悬液,检测小鼠NK细胞杀伤活性,流式细胞术检测小鼠脾细胞中CD4+、CD8+T细胞和B细胞数量,淋巴细胞转化试验检测脾细胞中T、B细胞增殖功能。结果与对照组比较,肿瘤组小鼠脾细胞中T、B细胞增殖功能、细胞数量及NK细胞杀伤活性均有不同程度的下降。与肿瘤组相比,3种灵芝制剂均可提高Lewis肺癌模型小鼠NK细胞的杀伤活性和T、B细胞增殖功能,其中,以D2作用最为明显(P<0.05);3种灵芝制剂均可不同程度地提高Lewis肺癌模型小鼠CD4+、CD8+T细胞数量,其中,以D3作用最为显著(P<0.05)。3种灵芝制剂对Lewis肺癌模型小鼠的体重、瘤重、瘤体积及B细胞数量均无明显影响。结论灵芝制剂对Lewis肺癌小鼠的免疫功能具有正向调节作用,其中灵芝精粉的作用优于灵芝孢子粉。     

小鼠骨髓间充质干细胞对异基因肝移植大鼠淋巴细胞增殖的抑制作用

目的观察小鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)移植后,在异基因肝移植模型大鼠胸腺、脾脏及骨髓中的迁徙、定居情况及对淋巴细胞增殖的抑制作用,以探讨MSCs诱导异基因移植免疫耐受的可能性。方法体外分离、纯化并培养小鼠MSCs;将小鼠肝组织块埋入大鼠肝脏切口,建立异基因肝移植大鼠模型;经尾静脉移植DAPI标记的小鼠MSCs,通过激光共聚焦显微镜观察24 h及5 d时,MSCs在模型大鼠胸腺、脾脏及骨髓内的迁徙及定居;采用体外淋巴细胞增殖实验检测小鼠MSCs对异基因肝移植大鼠淋巴细胞增殖的抑制作用。结果MSCs移植后,24 h即散在分布于胸腺、脾脏及骨髓内,5 d时集中在血管周围;经MSCs治疗后,大鼠胸腺和脾脏淋巴细胞增殖均受到抑制,与未经治疗的模型大鼠相比,差异有显著意义。结论小鼠MSCs可迁徙至异基因肝移植大鼠免疫器官内,并具有抑制淋巴细胞增殖的作用。     

偶氮氯膦Ⅲ探针吸收光谱法测定药物中的卡马西平

建立了简便、快速、准确测定卡马西平的单波长和双波长可见吸收光谱法,探讨了反应条件、共存物质的影响及光谱特征。在弱酸性溶液中,偶氮氯膦Ⅲ与卡马西平以静电引力结合生成具有2个正吸收峰的离子缔合物,最大和次大正吸收波长分别为614 nm和666 nm,在此2个波长处,卡马西平的质量浓度在0~4.7 mg/L范围内与吸光度A呈线性关系,服从朗伯-比尔定律,表观摩尔吸光系数(κ)分别为1.58×10~4L/(mol·cm)(614 nm)和1.20×10~4L/(mol·cm)(666 nm)。用双波长叠加法测定时,其表观摩尔吸光系数(κ)达2.78×10~4L/(mol·cm),方法的回收率为98.0%~102%,相对标准偏差RSD(n=5)为2.3%~2.7%。该方法可用于药片中卡马西平的测定。     

人用狂犬病脂质体疫苗的免疫效果

目的对狂犬病脂质体疫苗进行免疫效果评价。方法用狂犬病脂质体疫苗和无佐剂疫苗分别免疫小鼠,以NIH法检测保护效力,RFFIT法检测中和抗体,流式细胞仪检测淋巴细胞表面标记,体外实验法检测淋巴细胞增殖能力,乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞活性,ELISA检测试剂盒检测免疫后小鼠IL-2和IFN水平。结果狂犬病脂质体疫苗与无佐剂疫苗相比,可提高效力2~3倍,脂质体疫苗组中和抗体水平明显高于无佐剂疫苗组,两组之间差异有显著意义。狂犬病脂质体疫苗可增强细胞免疫,小鼠CD4+/CD8+比例、淋巴细胞增殖指数、NK细胞活性、IL-2及IFN活性与无佐剂疫苗相比,差异均有显著意义。结论狂犬病脂质体疫苗可同时增强细胞免疫和体液免疫。     

