黑曲霉β-葡萄糖苷酶的基因克隆

利用依据黑曲霉β葡萄糖苷酶(bgl1)基因序列设计合成的一对特异性引物,以黑曲霉As3.350总DNA为模板,PCR扩增得到了预期大小的目的DNA片段,将该目的DNA片段转入大肠杆菌中并进行了序列测定。测序结果表明该DNA片段大小为2 948 bp,其核苷酸与β葡萄糖苷酶基因序列同源性达91%,该基因由7个外显子和6个内含子组成.     

盐生卤虫BADH基因的克隆及序列分析

实验以盐生动物卤虫（Artemia）为材料,采用酚-氯仿法提取总DNA,以已报道的BADH基因的保守序列设计引物,通过PCR技术,从卤虫的基因组DNA中分离得到了1个BADH基因片段,经测序,得到一段868 bp的核苷酸序列,输入Gen-Bank进行BLAST同源性比较,发现所得片段与植物中的籽粒苋的BADH4基因中的一段序列有96%的同源性,此项研究为更深入地研究抗盐动物的BADH基因奠定了良好的基础.     

硫化铋纳米粒子标记DNA及DNA特定序列的检测

用水热法合成表面修饰聚乙烯吡咯烷酮的硫化铋纳米粒子,借助氢键将其标记于5′端氨基修饰的寡聚核苷酸片段上,进而将其与固定于纳米金-碳糊电极上的目标DNA(来自于花椰菜花叶病毒的35 S启动子外源基因特定序列)进行杂交。用硝酸氧化溶解DNA杂交产物,以极谱络合吸附波测定溶解得到的Bi3+,成功实现了对目标DNA特定序列的检测,线性范围为1.0×10-13~1.0×10-8mol.L-1,检测限达到3.8×10-14mol.L-1。此方法对1个碱基错配、互补和非互补序列具有很好的识别能力。     

无抗性选择标记的植酸酶基因转化DNA的构建

构建了无抗性选择标记植酸酶基因的转化片段DNAphyAⅡ。两侧设置了高等植物基因组DNA保守序列CAATbox，TATAbox和polyA的DNA片段（DNAphyAⅡ，5‘-CAATbox-TATAbox-CaMV35S-phyA Ⅱ-GUS-Nos-Tem-polyA-3‘)，为提高转化率奠定了分子基础，此外DNAphyAⅡ中植酸酶蛋白编码基因phyA Ⅱ前后的启动子和终止子序列，确保了phyA Ⅱ会得以正确表达。     

苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒Gp64基因的原核表达

苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒囊膜蛋白Gp64是杆状病毒感染宿主细胞的重要功能蛋白之一.通过Oligo6.0设计一对特异性引物,用于扩增Gp64基因的部分DNA片段,对聚合酶链式反应扩增得到的DNA片段进行纯化,并对纯化后的双酶切DNA片段与经同尾酶双酶切后的原核表达载体p ET28a进行连接;对捕获有重组质粒p ET28a-Gp64的大肠杆菌BL21(DE3)细胞进行异丙基硫代半乳糖苷诱导,通过SDS-PAGE对诱导产物进行电泳分析,结果表明扩增的目的片段获得了表达;采用电透析的方法纯化了该蛋白,为进一步制备抗Gp64蛋白抗体做准备.     

人α-防御素HNP-1基因克隆及其结构分析

为了获得一种具有生物学活性的小分子多肽基因人α-防御素HNP-1，提取人外周静脉血液总RNA，反转录为cDNA作为模板，采用PCR的方法扩增得到长度约为380bp的防御素(Defensin)基因片段，并将该扩增产物连接入pMD18-T载体，转化大肠杆菌JM109感受态细胞，对PCR鉴定含有目的片段的克隆进行核苷酸序列测定，获得α-防御素HNP-1基因克隆。用序列处理在线工具包分析HNP-1基因结构。     

