高效液相色谱法检测重组人干扰素α2b注射液中组氨酸含量

目的建立检测重组人干扰素α2b(recombinant human interferonα2b,rhIFNα2b)注射液中组氨酸含量的高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法,并对方法进行验证及初步应用。方法按设定的色谱条件对检测rhIFNα2b注射液中组氨酸含量的HPLC法进行专属性、系统适应性、试验内和日间精密性、准确性验证,确定方法的线性范围和最低检测限,并用建立的方法检测6批rhIFNα2b注射液中的组氨酸含量。结果该方法专属性、系统适应性、试验内精密性、日间精密性和准确性良好;线性范围为6.064 5~775μg/ml(R2=0.999 8);最低检测限为50 ng/ml;用建立的方法检测6批rhIFNα2b注射液中组氨酸含量与标示浓度接近。结论建立的HPLC法准确可靠,可用于rhIFNα2b注射液中组氨酸含量的测定。     

高效液相色谱法测定重组人干扰素α1b滴眼液中苯扎氯铵的含量

目的采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定重组人干扰素α1b(recombi-nant human interferonα1b,rhIFNα1b)滴眼液中苯扎氯铵(benzalkonium chloride)的含量。方法采用HPLC法测定rhIFNα1b滴眼液中苯扎氯铵含量,色谱条件:流动相:乙腈:5 mmol/L醋酸铵[含1%三乙胺,用冰醋酸调节pH值至(5.0±0.2)]体积比为65∶35;流速:1.0 ml/min;检测波长:262 nm;进样量20μl;柱温:室温。对该方法进行验证,并应用该方法检测3批rhIFNα1b滴眼液中苯扎氯铵的含量。结果该方法检测苯扎氯铵专属性和系统适应性良好;最低检测限和定量限分别为0.53μg/ml和1.48μg/ml;苯扎氯铵在10～50μg/ml浓度范围内,标准曲线的线性关系良好,R2=0.999 1;连续6次进样,峰面积的RSD=1.78%;苯扎氯铵理论浓度为22、24、26μg/ml的加样回收率平均为97.90%,RSD=0.96%。3批rhIFNα1b滴眼液中苯扎氯铵的相对含量分别为19.27、19.89和19.76μg/ml,分别为标示量的96.34%、94.46%和98.80%。结论 HPLC法简便、灵敏、准确,可用于测定rhIFNα1b滴眼液中苯扎氯铵的含量。     

高效液相色谱法检测聚乙二醇化重组人干扰素α2b注射液中N-羟基琥珀酰亚胺含量

目的建立检测聚乙二醇化重组人干扰素α2b(PEGylated recombinant human interferonα2b,PEG-IFNα2b)注射液中N-羟基琥珀酰亚胺(N-hydroxy succinimide,NHS)含量的高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法。方法以TSK G3000SW(7.8 mm×300 mm,10μm,TOSOH)为色谱柱,用20 mmol/L PB(p H 7.0)-145 mmol/L Na Cl-5%异丙醇为流动相,流速为0.6 ml/min,检测波长为260 nm,建立检测PEG-IFNα2b注射液中NHS含量的HPLC方法,进行专属性、系统适应性、准确性验证,并确定该方法的线性范围、定量限和最低检测限。用建立的方法检测3批PEG-IFNα2b注射液中NHS的含量。结果该方法专属性、系统适应性及准确性良好;线性范围为0.00 977~2.50μg/ml(R2=0.999 985);最低定量限为0.002 4μg/ml(0.002%),最低检测限为0.001 2μg/ml(0.001%)。3批PEG-IFNα2b注射液样品中均未检出NHS,表明样品中NHS小于0.001%。结论建立的HPLC法准确、可靠,可用于PEG-IFNα2b注射液中NHS含量的测定。     

重组人干扰素α1b蛋白质含量HPLC检测方法的建立

目的建立测定重组人干扰素α1b(Recombinant human interferonα1b,rhIFNα1b)蛋白质含量的HPLC检测方法,并进行验证。方法应用HPLC外标法测定IFNα1b对照品的蛋白质含量,并对方法的线性及精密度进行验证。采用建立的HPLC外标法测定3批rhIFNα1b样品的蛋白质含量,并与Lowry法的检测结果进行比较。结果蛋白质在进样量5～50μg范围内,与峰面积呈良好的线性关系(r=0.998 1);用建立的方法重复进样6次,检测rhIFNα1b对照品溶液的蛋白质含量,相对标准偏差(RSD)为0.92%,<2%;用建立的方法检测0812001、0812003、0812006批rhIFNα1b样品溶液的蛋白质含量分别为0.465、0.503和0.496 mg/ml;HPLC外标法与Lowry法测定的蛋白质浓度有一定的差异,HPLC法的RSD<2%,Lowry法的RSD>4%,HPLC法的精密度较Lowry法好。结论建立了测定rhIFNα1b蛋白质含量的HPLC外标法,该方法操作简便,精密度较好,可用于IFNα1b原液蛋白质含量的检测。     

