精氨酸脱亚胺酶发酵条件研究

对一种新型肿瘤增殖抑制酶类一精氨酸脱亚胺酶的发酵生产工艺进行了研究。运用单因子扫描方法，考察了不同碳源、氮源等影响因子对粪肠球菌（Enterococcus faecalis）NJ402产精氨酸脱亚胺酶的影响。优选出其较佳培养基组分为（g／L）；蔗糖15，蛋白胨5，酵母膏5，牛肉膏2．5，NaCl3，KH2PO42，MgSO40．01，MnSO40．0025，L-精氨酸15；接种量以4％～5％为宜，最佳培养温度是37℃，最适起始pH为7．5。100L发酵罐实验表明，发酵到10h时，菌量与比酶活量均为最大，分别为40mg／mL和2．57U／mL。     

拟青霉E7蛋白酶发酵条件及酶性质研究

针对产蛋白酶的淡紫拟青霉E7菌株发酵条件进行优化,得到利于产酶发酵培养基配方:以2%大豆粉为碳源、2%麦麸及1%硝酸铵为氮源,pH值7.0,28℃,150 mL三角瓶装液量为30 mL,培养时间72h.对该酶性质研究结果表明:蛋白酶在40 ℃热稳定性较好,最适pH值为10.5,在pH值9～11范围内具有较高的酶活与耐碱性.     

毕赤酵母产重组木聚糖酶发酵条件的优化及其酶学性质

目的优化毕赤酵母工程菌GS115/xyn11A产重组木聚糖酶的发酵条件,并检测其酶学性质。方法采用单因素试验和L(934)正交试验考察摇瓶发酵条件下培养基起始pH值、诱导剂甲醇添加量、诱导温度及诱导时间对产酶活性的影响;并分析重组木聚糖酶的酶学性质。结果影响重组毕赤酵母产酶的因素重要性依次为:培养基起始pH值>诱导时间>诱导温度>甲醇添加量,重组酵母产酶最佳条件为:起始pH值7.5,甲醇添加量1.5%,32℃诱导96 h,在此条件下进行诱导表达重组木聚糖酶的酶活性可达228.35 IU/ml;酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH值为5.5,在低于40℃和pH 4.5～7.5的范围内较稳定。结论优化了毕赤酵母产重组木聚糖酶的发酵条件,为木聚糖酶的工业化生产及应用提供了依据。     

黑曲霉产β-葡萄糖苷酶发酵条件的研究

通过单因素及正交实验对现存黑曲霉菌株产酶发酵条件进行了研究,结果表明:当培养基为:玉米芯4.0%;酵母粉1.0%;KH2PO40.4%;MgSO40.08%;(NH4)2SO40.4%;培养温度30℃,摇床转速220r/min,接种量6.0%,装液量40mL/250mL,初始pH值5.0,发酵周期168h;此条件下β-葡萄糖苷酶酶活达56.96IU/mL。     

Rhodococcus rhodochrous tg1-A6腈水解酶的表达和催化研究

采用紫外线和氯化锂诱变得到一株名为Rhodococcus rhodochrous tg1-A6的菌种,该菌经过培养基和培养条件的优化能够产生高酶活的腈水解酶.优化培养条件为温度28℃、摇床转速200r/min、种子培养20h后以6%接种量接种于产酶培养基,初始pH 7.0,300mL摇瓶装液量为40mL.酶活达到21.96 U/mL.在含一定菌体的100 mL反应体系中,经过10 h连续43次补加底物丙烯腈,能使产物丙烯酸的质量浓度累积到414.5g/L.     

E.coli M15 (pQTPL)高效发酵生产酪氨酸酚裂解酶的控制策略

在摇瓶和4 L发酵罐上研究了营养和环境条件对重组菌E. coli M15 (pQTPL)分批发酵生产酪氨酸酚裂解酶(TPL)的影响. 在培养基中添加20 g/L葡萄糖和1.0 g/L玉米浆使TPL酶活提高到63.1 U/g(干重). 在此基础上,维持发酵液中溶氧水平为30%,可使菌体浓度在8 h达到4.78 g/L,酶活为54.6 U/g,比对照组(不控制溶氧)分别提高了21%和31.6%. 采用溶氧反馈调节-限制性补料策略,可使菌体浓度提高到31.5 g/L. 采用两阶段温度和pH控制策略,在发酵前8 h控制pH 7.0、温度37℃,8 h 至发酵结束之间控制pH为8.0、温度为30℃,可使重组菌的TPL酶活达到154.4 U/g,并使TPL在细胞中过量表达,实现了高菌体浓度和高TPL酶活的统一.     

