日本血吸虫抗体电化学免疫传感器研究

该文研制了一种高灵敏的基于辣根过氧化物酶(HRP)放大的电化学免疫传感器用于日本血吸虫抗体的检测.实验采用夹心法的模式,在电极表面固定了日本血吸虫抗原(SjAg),用以捕获血清中的日本血吸虫抗体(SjAb),然后再与辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔IgG二抗形成免疫复合物.用计时安培法检测HRP酶催化H2O2还原对苯二酚底物产牛的电流,其大小与日本血吸虫抗体(SjAb)浓度在一定范围内成正比.对免疫反应的实验条件如电极表面固定抗原的浓度,HRP酶标二抗的浓度进行了优化.此外,还考察了其它蛋白质对测定结果的影响.结果表明,该方法操作简单,灵敏度高,线性范围宽,检测下限低.     

基于纳米金标记和银增强放大的血吸虫抗体的免疫分析

该文提出了一种新的、高灵敏的基于银增强放大和免疫胶体金技术的血吸虫抗体的免疫分析方法.免疫反应在聚苯乙烯微孔板中以间接分析模式(血吸虫抗原-兔抗血吸虫抗体-纳米金标记的羊抗兔IgG二抗)进行,通过反应上去的纳米金催化银离子的还原,使大量的银沉积在纳米金的周围,用酸将银溶解后,通过阳极溶出伏安法(ASV)对银离子进行检测,溶出峰电量的大小与待分析物血吸虫抗体(一抗)的浓度成正比.对免疫分析的一些实验条件如抗原与待测抗体的反应时间、纳米金标记二抗与待测抗体的反应时间、纳米金标记抗体稀释度以及银增强时间进行了优化.阳极溶出峰电量与日本血吸虫抗体的浓度在6.4μg/L～100mg/L范围内呈良好的线性关系,检测下限为3.0 μg/L.将该方法应用于兔血清中日本血吸虫抗体的测定,取得了满意的结果.     

基于胱胺自组装膜和SiO2纳米颗粒增强效应的日本血吸虫压电免疫传感器的研究

提出了一种基于胱胺自组装膜和SiO2纳米颗粒增强效应的生物分子固定法,并将之用于日本血吸虫压电免疫传感器的研究.所制备的SiO2纳米颗粒具有生物亲和性高和比表面积大等优良理化性能,经表面功能化后可高效键合日本血吸虫抗原(SjAg)分子,制得敏化的SjAg@SiO2颗粒.将SjAg@SiO2固定于修饰了胱胺自组装膜的石英晶体表面,发展了一种新型压电免疫传感器,用于日本血吸虫抗体(SjAb)的检测.实验结果表明,SiO2颗粒的纳米三维(3D)空间结构有利于所固定的抗原对抗体的识别,进而获得了对目标物SjAb的高灵敏检测.所研制的传感器检测感染兔血清样中SjAb浓度的线性范围为0.6～22.7 μg/mL,检测下限为0.4 μg/mL(S/N=3).此外,临床实际样品的分析结果表明,该免疫传感技术的分析检测能力与经典酶联免疫法(ELISA)相接近,可望用于血吸虫病临床生化诊断、现场筛查和疫情监控等.     

碳纳米管组装电化学免疫传感器测定IgG抗体的研究

应用吸附法将IgG抗原固定于多壁碳纳米管修饰的玻碳电极表面,制备用于IgG抗体检测的电化学免疫传感器。以辣根过氧化物酶为标记物,对苯二酚为底物,利用辣根过氧化物酶标记IgG抗体与待测IgG抗体竞争电极表面固定的IgG抗原,建立了免疫竞争法检测IgG抗体的高灵敏度电化学分析方法。碳纳米管的大比表面积和电化学催化作用,提高了分子识别物质的固定量和电化学检测的灵敏度。工作电位为 0.030 V(vs.SCE)时,响应电流与IgG抗体浓度在0.30~10μg/mL范围内呈良好的线性关系,检出限为0.11μg/mL。     

一种新的生物分子固定化方法在日本血吸虫压电免疫传感器中的应用

以压电传感器为检测装置,采用等离子体聚合膜沉积技术和纳米金亚单层自组装技术设计传感器的敏感界面,研制了一种新的日本血吸虫免疫传感器.先在石英晶振上沉积正丁胺等离子体聚合膜,利用膜上氨基与纳米金的共价键合作用组装一纳米金亚单层,得到可固定日本血吸虫抗原和易于传感器再生的界面,以牛血清白蛋白(BSA)封闭晶振上的非特异性吸附位点,用于直接响应感染兔血清中日本血吸虫抗体.探讨了纳米金的自组装和抗原包被等主要检测条件的影响;将传感器应用于不同感染程度兔血清样品的检测,结果令人满意.     