聚乙二醇化重组人干扰素α2b注射液中游离聚乙二醇含量的测定

目的建立测定聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)化重组人干扰素α2b(Peg-IFNα2b)注射液中游离PEG含量的高效液相色谱-蒸发光散射检测方法,并进行方法的验证。方法以Sepax Bio-C18为固定相,流动相A为0. 1%三氟乙酸-水溶液,流动相B为0. 1%三氟乙酸-90%乙腈-10%水溶液,梯度洗脱,蒸发光散射检测器检测不同浓度PEG对照品及Peg-IFNα2b注射液样品,建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法,并对方法进行专属性、线性范围、检测限及加样回收率验证。结果高效液相色谱显示,PEG对照品与混有PEG对照品的Peg-IFNα2b注射液色谱峰分离度良好,且无其他色谱峰干扰;PEG对照品在6. 25～100. 00μg/mL范围内线性良好,R2=0. 990 3;最低检测限约为1. 56μg/mL;低、中、高3个浓度的PEG对照品加样回收率分别为107. 51%、103. 52%和95. 99%。结论建立的方法简单、准确、快速,可用于测定Peg-IFNα2b注射液中游离PEG含量。     

聚乙二醇化人睫状神经营养因子蛋白含量反相高效液相色谱检测方法的建立及验证

目的建立聚乙二醇化重组人睫状神经营养因子(PEGylated ciliary neurotrophic factor,PEG-CNTF)蛋白含量反相高效液相色谱(reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)检测方法,并进行验证。方法以未修饰的人CNTF原型蛋白为对照品,采用反相高效液相色谱法(reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)测定PEG-CNTF的蛋白含量。色谱柱:Jupiter 5u C4 300A(150 mm×4.6 mm);流动相:0.1%三氟乙酸的水溶液、0.1%三氟乙酸的乙腈;检测波长:280 nm;流速:1 mL/min;柱温:室温;进样体积:20μL。对该方法进行专属性、线性、精密性、准确性、耐用性验证。结果空白溶剂在CNTF、PEG-CNTF样品设定积分范围内无特异峰出现;建立的方法在PEG-CNTF含量为0.125～4 mg/mL浓度范围内线性关系良好(R2 0.99);供试品重复性检测的相对标准偏差(RSD)分别为0.21%、0.19%、0.45%,中间精密性检测的RSD分别为0.42%、0.59%、0.83%;制备的高、中、低3个浓度供试品检测结果的回收率均在95%～101%之间;该方法的定量限为50μg/mL,检测限为15.625μg/mL;耐用性验证中连续5次进样CNTF、PEG-CNTF峰面积及保留时间的RSD均小于2%。结论建立的方法具有良好的专属性、线性、精密性、准确性、耐用性,可用于PEG-CNTF中蛋白含量的检测。     

23F型肺炎链球菌多糖蛋白结合物游离蛋白含量检测方法的建立及验证

目的建立一种检测23F型肺炎链球菌多糖结合物游离蛋白含量的方法,并进行方法学验证。方法采用体积排阻高效液相色谱(size exclusion chromatography and high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)法检测23F型肺炎链球菌多糖结合物游离蛋白含量。色谱柱:TSKgel G3000(300 mm×78 mm,5μm);流动相:10 mmol/L PBS(150 mmol/L NaCl,pH 6. 8);检测波长:214 nm;流速:0. 5 m L/min;柱温:25℃;自动进样:100μL。同时对该方法进行线性、精密度、准确度、耐用性及专属性验证。结果建立的方法在纯化载体蛋白破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)含量为3～18μg/mL时,与峰面积呈良好的线性关系,线性相关系数(R2) 0. 99;23F-2017001、23F-2017002、23F-2017003批供试品重复性相对标准偏差(RSD)分别为0. 1%、0. 3%、1. 0%,中间精密性RSD分别为3. 7%、8. 5%、4. 8%;加入6、8、10μg/mL纯化载体蛋白TT样品的3次检测结果回收率在93. 2%～102. 6%之间,回收率的RSD均为0. 6%;进样温度为20～30℃条件下的保留时间和峰面积相对偏倚在-0. 1%～0. 5%之间;流动相溶液中含甘氨酸及低浓度硼酸时对检测结果无干扰,硼酸浓度为20 mmol/L以上时对游离蛋白峰检测有一定干扰。结论本实验建立的方法具有良好的线性、精密性、准确性、耐用性及专属性,可用于23F型肺炎链球菌多糖结合物游离蛋白含量检测。     