紫花前胡素对CCl_4致小鼠肝损伤的保护作用

目的:观察紫花前胡素(Decursin)对四氯化碳(CCl_4)致小鼠急性肝损伤的改善作用并探讨其可能的机制。方法:50只健康雄性ICR小鼠随机分成5组,正常对照组,急性肝损伤模型组,紫花前胡素低、中、高剂量组。隔天灌胃给药,共30天;腹腔注射CCl_4玉米油溶液诱导小鼠急性肝损伤,处死取血和肝脏。测定各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)及天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性,小鼠肝脏组织中CYP2E1的含量,在体外检测紫花前胡素清除超氧阴离子及羟自由基的能力。结果:不同剂量紫花前胡素能够抑制CCl_4引起的血清ALT及AST的升高,并且能够减少肝组织匀浆中CYP2E1的产生。此外,紫花前胡素在体外能够清除超氧阴离子及羟自由基。结论:紫花前胡素对CCl_4导致的小鼠急性肝损伤具有一定的保护作用,推测可能是通过抑制细胞色素酶CYP2E1的产生进而减少三氯甲基等自由基的产生以及自身的抗氧化能力实现预防和改善急性肝损伤。     

4种中草药乙醇提取物体外抗氧化及美白活性研究

采用乙醇浸提法从干燥的芦荟叶、白芷、怀山药和黄芩4种中草药中提取分离得到其乙醇提取物。应用自由基清除活性和总抗氧化活性检测方法评估这4种中草药乙醇提取物的抗氧化活性,应用酪氨酸酶活性抑制实验、黑色素B16细胞增殖抑制和黑色素生成抑制实验对其进行美白活性评估。结果表明:4种中草药的乙醇提取物虽然具有一定的抗氧化活性、清除自由基能力、抑制酪氨酸酶活性、抑制黑色素B16细胞增殖和黑色素形成作用,但与市售护肤品常用的抗氧化美白功效成分BHT(2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚)相比,其活性水平偏低,需要进一步分离纯化,富集活性成分,提高抗氧化美白活性。     

抗瘤酮A_(10)、5Fu、GM-CSF和IL-2的抗癌效果

目的　比较A1 0 、5Fu、GM CSF和IL 2的抗癌效果。方法　选取NIH小鼠 ,分别腹腔接种肝腹水HeP A 2 2细胞、骨肉瘤S180细胞及胃癌MFC细胞 ,10d后将注射每种细胞的小鼠分为 3组 ,每组 12只 ,分别于小鼠腹腔注射A1 0 、5Fu、GM CSF和IL 2 ,每日 1次 ,每次 1ml 只 ,连续给药 8d后改为每 3d给药 1次 ,观察小鼠生存时间及抑瘤效果。结果　A1 0 、5Fu、GM CSF及IL 2均能延长小鼠生存时间 ,A1 0 抑制肝HeP A 2 2肿瘤效果显著。结论　A1 0 、5Fu、GM CSF和IL 2均有抑制癌细胞生长作用     

藜芦胺类似物的合成及体外抗肿瘤活性研究

以黎芦属植物中含量丰富的甾体生物碱藜芦胺(Ⅰ)为原料,经结构修饰,共得到5种藜芦胺类似物Ⅱ~Ⅵ。经核磁共振谱、质谱确定化合物结构。以已知的Hedgehog信号通路抑制剂环巴胺为阳性对照,采用人胃癌细胞SGC-7901和人胰腺癌细胞Aspc-1进行体外抑制肿瘤细胞增殖活性筛选。结果表明,化合物Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ的抑制肿瘤细胞增殖活性优于环巴胺。初步构效关系研究表明,在藜芦胺的哌啶环上引入烟酸及对硝基苯甲酰基团,可显著提高其抗肿瘤活性。     

双靶点抗组胺化合物的设计、合成及活性研究

以H1受体拮抗剂地氯雷他定为基本骨架,采用药效团和生物电子等排原理,设计合成了3个新型具有H1/H4双重拮抗活性的化合物,并对其进行了体外H1/H4靶点活性检测、脂多糖(LPS)致小鼠急性炎症因子释放和组胺诱导小鼠皮肤血管通透性实验研究。实验结果显示,3个化合物均具有H1/H4双重拮抗活性和显著的抗炎、抗过敏活性,且可减少LPS诱导小鼠TNF-α释放(P0. 01),抑制组胺引起的毛细血管通透性增高(P0. 01),抗炎、抗过敏活性优于地氯雷他定和卢帕他定,具有很高的开发价值。     