中国野桑蚕mtDNA COⅡ-ATPase 6基因区域的序列测定及分析

对中国山东青州野桑蚕mtDNA COⅡ-ATPase 6基因区域进行了序列测定与分析。结果表明在所测定的1．9kb左右的片段中,含有COⅠ基因的部分序列、tRNA—Leu基因、COⅡ基因、tRNA-Lys基因、tRNA—Asp基因、ATPase 8基因、ATPase 6基因和部分COⅢ基因,该片段的基因组织结构与其他家蚕／野桑蚕的基本一致,显示蚕类线粒体基因排列的保守性。COⅡ、ATPase 8、ATPase 6三个结构基因不同家蚕／野桑蚕之间的比对分析表明,它们在核苷酸水平、氨基酸水平的同源性很高。结构基因密码子与其他蚕类的相似;3个tRNA基因(tRNA—Leu、tRNA—Lys、tRNA—Asp)的碱基错配率高,TψC环缺乏相对保守的T-ψ-C-Pu-A序列,各臂的碱基配对数、各环碱基数目变化较大。以CoⅡ、ATPase 8、ATPase 6基因的核苷酸序列进行家蚕／野桑蚕的分子进化分析表明,家蚕同中国野桑蚕的亲缘关系最近,是家蚕起源于中国野桑蚕的又一证据。     

两种鱼类Hoxa-11基因片段克隆及5''端序列分析

为了分析脊椎动物从鳍到肢转变过程中基因的系统进化，采用PCR法克隆了斑马鱼和矛尾鱼的Hoxa-11基因片段，测序并进行序列分析。结果显示同源异型盒所在的外显子Ⅱ区和剪接位点是高度保守的，外显子I区又可分为四个亚区；中度保守区、可变区和两个高度保守区。从鱼到四足动物，Hoxa-11基因的主要变化是可变区的长度梯增且出现富含丙氨酸的区域。此外，在内含子中也发现了两个高度保守的DNA序列，其长度分别为35bp和16bp。     

家蚕znfhit基因的克隆表达及序列分析

在对家蚕蛹 cDNA文库的测序中发现了znfhit(zinc finger HIT)的 EST序列(GenBank登录号 DY230769).经过比对发现znfhit全长为1019bp,由297bp的 5'端非编码区序列(5'UTR)、462bp的开放读码框(ORF)和260bp的3'端非编码区序列(3'UTR)组成.将该基因的cDNA和家蚕基因组序列比对,此基因由3个外显子和2个内含子组成.ZNFHIT蛋白的疏水性最大值为1.533,最小值为-3.267,且不含跨膜区域.用PCR方法扩增获得znfhit基因,将其克隆至质粒pET-28a上,构建重组质粒pET-znfhit,并在大肠杆菌中大量表达,经镍离子亲和层析纯化得到重组蛋白,质谱鉴定其分子量为21.11KD,为后续研究其功能提供了条件.     

人α-防御素HNP-1基因克隆及其结构分析

为了获得一种具有生物学活性的小分子多肽基因人α 防御素HNP 1,提取人外周静脉血液总RNA,反转录为cDNA作为模板,采用PCR的方法扩增得到长度约为380bp的防御素(De fensin)基因片段,并将该扩增产物连接入pMD18 T载体,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,对PCR鉴定含有目的片段的克隆进行核苷酸序列测定,获得α 防御素HNP 1基因克隆。用序列处理在线工具包分析HNP 1基因结构。     

携带11R穿膜肽-p53融合蛋白基因的溶瘤腺病毒的抗肿瘤作用

p53是研究较为广泛的抑癌基因,可通过不同的途径来抑制或杀伤肿瘤细胞.为增强p53的抗瘤活性,将穿膜肽11R与p53的融合蛋白基因插入增殖型腺病毒载体中,在293细胞中经同源重组筛选获得重组溶瘤病毒SG7605-11R-p53;利用Western blot检测11R-p53的表达情况,TCID50方法测定病毒滴度;应用细胞活力检测实验(MTT)比较病毒杀伤肿瘤及正常细胞的效果.结果显示:SG7605-11R-p53所携带的11R-p53基因在所选细胞株中都能正确表达,与SG7605-p53、AD5-p53相比具有更好的杀伤肿瘤细胞的效果,显示了较强的抗肿瘤效应.说明SG7605-11R-p53是一种有潜力的治疗肿瘤的新型基因-病毒治疗系统.     