高效液相色谱法检测破伤风抗毒素注射液中苯酚残留量

目的采用高效液相色谱法检测破伤风抗毒素注射液中苯酚残留量,并对方法进行验证及初步应用。方法色谱柱:C18色谱柱;流动相:甲醇-超纯水(体积比1∶1);流速:0.5 ml/min;检测波长:270 nm;柱温:35℃;进样量:5μl。对方法进行专属性、线性、检测限、准确性、精密性验证。用验证后的方法检测4批破伤风抗毒素注射液的苯酚残留量。结果供试品溶液中加入60μg/ml的苯酚对照品溶液和间甲酚对照品溶液的平均回收率为99.92%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为0.139 3%;在1~60μg/ml范围内,苯酚对照品色谱峰面积与浓度呈良好的线性关系,回归方程:Y=9.869 19 X+1.082 34 e-1,r=0.999 96;按照信噪比(S/N)≥3确定最低检测限为0.05μg/ml;供试品溶液中加入不同浓度苯酚对照品溶液的平均回收率分别为101.75%和97.03%,RSD分别为0.025%和0.796%;供试品溶液5次检测结果的RSD为1.485 9%。4批破伤风抗毒素注射液中的苯酚残留量均符合《中国药典》三部(2010版)≤890μg/ml的要求。结论高效液相色谱法检测破伤风抗毒素注射液中苯酚残留量快速、简便,且专属性、线性、准确性、精密性良好。     

HPLC-荧光法测定贝伐珠单抗注射液中聚山梨醇酯20的含量

目的采用HPLC-荧光法测定贝伐珠单抗注射液中聚山梨醇酯20的含量。方法对HPLC色谱条件进行优化后,检测贝伐珠单抗注射液中聚山梨醇酯20含量,并进行方法的专属性、线性、准确度、精密度、检测限、耐用性验证。用建立的方法检测3批贝伐珠单抗注射液中聚山梨醇酯20的含量。结果该方法专属性良好;聚山梨醇酯20浓度在0.20~0.60 mg/mL范围内,线性关系良好,R~2=0.999 9;不同浓度的聚山梨醇酯20溶液检测结果的准确度在98%~100%范围内,RSD为0.8%;精密度各考察项RSD均不高于2%;检测限为0.002 0 mg/mL;耐用性各考察项与原始条件的相对百分比均在100%~102%范围内。3批贝伐珠单抗注射液中聚山梨醇酯20的含量分别为0.40、0.39和0.39 mg/mL,分别为标示量(0.40 mg/mL)的100%、98%和98%。结论建立的HPLC-荧光法快速、准确、可靠,可用于测定贝伐珠单抗注射液中聚山梨醇酯20的含量。     

无细胞百日咳纯化抗原中Triton X-100残留量检测方法的建立及验证

目的建立高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测无细胞百日咳纯化抗原中Triton X-100残留量,并对该方法进行验证及初步应用。方法 HPLC条件:Agilent SB 300 C18色谱柱(规格:4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:纯化水与甲醇的体积比为20﹕80;检测波长:225 nm;色谱柱温:30℃;流速:0.8 ml/min;进样量:10μl。对方法的系统适应性、专属性、线性、准确性、精密性、耐用性及定量限进行验证,并用建立的方法检测6批无细胞百日咳纯化抗原中的Triton X-100残留量。结果该方法检测6份10μg/ml Triton X-100的理论塔板数在1 550~1 580之间,Triton X-100峰面积和保留时间的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)分别为2.59%和0.04%;12μg/ml的Triton X-100溶液和无细胞百日咳纯化抗原样品中,Triton X-100能与其他物质完全分离;在2~30μg/ml范围内,Triton X-100浓度与峰面积呈良好的线性关系(r2=0.999 01);该方法检测不同浓度Triton X-100样品的加标回收率均在98%~102%之间,RSD均不超过2%;同一实验人员在不同工作日和不同检测人员在同一工作日用该方法检测供试品中Triton X-100含量的RSD均小于4%;改变流动相的甲醇比例和柱温后,6次检测值的RSD分别为0.95%和0.51%;定量限可达0.5μg/ml。该方法检测6批无细胞百日咳纯化抗原中的Triton X-100残留量均较低。结论建立的HPLC法系统适应性、专属性、线性、准确性、精密性、耐用性良好,可用于无细胞百日咳纯化抗原中Triton X-100残留量的定量检测。     

