叶底珠抑菌活性内生真菌的筛选及鉴定

内生真菌存在于植物中,代谢产物十分丰富,具有多种生物活性,是新化合物、新药源的潜在资源。叶底珠通常根部入药,用于治疗风湿腰痛、四肢麻木和小儿疳积等疾病,对神经衰弱、急性肝损伤等也有一定的疗效。本文主要从叶底珠中分离筛选具有抑菌活性的内生真菌,并对其进行鉴定。采用平板培养法从叶底珠中分离内生真菌,通过滤纸片扩散法考察这些内生真菌的抑菌活性。对具有良好抑菌效果的内生真菌进行培养观察和ITS序列测定,鉴定其归属。从健康植株中分离到41株内生真菌,其中2个菌株的提取液对白色念珠菌的抑制效果最好,并发现其对另外7种病原菌具有不同程度的抑制作用。通过鉴定,确定菌株G11为球毛壳菌(Chaetomium globosum),菌株D11为枝细枝孢菌(Cladosporium ramotenellum)。从叶底珠中分离到2株具有较好抑菌作用的内生真菌,这些具有抑菌作用的内生真菌可用于生物制药和农业产业,值得进一步研究。     

生防芽孢杆菌的分离筛选与初步鉴定

从不同环境中采集7份土壤样品用于芽孢杆菌的分离纯化,通过多次平板划线分离纯化得到30个菌落形态不同的菌株。以黄瓜枯萎病菌为指示菌对得到的菌株进行抑菌活性筛选,其中的4个菌株具有明显的抑菌作用。采用对峙生长法,测定4株芽孢杆菌对其它植物病原真菌的活性,结果显示4个芽孢杆菌均具有广谱抑菌性。进一步试验表明,4株芽孢杆菌的发酵液也具有明显的抑菌作用,说明对病原真菌有抑制作用的物质水溶性较大,大部分释放到发酵液中,并且发酵液可使黄瓜枯萎等植物病原真菌菌丝膨大、褐变、末端钝圆,促进镰刀菌产生小孢子。通过菌落形态特征、系列生化测定对其进行初步鉴定,结果表明其中一株为枯草芽孢杆菌。     

侧柏内生真菌的分离鉴定及抗菌活性筛选

采用组织分离法从侧柏的根、茎、叶中分离获得内生真菌110株,经形态观察将其中103株鉴定分类为4个目、6个科、15个属,未产孢7株;内生真菌以链格孢属为优势属,茎叶中内生真菌的株数、种类多于根中.通过与苹果腐烂病菌、葡萄黑痘病菌等4种植物病原真菌平板对峙培养,从分离的内生真菌中筛选出21株(占总分离株数的19.1%)有拮抗活性的菌株,其至少对1种植物病原真菌有生长抑制作用,活性菌株主要分布在链格孢属,其抗菌活性成分值得进一步研究.     

植物内生真菌抑制细菌活性菌株的筛选

室内以离体方法测试了供试植物内生真菌样品的丙酮提取物对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌3种病原细菌抑菌活性，筛选出了对供试细菌有很好离体抑菌效果的植物内生真菌样品，2种是从银杏上分离的内生真菌，1种为扶芳藤上分离的内生真菌。     

一株红树林内生真菌次级代谢产物中活性组分的活性跟踪法分离研究

对从广西山口红树林保护区采集的21株植物内生真菌进行了抗菌、抗肿瘤筛选,得到4株活性菌株,其中SK11菌株活性最强。采取活性跟踪方法,从SK11菌株次级代谢产物中分离到了活性成分Lichexanthone和Bikaverin,并用分子生物学方法鉴定该菌株为链格孢霉菌（Alternaria sp.）。这是首次从该属中分离得到这两种化合物。     

苦参杀虫活性菌株的筛选

为筛选苦参内生菌中对水稻害虫有毒杀作用的菌株,本研究采用研磨法从健康苦参植物的根、茎、叶和种子中进行菌株分离。用玻片浸渍法和喷雾法筛选产杀虫活性物质菌株,获得细菌93株、放线菌15株、真菌5株。经初筛及复筛,发现RoF2和LeB8两株菌株的发酵液粗提物分别对稻飞虱Rice planthopper、稻纵卷叶螟Cnaphalocrocis medinalis Guenee致死率达85%以上。苦参内生菌株LeB8和RoF2的粗提代谢物对稻纵卷叶螟和稻飞虱有明显的毒杀作用,为开发新的生物源农药提供了可能的生物质。     

云南红豆杉内生真菌次生代谢产物抗菌活性的研究

从红豆杉树皮中分离得到一株产紫杉醇或紫杉烷类化合物的内生真菌,分别用三氯甲烷、乙酸乙酯对其次生代谢产物进行提取,以白色念珠菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌作为指示菌株,对提取液的抑菌活性进行了检测。结果显示:目标菌株次生代谢产物的两种提取物对五种致病菌都有一定的抑制效果,且胞外提取物的抑菌活力均比胞内提取物的抑菌活力大;三氯甲烷提取物的抑菌活性强于乙酸乙酯提取物的抑菌活性;其中三氯甲烷胞外提取物对金黄色葡萄球和白色念珠菌菌表现出非常强烈的抑菌效果。     