酶切方式对工程菌植酸酶性质的影响

将无花果曲霉 (A .ficuum)AS3 .3 2 4的植酸酶基因 (phyA) ,克隆到pPIC9K中 ,得到重组载体pPIC9K/phyAⅡ ,分别用限制性内切酶DraⅠ和Bpu1 1 0 2Ⅰ线性化 ,用电穿孔转化方法导入宿主巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)GS1 1 5 中 ,构建了两种植酸酶工程酵母。本文比较了这两种工程菌表达的植酸酶的酶学性质。研究结果表明 ,两者的酶学性质无显著差异     

两种呋咱环叠氮化合物的合成

合成出 5 ,5′ 双 (叠氮甲基 ) 3,3′ 双 (1,2 ,4 口恶二唑 ) (Ⅰ )和双 (叠氮乙酰亚胺基 )氧化偶氮呋咱 (Ⅱ ) ,利用元素分析、红外、核磁共振谱和质谱对两种化合物进行了结构鉴定 .通过将叠氮基引入呋咱衍生物中 ,得到了高氮含量、高生成焓的含能化合物 ,这两种化合物均有较高的密度 ,其中化合物Ⅰ为低熔点叠氮化物 ,可作为含能增塑剂应用     

抗肝腹水浸膏对鼠肝纤维化及利尿作用的影响

目的：探讨抗肝腹水浸膏对鼠肝纤维化及利尿作用的影响。方法：1、小鼠肝纤维化试验：采用20%、40%CCL4橄榄油溶液,皮下注射制作小鼠肝纤维化模型后给药6周,测定肝组织羟脯氨酸含量,计算肝、脾指数并作病理检查。2、大鼠利尿试验：取试验前禁食18hr大鼠,分别给大鼠灌胃用生理盐水配成的药液50ml/kg,立即放入代谢笼内,收集6hr内的尿液,观察其大鼠6hr的排尿量与灌胃量比值。结果：1、小鼠肝纤维化试验：工艺Ⅱ高、工艺Ⅲ中、Ⅲ高和马洛替酯组小鼠肝组织羟脯氨酸含量下降,工艺Ⅱ中、工艺Ⅲ低和马洛替酯组小鼠血清透明质酸含量下降,工艺Ⅰ高、工艺Ⅱ中和马洛替酯组小鼠脾指数下降,与模型组比较,差异有显著和非常显著性意义（p〈0.05和p〈0.01）。病理组织学检查：工艺Ⅰ低、工艺Ⅱ高、工艺Ⅲ低、Ⅲ中、复方鳖甲软肝片组和马洛替酯片组炎症细胞逐渐减少,点状坏死和变性范围缩小,有明显的纤维组织增生,与模型组比较,差异有显著和非常显著性意义（p〈0.05和p〈0.01）。2、从大鼠利尿试验：工艺Ⅰ低、工艺Ⅱ低、工艺Ⅲ低、呋塞米片组在2hr的排尿量和排尿量与灌胃量比值均增;工艺Ⅰ低、工艺Ⅱ低、呋塞米片组在6hr的排尿量和排尿量与灌胃量比值均增加,但与空白组比较,均无显著性差异（p〉0.05）。结论：工艺Ⅱ供试品,具有抑制肝纤维化及利尿作用。     