分子排阻色谱双检测器串联法测定聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的聚乙二醇修饰度

目的建立分子排阻色谱紫外与示差折光检测器串联(molecular exclusion chromatography with ultraviolet and refractive index detectors in series,SEC-UV-RI-HPLC)法测定聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)化重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF)的修饰度,并对方法进行验证。方法采用TSKgel G3000SWXL(300 mm×7.8 mm)凝胶色谱柱,以0.01 mol/L磷酸氢二钠-磷酸二氢钠-0.1 mol/L氯化钠(pH 7.0)为流动相,流速:0.5 mL/min,柱温:25℃,示差折光检测器温度:35℃,波长:280 nm,进样量:20μL。通过测定rhG-CSF中间体的UV、RI峰面积,PEG的RI峰面积,PEG-rhG-CSF原液的UV、RI峰面积等,计算出PEG修饰度。对建立的方法进行专属性、线性、精密性、耐用性验证。结果样品在0.2～1.0 mg/mL范围内线性关系良好(R2=0.999);精密性和耐用性试验相对标准偏差分别为1.54%和1.77%;专属性良好。结论建立的方法具有良好的专属性、线性、精密性及耐用性,操作简单,可用于测定PEG-rhG-CSF的修饰度。     

柱前衍生HPLC法测定人凝血因子Ⅷ中氨基酸的含量

目的建立人凝血因子Ⅷ中氨基酸含量的柱前衍生HPLC检测方法。方法采用6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯(6-aminoquinoline-N-hydroxysuccinimide carbamate,AQC)在一定条件下与氨基酸形成稳定的衍生产物(柱前衍生),再通过高效液相色谱仪,采用氨基酸分析柱(150 mm×3. 9 mm,4μm)检测,以不同流动相进行梯度洗脱[在《中国药典》三部(2015版)的基础上进行调整],柱温为37℃,流速为1. 0 mL/min,检测波长为248 nm。同时验证方法的系统适应性、专属性、线性范围、精密性及准确度。结果甘氨酸及盐酸赖氨酸均可在25 min内获得较好分离,与相应相邻色谱峰之间的分离度均 1. 5,拖尾因子在0. 95～1. 40之间;各样品的氨基酸种类均能正确检出,混合样品与单纯样品出峰时间保持一致,且供试品溶液与对照品溶液主峰保留时间相对偏差均2%;当甘氨酸浓度在12. 5～62. 5μg/mL,盐酸赖氨酸浓度在4. 0～20. 0μg/mL时,与相应氨基酸与内标峰面积比呈良好的线性关系,相关系数(r)分别为0. 999 9和0. 999 8;甘氨酸及盐酸赖氨酸重复性的相对标准偏差(RSD)分别为0. 4%和0. 5%,中间精密度RSD分别为1. 3%和1. 0%;两种氨基酸的回收率均在95%～105%范围内,RSD均≤2%。结论建立的方法具有良好的专属性、精密性及准确度,可用于测定人凝血因子Ⅷ中的氨基酸含量。     

HPLC法测定丙氨酰谷氨酰胺注射液含量分析方法的验证

目的:利用HPLC法测定丙氨酰谷氨酰胺注射液的含量,并验证该方法的适用性.方法:采用高效液相色谱法测定丙氨酰谷氨酰胺注射液的含量,色谱柱:用氨基键合硅胶为填充剂,以0.05 mol/L的磷酸二氢钾缓冲液(用磷酸调节pH值至4.0)-乙腈(35:65)为流动相,检测波长为215 nm,流速为0.7 mL/min,柱温为30℃,进样量为20μL.结果:本方法系统适用性良好,样品浓度在0.025～0.075 mg/mL范围内线性关系良好,准确度和精密度都符合要求,在改变不同品牌色谱柱、流速、柱温和检测波长时,含量数据相对标准偏差均小于2.0％,耐用性良好.结论:本分析方法符合方法学验证的要求,可以满足含量的检测.     