肿节风注射液对荷瘤小鼠T淋巴细胞增殖活力及NK细胞活性的影响

目的研究肿节风注射液(ZJF)对荷瘤小鼠T淋巴细胞增殖活力及NK细胞活性的影响,探讨其抗肿瘤作用的机制。方法无菌取C57BL/6纯系小鼠脾脏,制成5×106个/ml的单个脾细胞悬液,MTT法检测不同浓度(50、25、12.5、6.25和3.13 mg/ml,以生药量计)的ZJF对正常小鼠T淋巴细胞增殖的影响。将近交系615小鼠经左腋皮下注射小鼠前胃癌Fc细胞(1×106个/ml,0.2 ml/只),复制荷瘤小鼠模型,并随机分成5组:ZJF低、中、高剂量组(给药剂量分别为2、10、20 mg/kg,以生药量计)、CTX组[0.3 g/(kg·3 d)]及阴性对照组(生理盐水0.1 ml/10 g),MTT法检测ZJF对荷瘤小鼠T淋巴细胞增殖及NK细胞活性的影响。结果 ZJF可显著促进正常小鼠T淋巴细胞的增殖(P<0.05),且呈剂量依赖性;ZJF低、中、高剂量组荷瘤小鼠T淋巴细胞的增殖活力明显高于阴性对照组(P<0.05),且呈剂量依赖性,ZJF中、高剂量组荷瘤小鼠NK细胞的活性明显高于阴性对照组(P<0.05)。结论 ZJF可促进正常小鼠与荷瘤小鼠T淋巴细胞的增殖活力,增强NK细胞活性,为其抗肿瘤作用机制的研究提供了实验依据。     

三肽D-Trp-Arg-Leu-NH2抑制B16黑色素瘤细胞黑色素合成的机制

为了研究三肽D-Trp-Arg-Leu-NH₂(dWRL)对小鼠B16细胞的酪氨酸酶(TYR)活性、黑色素合成及相关基因和蛋白表达的影响，探讨dWRL抑制黑色素生成的可能机制，我们体外培养小鼠B16细胞，采用MTT法测定细胞增殖情况、L-多巴氧化法测定TYR活性、氢氧化钠裂解法测定细胞黑色素含量、qRT-PCR和Western Blot法分别检测药物作用后B16细胞中小眼畸形相关转录因子(MITF)、TYR的mRNA和蛋白表达水平。结果显示三肽dWRL在试验浓度范围内可明显抑制α-黑色素细胞刺激素(α-MSH)诱导的B16细胞内TYR活性、黑色素合成量及MITF、TYR基因及蛋白的表达量，且呈浓度依赖性。所以三肽dWRL在体外能抑制B16细胞黑色素的合成，上述变化可能是通过下调MITF和TYR的基因转录和蛋白表达作用来完成。     

重组耻垢分枝杆菌NY-ESO-1疫苗的制备及其免疫原性分析

目的制备重组耻垢分枝杆菌(recombinant Mycobacterium smegmatis,rM.smegmatis)NY-ESO-1疫苗,并分析其在小鼠体内的免疫原性。方法从人睾丸m RNA中扩增NY-ESO-1基因,克隆至携带β半乳糖苷酶信号肽的表达载体,转化M.smegmatis,构建r M.smegmatis。以rM.smegmatis经腹腔免疫小鼠,200μl/只,于第12周用NY-ESO-1加强免疫1次,第3、6、9、12、13周经尾静脉采血1次,分离血清,并于第13周取小鼠脾脏,制备脾淋巴细胞,检测小鼠血清中NY-ESO-1抗体及其亚型、CD4~+、CD8~+T细胞比例、脾细胞增殖能力、IFNγ及IL-2的分泌水平及体外CTL杀伤能力。结果加强免疫后,与NY-ESO-1组比较,rM.smegmatis-p LA71NY组小鼠血清抗体水平差异无统计学意义(P0.05),CD4~~+及CD8~+T细胞比例、IFNγ及IL-2的分泌水平及体外CTL杀伤能力均显著升高(P0.05),脾细胞的增殖能力显著下降(P0.05)。结论 rM.smegmatis NY-ESO-1疫苗在小鼠体内具有良好的免疫原性,为该疫苗用于肿瘤的免疫治疗奠定了基础。     