蛋白酶产生菌的筛选及发酵条件的优化

筛选了植物蛋白加工用蛋白酶产生菌,为酶的分子改造和植物蛋白加工提供材料基础。通过不同菌株筛选,获得了一株蛋白酶的高产菌株枯草芽孢杆菌X12。经过单因子实验,确立了产酶的最适培养基配方:蔗糖7.5 g/L,黄豆粉6.0 g/L,MnSO40.04 g/L,初始pH=7.0,装液量75 mL/250 mL。结论:按照所优化的产酶条件于37℃,180 r/min,经60 h培养,发酵液最终酶活达1 868.4 u/mL。     

苯丙氨酸脱氨酶发酵工艺及其酶学性质研究

选育出一株具有较高苯丙氨酸脱氨酶活性的菌株巨大芽孢杆菌AS1.127-NJU10。考察了该菌的发酵产酶条件,结果表明:蔗糖为最佳碳源、酵母浸膏和NH4C l组成最佳氮源,其质量浓度分别为:ρ(蔗糖)=20 g/L,ρ(酵母浸膏)=2 g/L和ρ(NH4C l)=10 g/L;发酵培养基最适pH=6.5,培养温度为37℃;诱导物ρ(L-苯丙氨酸)=1 g/L时,酶活最高达1 070 U。同时对苯丙氨酸脱氨酶的性质进行了研究,结果表明:该酶最适pH=5.8,最适温度为40℃,反应液中添加φ(吐温-80)=0.2%和c(K+)=10-5mol/L能明显提高酶活。     

黑曲霉液体发酵产木聚糖酶的研究

通过单因素实验及响应面方法对黑曲霉菌株产木聚糖酶发酵条件进行了研究,结果表明:当培养基为麸皮40g/L,(NH4)2 SO4 4g/L,KH2PO4 3g/L,MgSO4 0.8g/L,吐温80 1g/L;初始pH值5.0,接种量8.0%,培养温度30℃;此条件下发酵木聚糖酶酶活达1456.27IU/mL。     

基因工程菌毕赤酵母发酵产纤维二糖酶条件研究

本文对基因工程菌毕赤酵母产纤维二糖酶活的发酵条件进行研究,结果表明:确定最优摇瓶培养基为小麦B浆4%,硫酸镁0.05%,玉米浆1%。其摇瓶最佳产酶条件为诱导时间12h,诱导前适宜的增殖时间为16h,接种量10%,转速220r/min,发酵pH值为6。在此基础上进行了50L发酵罐发酵中试,50L发酵罐诱导产酶高达125U。     

赖氨酸脱羧酶发酵工艺及酶学性质

考察了蜂房哈夫尼菌(H.alveiAS1.1009)的L-赖氨酸脱羧酶对L-赖氨酸的脱羧作用,分析了培养基、温度、pH、激活剂等因素对酶活力的影响。实验结果表明,最适培养基成分为:ρ(蔗糖)=20 g/L、ρ(玉米浆)=20g/L、ρ(酵母膏)=5 g/L、ρ(牛肉膏)=3 g/L、ρ(蛋白胨)=10 g/L、ρ(氯化钠)=5 g/L、ρ(硫酸铵)=2 g/L、ρ(维生素B6)=5 g/L和ρ(L-赖氨酸)=5 g/L,100 mL发酵液中接种量为5 mL液体菌种。最佳转化工艺条件为:转化体系温度35℃、pH=5.0,ρ(菌体)=10 g/L,ρ(吐温-80)=0.15 g/L。L-赖氨酸脱羧酶在最适发酵和转化条件下比酶活可达7 984.43 U,底物转化率可达70%。     

氨基甲酸乙酯水解酶在枯草芽孢杆菌中的表达及发酵优化

将来源于赖氨酸芽孢杆菌SC02的氨基甲酸乙酯水解酶(UH)基因在枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis WB600中进行克隆和表达,在枯草芽孢杆菌中实现了UH活性表达,在摇瓶水平通过单因素考察和响应面分析实验对氨基甲酸乙酯水解酶发酵进行优化. 结表明,酶活最高可达到14.20 U/mL,产酶最佳培养基成分为：淀粉10 g/L、磷酸氢二钾9 g/L、麦芽浸膏25 g/L、硫酸镁1 g/L、胰蛋白胨55 g/L,最适发酵温度为37℃,最佳接种量4%. 在3 L发酵罐中采用最优发酵条件,酶活在16 h达到18.03 U/mL.     

一株青霉发酵产生木素过氧化物酶的工艺条件

研究了一株青霉菌P6 (Penicillium sp. P6)液体发酵产生木素过氧化物酶的工艺条件,考察了青霉菌P6在天然培养基稻米糠、玉米糠、麦糠和合成培养基GMY中的产酶情况,结果表明,麦糠是较理想的底物. 通过单因素方法研究了添加苯甲醇和MnSO4对酶活的影响;采用正交实验对MnSO4添加量、麦糠含量和培养基pH进行了研究,在实验范围内最佳酶活达到了2.69 U/mL. 进一步通过单双因素回归实验研究了麦糠和MnSO4的最佳含量,得到了最佳培养条件为孢子接种量1.1×106 mL-1,培养时间8 d,500 mL三角瓶装液量150 mL. 最佳培养基组成为麦糠50 g/L,初始pH 4.8, MnSO4 5.66 mmol/L.     