甲型肝炎灭活疫苗(MRC-5细胞)中乙二胺四乙酸二钠残留量HPLC检测方法的建立及验证

目的建立检测甲型肝炎(hepatitis A,HA)灭活疫苗(MRC-5细胞)中乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)残留量的HPLC法,并进行验证。方法色谱条件:选用反相色谱柱;流动相为水相-有机相,水相为四丁基氢氧化铵的磷酸盐溶液,有机相为乙腈;流速为1.0 mL/min;检测波长为257 nm;进样量为20μL;柱温为30℃;保留时间为10 min。筛选色谱柱并优化流动相条件(水相与有机相的比例、pH及磷酸盐)。验证方法的适用性、专属性、线性范围、准确度、精密度、耐用性、定量限和检测限。采用该方法检测3批HA灭活疫苗原液供试品中EDTA-2Na残留量。结果最适色谱条件:采用美国Thermo公司的C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),水相与有机相比例为9∶1,pH为2.4,磷酸盐为0.01 mol/L磷酸二氢铵。EDTA-2Na对照品色谱峰的理论塔板数大于10 000,分离度大于1.5;仅对照品有色谱峰,且无其他色谱峰干扰;对照品在0.2~20μg/mL范围内线性关系良好,回归方程为Y=20 482.18 X+0.512 6,R²=0.999 9;准确性验证中,浓度为2、5、10μg/mL的加标样品平均回收率分别为97.44%、100.6%及100.4%,RSD为1.6%;5μg/mL的加标样品重复性及中间精密度的RSD分别为1.4%和1.6%;定量限及检测限分别为0.2和0.05μg/mL;不同pH(2.0、2.4、3.0)流动相的色谱峰面积的RSD分别为0.24%、0.31%及0.18%,相对误差(RE)分别为99.25%、99.12%及99.33%。3批供试品均未检出EDTA-2Na。结论成功建立了检测HA灭活疫苗中EDTA-2Na残留量的HPLC法,该方法具有良好的专属性、线性范围、准确度、精密度及耐用性,为HA灭活疫苗的质量控制研究奠定了基础。     

冻干人用狂犬病疫苗原液纯度体积分子排阻高效液相色谱检测方法的建立及验证

目的 建立冻干人用狂犬病疫苗原液纯度的体积分子排阻高效液相色谱(size exclusion column-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)检测方法，并进行验证。方法 采用TSK-gel G6000PWXL色谱柱(7.8 mm×30 cm,13μm)进行测定，流动相为：0.1 mol/L PB缓冲液(pH 7.8)；流速为：0.5 mL/min；检测波长为：280 nm；进样量为：20μL；柱温为：30℃。验证方法的系统适用性、专属性、精密性、耐用性，并确定检测限和定量限。采用建立的方法检测3批冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液及1批冻干人用狂犬病疫苗(人二倍体细胞)原液的纯度。结果 参比品与两种基质制备的冻干人用狂犬病疫苗原液目的蛋白色谱峰的分离度均> 1.5，峰拖尾因子均<1.5；空白溶剂在目的蛋白出峰位置无吸收峰，不干扰测定；精密性验证中的保留时间和峰面积RSD均<2.0%；定量限为10μg/mL，检测限为4μg/mL；参比品在278、280、282 nm 3种不同检测波长下连续进样3次，保留时...     

检测重组人源抗人肿瘤坏死因子单克隆抗体甲氨蝶呤残留量的反相高效液相色谱法的建立及验证

目的建立重组人源抗人肿瘤坏死因子单克隆抗体中甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)残留量检测甲反相高效液相色谱(reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)法,并进行验证。方法样品经饱和硫酸铵法沉淀蛋白,取上清液进样检测。色谱柱为Waters/ACQUITY UPLC BEH C18(1. 7μm,2. 1 mm×100 mm),流动相为乙腈-甲醇-0. 054 mol/L磷酸二氢钾缓冲液(体积比6∶2∶92),pH 6. 5,检测波长302 nm,柱温:30℃,流速:0. 25 mL/min,进样体积:10μL,洗脱时间:15 min。同时验证方法的线性、特异性、准确度、定量限、精密性及耐用性。结果该方法特异性良好;MTX浓度在4～200 ng/mL范围内线性良好,R2 0. 999;检测限为4 ng/mL;MTX浓度为20. 0、50. 0、100. 0 ng/mL 3个加标样品的回收率分别为102. 83%、100. 33%、99. 23%,3次重复检测结果RSD分别为1. 56%、1. 50%、0. 42%,两位实验员6次检测结果的RSD分别为2. 46%、1. 27%、1. 49%;MTX浓度为50. 0 ng/mL的加标样品在流动相p H 6. 3、6. 5、6. 7条件下测定结果的RSD为2. 02%。结论本实验建立的方法具有良好的特异性、精密性及准确度,且操作简便,可用于重组蛋白药物研发及生产过程中残留MTX的监测。     