重组人睫状神经营养因子生物学活性检测方法的建立

目的建立重组人睫状神经营养因子(Recombinant human ciliary neurotrophic factor,rhCNTF)的生物学活性检测方法 ,在其研制和生产中进行有效的质量控制。方法应用鸡胚睫状神经节细胞培养法和鸡胚背根神经节法,对rhCNTF进行定性和半定量检测;应用TF-1.CN5a.1细胞增殖法检测rhCNTF的活性;应用正常小鼠减重法,对rhCNTF的减肥生物学活性进行检测。并探索4种方法的实验条件及优缺点。结果上述4种方法均能用于rhCNTF的生物学活性测定,以TF-1.CN5a.1细胞增殖法及正常小鼠减重法结合使用最为有效。结论可联合使用TF-1.CN5a.1细胞增殖法和正常小鼠减重法,对重组rhCNTF进行质量控制。     

乙酰胺基丙酰胺衍生物的合成及抗癌活性研究

以L-苯丙氨酸或L-色氨酸为基本骨架,甲酯化后与4-取代苯乙酸酰胺化,经水解与2-(1H-咪唑-1-基)乙胺反应得到六个新型2-(4-取代苯乙酰胺基)丙酰胺衍生物5a～5f。化合物结构通过IR、1H NMR和元素分析进行确证。通过MTT法测试了目标化合物对人非小细胞肺癌细胞A-549的抑制活性。初步抗癌活性测试表明,化合物5e具有明显的抑制肿瘤细胞增殖活性。     

纳米肿瘤疫苗抗小鼠黑色素瘤的免疫效果

目的 研究基于纳米复合佐剂[包载CpG的纳米颗粒(CpG-coated nanoparticles,CNP)]及黑色素瘤细胞裂解物抗原的纳米肿瘤疫苗的抗黑色素瘤免疫效果。方法 检测CNP及黑色素瘤细胞裂解物抗原对小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs)的免疫调控作用及其对细胞因子IL-6和IL-12表达分泌的调控作用。接种黑色素瘤细胞的小鼠成瘤后,选择肿瘤体积相近的40只雌性C57BL/6N小鼠随机分为4组:对照(PBS)、佐剂(CNP)、裂解液(Lysate)和疫苗(CNP+Lysate)组,按皮下接种方式给药,1周1次,给药3周;每3 d记录小鼠肿瘤大小并绘制肿瘤生长曲线;收集小鼠外周血检测IFN-γ和TNF-α含量;免疫组化法检测CD8⁺T淋巴细胞在肿瘤组织中的浸润情况。结果 与PBS、CpG和肿瘤裂解物抗原组相比,纳米疫苗佐剂CNP能有效刺激BMDCs成熟,促进IL-6和IL-12分泌;接种纳米肿瘤疫苗显示出较好的体内抗肿瘤活性,疫苗组小鼠肿瘤体积明显减小,其血清中IFNγ和TNF-α分泌...     

融合蛋白IFNα2a-α-MSH对小鼠黑色素瘤生长的抑制作用

目的观察融合蛋白IFNα2a-α-MSH对小鼠移植黑色素瘤生长的抑制作用。方法将小鼠黑色素瘤细胞株B16接种于C57BL/6小鼠背部皮下,待肿瘤直径长至4mm以上时,将小鼠分为4组,分别经肌肉注射生理盐水(阴性对照)、IFNα2a(9×106U/kg鼠重)、IFNα2a-α-MSH(9×106U/kg鼠重)及腹腔注射环磷酰胺(20mg/kg鼠重,阳性对照),前3组1次/d,阳性对照组隔日1次,共11d。隔日测量肿瘤大小;末次给药后24h,处死小鼠,称瘤重,并计算肿瘤抑制率。结果 IFNα2a-α-MSH可明显抑制小鼠黑色素瘤的生长,且其抑瘤作用明显强于IFNα2a。结论 IFNα2a-α-MSH对小鼠黑色素瘤生长有较强的抑制作用,为IFNα2a-α-MSH临床治疗黑色素瘤提供了实验依据。