降低日粮蛋白质水平可显著降低肉仔鸡的氮排出量

本文研究了日粮蛋白水平(CP)对肉仔鸡生长性能及其氮的利用率、排出量的影响。试验选用320只0日龄肉仔鸡随机分成23-20-18%CP(Ⅰ)、21.5-19-17%CP(Ⅱ)、20-18-16%CP(Ⅲ)、18.5-17-15%CP(Ⅳ)4个日粮处理组,每个处理4个重复,分0～3周龄、4～6周龄和7～8周龄3个阶段进行了为期8周的试验。结果表明:Ⅰ组(高蛋白日粮)鸡生长性能较佳;但该组鸡干物质、氮的利用率显著低于其它三组(P<0.05),干物质、氮的排出量却显著高于其它三组(P<0.05);与Ⅱ组(次高蛋白日粮)比,该组鸡每周氮排出量高40%,每周干物质排出量高30%;从投入产出比看,该处理生产单位活鸡所需饲料费最高。因此,结合鸡场的经济效益和环保效益,我们认为,中投入、中产出(适宜的生产水平)、低污染的生产模式应为我国肉鸡生产的首选模式。     

Electrochemical determination of Gibbs free energy of formation of magnesium ferrite

The standard Gibbs free energy of formation of magnesium ferrite was determined by means of two types of solid state electrochemical cells: one using MgZr4(PO4)6 (MZP) as the solid electrolyte and the other using CaF2 as the solid electrolyte. The first cell was operated in the range of 950 to 1100 K. The second cell was operated in the range of 1125 to 1200 K. The reversibility of the cell EMFs was confirmed by microcoulometric titration. The Gibbs energy changes of magnesium ferrite relative to component oxides were calculated based on EMF measurements and are given by following expressions, respectively: △G(o)Ⅰ = -3579-15 T (J/mol) and △G(o)Ⅱ =6258-24.3 T (J/mol). The results obtained from two different cells are consistent with each other. The results also are in agreement with Rao's and Tretjakov's data in the measured temperature range. When the Gibbs free energies of formation of MgO and Fe2O3 were substituted in the reaction, the Gibbs free energies of formation of MgFe2O4 was obtained in two temperature ranges and the formations are shown as follows: △G(o)Ⅰ Formation = -1427394 360.5 T (J/mol) and △G(o)Ⅱ Formation = -1417557 351.2 T (J/mol).     

连云港市地下水质安全评价与防治对策研究

采用单因子污染指数法、内梅罗综合指数法和健康风险指数法评价了连云港市区地下水污染状况和健康安全性,探讨了地下水污染防治措施与对策。结果表明,新浦区的NO2-介于Ⅰ类和Ⅱ类水之间,其他3个区的NO2-均在Ⅲ类和Ⅳ类水之间;海州区的NO3-处于Ⅳ类水质,其他3个区的NO3-均是Ⅲ类水质;4个区的挥发性酚质量浓度处在Ⅳ类水质;其他污染物和10种重金属离子几乎都处于Ⅰ类和Ⅱ类水质之间。综合评价认为,新浦和连云区的地下水属于轻微污染水平,海州和开发区的地下水属于中等污染水平;4个区的10种易致癌污染物中的NO2-,Cr6＋和Pb的年健康风险较大,危害指数较高,在饮用地下水时都存在一定的风险性。     

4-(6-甲氧基-8-喹啉偶氮)-邻苯二酚与Cd(Ⅱ)分光光度研究与应用

研究了4-(6-甲氧基-8-喹啉偶氮)-邻苯二酚与Cd(Ⅱ)的显色反应及光度法测定痕量镉的新方法。在OP存在下,碳酸钠-碳酸氢钠缓冲介质中,该试剂与Cd(Ⅱ)生成稳定的带负电荷的1∶2的配合物。其最大吸收波长为565nm,表观摩尔吸光系数为4.68×104L/(mol.cm)。在0.1～1.0μg/mL范围内服从朗伯-比尔定律。显色反应具有良好的选择性,直接应用于环境水样中痕量镉的测定,结果满意。     

一类循环图的计数

讨论了4度循环图的结构。所有n阶4度非同构的连通循环图被分为两类:Ⅰ类和Ⅱ类。给出了计算Ⅰ类循环图的计算公式,改进了关于n阶4度非同构的循环图的计数公式。     

具变参数的p-Laplacian时滞泛函微分方程的反周期解

研究了一类具有变系数的p-Laplacian中立型泛函微分方程,利用Leray-Schauder不动点定理给出了它的反周期解存在的充分性条件.