9种药用植物内生或附生真菌的分离及其杀虫、抑菌活性

从9种药用植物的根、茎、叶、花中分离得到358株内生或附生真菌,其中9株真菌的发酵液对白纹伊蚊3龄幼虫的毒杀活性较强,24 h死亡率均达到80%以上;15株真菌的发酵液对至少1种供试病原真菌的菌丝生长抑制率超过50%;4株真菌的发酵液对5种供试细菌均有明显的抑菌活性.     

红豆杉内生真菌产油脂的初步研究

利用苏丹Ⅳ染色法对42株红豆杉内生真菌进行产油脂的研究,用光学显微镜观察发现18株内生真菌中含有油脂粒,占总数的42.9%;对含有油脂粒的内生真菌,进一步采用Folch法提取并测定菌株油脂产率,发现有6株内生真菌的油脂产率达到15.0%以上,其中最高的油脂产率为25.2%。该研究为红豆杉内生真菌产油脂的进一步研究筛选出了目标菌株,并为红豆杉内生真菌油脂的提纯分离奠定了基础。     

蓝莓溃疡病生防链霉菌CX3的抑菌效果及其鉴定

[目的]为了明确从吉林省长白山保护区池西保护站马鞍山云杉人工林林下土壤分离,所获得1株拮抗菌株(编号记为CX3)的生防效果及分类地位。[方法]分别采用平板对峙法和杯碟法测定该菌株活菌及其发酵液的抑菌活性和抑菌谱;并通过形态学、生理生化特征、16S rRNA序列分析等方法研究了其分类地位。[结果]该菌株对13种供试植物病原菌均有抑制作用,抑菌谱广,其中对蓝莓溃疡病菌有极强的抑制作用,抑菌带达25.91 mm,发酵液的抑菌圈直径达31.73 mm;根据其菌株形态、生理生化特性、16S rRNA序列比对,最终鉴定菌株为链霉菌属Streptomyces sp.。[结论]该菌株对蓝莓溃疡病菌有显著的抑制效果,应用开发前景良好,此次是国内首次报道该菌株杀真菌活性。     

青岛海域鲍鱼内生真菌代谢产物活性筛选探究

以开放实验的形式探究海洋内生真菌的分离纯化实验操作,锻炼学生微生物实验技术中的无菌操作、菌种的分离纯化过程,进而通过发酵条件的优化培养对海洋真菌的次级代谢产物进行初步的研究,使学生进一步了解环境微生物中真菌发酵条件的调控和次级代谢产物的应用。通过微生物开放实验分离纯化出4株来源于鲍鱼的海洋内生真菌A1、A2、A3和A4,选择菌株A1通过优化培养发现其RICE培养基的次级代谢产物量较大,且有较好的抑菌活性。开放实验既提高了学生科技创新意识,又使学生接受了初步的科研训练。     

一株链霉菌发酵液的抗菌谱及稳定性

从土壤中分离得到一株放线菌菌株，杯碟法测定该菌株发酵液对14种植物病原真菌和两种植物病原细菌均有不同程度的抑菌活性，其中对烟草黑胫病菌和黄瓜菌核病菌的抑菌效果最好，抑菌圈直径达56．36mm和56．26mm。枯斑抑制法测定发酵液对TMV的抑制作用表明，发酵液对TMV有很好的钝化作用，发酵液与病毒汁液混合10min后接种，枯斑抑制率为93．88％，接种前24h处理和接种后24h处理的枯斑抑制率分别为87．93％和42．21％。通过对发酵液稳定性的初步研究，表明发酵液中的抗菌物质对温度、光照以及pH值变化都比较稳定。     

一株白骨壤内生真菌亮白曲霉CW5-7代谢产物主成分其抗氧化活性研究

利用涂布法从厦门红树林植物白骨壤根部分离得到1株内生真菌,编号为CW5-7,通过测定ITS序列鉴定该菌株为亮白曲霉(Aspergillus candidus),对亮白曲霉CW5-7在大米培养基中的代谢产物进行分离纯化,通过波谱学数据分析对主成分结构进行鉴定,并对其抗氧化活性进行评价.结果 表明,从亮白曲霉CW5-7的代...     