A群C群脑膜炎球菌结合疫苗游离蛋白含量HPLC检测方法的建立

目的 建立A群C群脑膜炎球菌结合疫苗中游离蛋白含量的HPLC检测方法,并对其进行验证。方法 采用HPLC法,色谱条件:色谱柱:TSKgel G3000SW(300 mm×7.5 mm,10μm);流动相:0.01 mol/L磷酸盐缓冲液[pH(7.2±0.2)];流速:0.5 ml/min,自动进样100μl;检测波长:280 nm;柱温:室温。对该方法进行专属性、分离度、线性、精密性和准确性验证,确定该方法的定量限和检测限;应用建立的方法检测3批A、C群脑膜炎球菌结合疫苗原液及A群C群脑膜炎球菌结合疫苗成品中游离蛋白含量。结果 该方法检测游离蛋白的专属性、分离度良好;蛋白对照品在3~18μg/ml范围内,标准曲线的线性关系良好,R~2=0.998;3批A、C群脑膜炎球菌结合疫苗原液、A群C群脑膜炎球菌结合疫苗成品的加样回收率在82.9%~119.33%之间,RSD小于5%;确定方法检测限为1.0μg/ml,定量限为2.6μg/ml。3批A、C群脑膜炎球菌结合疫苗原液和A群C群脑膜炎球菌结合疫苗成品未检测出游离蛋白。结论 建立的HPLC法简便、灵敏、准确度高,可检测A群C群脑膜炎球菌结合疫苗中游离蛋白含量。     

多糖样品中微量蛋白含量检测方法的验证

目的验证多糖样品中微量蛋白的Micro-BCA检测方法。方法根据分析方法质量源于设计(the quality of analytical method is derived from design,AQb D)的开发流程,选择Micro-BCA法进行多糖微量蛋白含量的检测,并对方法的专属性、精密性及准确度进行验证,确定方法的检测限(detection limit,DL)及定量限(quantitative limit,QL)。结果多糖样品不影响该方法的检测,选择无机盐类纯化缓冲液,通过使标准品与样品的基质均一化,可消除基质效应,得到准确的检测效果。BSA浓度在10～40μg/mL范围内线性良好,线性相关系数(R~2) 0. 99;试验内及试验间检测结果的相对标准偏差(RSD)均3%;试验内及试验间回收率均在(100±5)%之间;重复3次检测DL均值为0. 4μg/mL,QL均值为1. 1μg/mL。结论多糖样品微量蛋白Micro-BCA检测方法的检测通量高,与工艺缓冲液兼容性好,且具有良好的精密性及准确度。     

HPLC法测定富马酸沃诺拉赞中富马酸含量方法研究

目的建立HPLC法测定富马酸沃诺拉赞中富马酸含量的方法。方法 HPLC法,采用Waters Symmetry C18 (4.6 mm×250 mm,5μm)的色谱柱,流动相:0.02 mol/L的磷酸钠(用磷酸调节pH值至7.0)-乙腈(80∶20);检测波长:230 nm,流速:1.0 mL/min,进样量:10μL。结果沃诺拉赞在浓度24.84～74.52μg/mL范围内,呈良好的线性关系,回归方程y=23371x+1286,相关系数r=0.9994;平均回收率(n=9)为100.33%。结论该方法专属性良好、准确、快捷,精密度及耐用性好;可用于富马酸沃诺拉赞含量测定,并对其药品质量控制提供了参考依据。     

苯磺酸氨氯地平片含量分析方法验证

本文建立了苯磺酸氨氯地平片的含量分析方法,对方法的系统适应性、专属性、线性与范围、准确度和方法耐用性等方面进行了验证。该方法用于苯磺酸氨氯地平片含量分析时,辅料对待测主成分无干扰;样品溶液在40.84μg/ml～61.26μg/ml浓度范围内,线性良好;回收率在98.0%～102.0%之间,准确度符合要求;样品溶液在8小时内稳定,当吸收波长、流动相pH、流速、柱温、色谱柱等条件适当改变,系统适用性均符合要求,含量检测结果亦无明显变化,方法耐用性好。结果表明该方法符合相关要求,满足成品含量质量控制需要。