Improvement of Staphylococcus xylosus lipase production through optimization of the culture conditions

The Staphylococcus xylosus strain produces without induction an original lipase named S. xylosus lipase (SXL). Since considerable interest has been given to microbial lipases for biotechnology applications like detergents, food, drugs and pharmaceutical products, improvement of their production is of great importance to reduce the final cost. This goal could be reached through the optimization of several physicochemical culture conditions. Indeed, an appropriate medium was formulated for SXL production. It was composed of 17 g/L pancreatic digest of casein, 2.5 g/L glucose, 6 g/L yeast extract, 0.75 g/L ammonium sulfate corresponding to a C/N ratio of 6, 1 g/L K₂HPO₄ and 1 g/L KH₂PO₄. In such a medium, SXL production reached 42 U/mL. Moreover, the usefulness of such a medium for large‐scale production of SXL was also evidenced in an automated fully controlled 2.6‐L fermenter. It was shown that aeration of the medium, which strongly affected the growth, regulated the lipase synthesis by the produced cells. It was found that when using a dissolved oxygen saturation of the medium of 50%, the SXL production reached 62 U/mL.     

一株脂肪酶产生菌及其脂肪酶催化性质的初步研究

从各种含油脂的土壤中筛选分离到一株高选择性拆分(R,S)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯[(R,S)-HPBE]的产脂肪酶菌株CF-12,经形态观察、生理生化试验和16S rDNA序列分析,鉴定该菌为沙雷氏菌属（Serratia sp.）。对菌株CF-12产脂肪酶的发酵条件进行了初步优化,确定最适产酶条件为：蔗糖5 g/L,酵母粉10 g/L,金属离子Mg²⁺ 0.75 mmol/L,发酵培养24 h,脂肪酶活性可达20.1 U/mL。该脂肪酶最适反应温度和pH值分别为40 ℃和7.0。利用冻干酶粉拆分 (R,S)-HPBE 15 h,(R)-HPBE产率达39.6%,ee=90.8%。     

海洋微生物溶菌酶的发酵优化与中试生产

以海洋细菌S-12-86为试验菌株,采用摇瓶发酵优化的方式,研究培养基组分(碳源、氮源、碳源与氮源的比例、金属离子)与发酵条件(培养温度、接种体积分数、装液体积分数、起始pH值、产酶周期)对海洋微生物溶菌酶产量的影响,并进行中试放大试验。结果表明:该菌产酶最佳培养基组分为:葡萄糖10 g/L,蛋白胨5 g/L,MgSO45 g/L,CaCl22 g/L;最适发酵培养温度为30℃,接种体积分数为4.0%,装液体积分数为10.0%,起始pH值为8.0,发酵周期24 h。海洋细菌S-12-86发酵优化后的产酶量(25636.8 U/mL)较优化前的产酶量(14454.4 U/mL)提高了75.4%。海洋微生物溶菌酶中试发酵的产酶量达26697.87 U/mL。说明摇瓶发酵优化条件可以应用于海洋微生物溶菌酶中试生产上。     

黑曲霉（Aspergillus niger）ZJB-09101菌株手性拆分环氧氯丙烷的培养条件优化

将筛选得到的黑曲霉（Aspergillus niger）ZJB-09101菌株应用于外消旋环氧氯丙烷的手性拆分,对菌种产环氧化物水解酶的发酵条件和外消旋环氧氯丙烷的手性催化过程进行了研究。结果表明,黑曲霉ZJB-09101产环氧化物水解酶的最佳培养基成分是：淀粉14．63g／L,豆饼粉6．45g／L,K2HPO4·3H2O0．8g／L,KH2PO4·3H2O0．4g／L,MaSO4·7H2O0．05g／L,pH7．0。ZJB-09101菌株在150r／min、30℃条件下,经过4d的培养,环氧化物水解酶的酶活达90．36U／1,,比优化前的39．27U／L提高了130％。在环己烷的反应体系中,底物外消旋环氧氯丙烷浓度为0．6%,在30℃下生物催化反应7h,（S）-环氧氯丙烷的e．e．值和产率分别为99．060／6：和17．14％。     

黄铜拉链香槟金着色工艺

对黄铜拉链进行香槟金着色。研究了着色液中各组分用量和工艺条件对着色液稳定性与膜层颜色的影响,得到较佳的配方和工艺条件为:CuSO4·5H2O 4~6 g/L,乙二胺四乙酸二钠10~15 g/L,甲醛6~9 mL/L,十二烷基硫酸钠0.08~0.15 g/L,调色剂1.0~2.2 g/L,pH 12~13,温度50~55℃,时间1.5~3.0 min。在该工艺下可得到结合力良好的香槟金色膜,耐磨性、耐蚀性和耐热性都满足生产要求。