雪白弯颈霉C41发酵液稳定性及粗提物的抑菌活性

[目的]研究雪白弯颈霉C41菌株固体发酵粗提物的抑菌活性及其发酵液在不同条件下的稳定性。[方法]采用菌丝生长速率法,以7种植物病原真菌为供试菌,测定雪白弯颈霉C41固体发酵粗提物的抑菌活性;以玉米弯孢菌叶病菌为指示菌,测定发酵液在不同条件下的稳定性。[结果]固体发酵粗提物对玉米灰斑病、玉米弯孢菌叶斑病和玉米大斑病病菌菌丝生长均具有较强的抑制作用,抑制率分别为90%、84.38%和80%。发酵液在25~60℃范围内有较好的热稳定性,温度高于60℃则稳定性降低;有较广泛的酸碱稳定性,在pH值为6时抑菌活性最好;发酵液对日光和紫外线的稳定性较强。[结论]雪白弯颈霉C41菌株的代谢产物具有广谱的抑菌活性和较好的稳定性。     

药用植物内生真菌多糖研究进展

真菌多糖具有多种生理活性,广泛应用于医药、农业、食品等行业。基于植物内生真菌生长过程中会产生与宿主相同或相似的生理活性成分,药用植物生理活性的多样性赋予了其内生真菌活性的多样性,药用植物内生真菌是开发新型天然活性多糖的资源宝库。综述了近些年来关于药用植物内生真菌作为诱导子调节植物生长、代谢及其体外抗氧化、抗肿瘤、抑菌、降血糖等多种生理作用的研究进展。并对今后的研究方向进行展望,以期为药用植物内生真菌多糖的开发利用提供参考。     

放线菌TL05-22菌株发酵液的抑菌谱及稳定性

[目的]研究放线菌TL05-22发酵液的抑菌谱及稳定性。以16种植物病原真菌和6种细菌为供试菌,采用菌丝生长速率法、杯碟法测定拮抗放线菌TL05-22发酵液的抑菌谱;以苜蓿尖镰孢根腐病菌为指示菌,杯碟法测定发酵液的传代稳定性、热稳定性、酸碱稳定性及紫外线稳定性。[结果]放线菌TL05-22发酵液对16种植物病原真菌和6种细菌均具有不同程度的抑菌活性,其中供试真菌以对苜蓿尖镰孢根腐病菌的抑菌效果最好,抑菌圈直径达33.68 mm;供试细菌中以对大白菜软腐病菌的抑菌效果最强,抑菌圈直径达29.12 mm。将发酵液于60~100℃处理30、60 min,抑菌活性没有明显变化;发酵液在pH值6~14时抑菌活性未发生明显变化,但在pH<6条件下抑菌活性明显下降;连续培养10代,发酵液抑菌活性无明显变化。[结论]放线菌TL05-22的代谢产物具有广谱抑菌活性和较强的稳定性,具有一定开发价值。     

大蓟提取物对植物病原真菌的抑菌活性成分研究

[目的]大蓟有广泛的生物活性,具有生物农药的开发潜力。确定其中抗植物病原菌的主要活性成分,以期为其在农药领域的开发利用提供依据。[方法]通过溶剂提取法提取,用生长速率法测定提取物对5种植物病原真菌的抑菌活性,并用柱层析法分离活性物质。[结果]在质量浓度50 g/L时石油醚提取物对石榴枯萎病菌的抑菌活性最高,抑制率达100%,EC50值为5.1 g/L;从中分离出一个三萜类单体化合物,经鉴定为3β,21β-dihydroxyl-20(30)-en-taraxastane。[结论]大蓟对植物病原真菌有良好的抑菌活性,所分离到的单体化合物为大蓟中的主要抑菌活性成分。     

根围细菌次生代谢物的生物活性筛选

从全国7个地区采集的植物根围土壤样品中分离得到1700余株植物根嗣细菌.采用室内离体筛选的试验方法,以5种植物病原细菌作为靶标,筛选研究得到有生物活性的菌株840株.其中10%的菌株对5种植物病原细菌都具有拮抗活性,其余菌株则仅对1种或几种病原细菌具有拈抗活性.从中进一步筛选得到对小麦白粉病也具有防治效果的菌株,其防治效果最高可达60%.将最终获得的同时对病原细菌有拮抗效果和真菌病害有防治效果的根围细菌作为以后深入研究的对象.     

56种植物对植物病原菌的生物活性

以小麦赤霉菌等6种常见植物病原真菌为对象,采用生长速率法对56种植物的甲醇提取物进行了室内抑菌活性测定.结果表明:多数供试中草药植物提取物对植物病原真菌都表现出了不同程度的抑菌活性,其中黄连、藁本、臭椿3种植物的甲醇提取物表现出强烈的抑菌活性,对供试的6种病原真菌中的5种生长抑制率都在80%以上,值得深入研究.     

海洋细菌B-9987的鉴定及其对植物病原菌的抑菌试验

对分离自渤海潮间带盐生植物的细菌B-9987菌株进行了分类鉴定和抑菌活性研究.经形态、生理生化特性和分子鉴定表明B-9987为海洋芽孢杆菌(Bacillus marinus).平皿测试结果表明:该菌株有较广的抑菌谱,且对多种植物病原真菌、细菌的抑菌效果明显优于微生物农药--0.1亿cfu/g多粘类芽胞杆菌细粒剂的生防菌HY96-2.