基于纳米二氧化钛为载体的新型荧光免疫流动体系测定补体3

研制了一种新的可更新荧光免疫流动体系用于补体3(C3)的测定.用纳米TiO2颗粒为固定抗体的载体,辣根过氧化物酶标记C3(HRP-C3),以HRP-C3与待测C3发生竞争免疫反应.辣根过氧化物酶(HRP)催化荧光底物3,3'5,5'-四甲基联苯胺(TMB)转化为无荧光物质,待测C3的浓度可由底物溶液的荧光降低值间接测定.通过简单的处理后,固定抗体的载体表面可以得到有效的再生.荧光响应与C3补体在6.5μg/L到75μg/L之间呈准线性关系.该方法检测限较低,重复性好,可满足临床检测的要求.     

基于纳米金标记的阳极溶出伏安免疫分析用于免疫球蛋白A的测定

提出了一种基于纳米金标记的阳极溶出伏安免疫分析方法.免疫反应在聚苯乙烯微孔板中以夹心分析模式进行,通过物理吸附将兔抗人免疫球蛋白A(IgA)抗体固定于微孔板上,与相应抗原IgA发生免疫反应后,再通过夹心模式捕获相应的纳米金标记的羊抗人IgA抗体,然后再与金标羊抗人IgA抗体和金标兔抗羊二抗形成的免疫复合物反应,在微孔板上引入大量的纳米金,将金溶解后,在碳糊电极上用阳极溶出伏安法(ASV)对金离子进行检测,溶出峰电流的大小间接与待分析物IgA的浓度成正比.对免疫分析的一些实验条件进行了优化.阳极溶出峰电流与IgA的浓度在0.018 mg/L～181 mg/L范围内呈良好的线性关系,检测下限为10μg/L.将该分析方法应用于人血清中IgA浓度的测定,取得了满意结果.     

兔抗原生物敏电极的研究

采用石墨电极作为基础电极 ,将待测兔抗原用丝素蛋白溶液固定在基础电极表面 ,根据抗原抗体的单一性识别原理 ,选用山羊抗兔IgG HRP抗体与其选择性结合制作而成 .利用H2 O2 将该生物敏传感器的电位响应信号放大 ,采用直接电位法检测兔抗原的浓度 .结果符合奈斯特响应 ,兔抗原的最低检测浓度 1.0× 10 -10 mol/L ,线性范围 1.0× 10 -8～ 1.0× 10 -10 mol/L ,响应时间为 15s .这种以固定化抗原结合酶标抗体量的多少作为检测抗原浓度的新型酶免疫电极 ,在临床检测、生物医学研究等领域中有着广阔的应用前景     

基于金纳米颗粒免疫凝集的压电传感技术快速检测人血清免疫球蛋白IgG

发展了一种利用金纳米颗粒免疫凝集的压电传感技术用于人血清免疫球蛋白IgG的简单、快速、高灵敏检测.以金纳米颗粒替代传统胶乳标记羊抗人IgG诊断血清(抗IgG),利用石英晶体微天平(QCM)直接灵敏响虚因金纳米颗粒免疫凝集而引起溶液的非质量参数(密度、粘度等)的变化.考察了pH值、离子强度和抗IgG-金纳米颗粒浓度对免疫凝集反应的影响,并进行了质控实验.结果表明,该传感技术毋需固定活性组分,可快速榆测浓度下限0.38μg/mL的免疫球蛋白IgC.定量能力与经典ELISA法相接近,可基本满足临床疾病诊断的生化检测要求.     

基于HRP催化过硫酸盐阴极电致化学发光的非标记型免疫传感器

基于酶催化阴极电致化学发光（ECL）构建灵敏的免疫传感器用于肿瘤标志物检测。利用过氧化氢酶（HRP）催化H2O2底物反应产生大量溶解氧,催化增强S2O82-的阴极ECL信号,构建非标记型免疫传感器。当抗原蛋白在电极表面与抗体形成免疫复合物时,屏蔽了检测液中底物与电极表面固载酶之间的接触并阻碍了电子传递,使ECL信号强度随抗原浓度增加而减小,建立ECL信号与待测物浓度之间的线性依赖关系,实现对血清中肿瘤标志物CEA的快速灵敏检测,检测限达1.04 ng/mL。     

汉语最长名词短语的自动识别

通过对包含5573个汉语句子的语料文本中的最长名词短语的分布特点的统计分析,提出了两种有效的汉语最长名词短语自动识别算法：基于边界分布概率的识别算法和基于内部结构组合的识别算法.实验结果显示,后者的识别正确率和召回率分别达到了85.4%和82.3%,取得了较好的自动识别效果.     

Highly sensitive label-free immunosensor for ochratoxin A based on functionalized magnetic nanoparticles and EIS/SPR detection

A label-free immunosensor for the detection of ochratoxin A (OTA) based on use of magnetic nanoparticles (MNPs) was developed. A gold electrode was modified using bovine serum albumin conjugate with a glutaraldehyde-thiolamine linker, creating a layer that prevents non-specific binding of OTA on gold. The OTA antibodies were attached to MNPs using the carbodiimide chemistry and afterwards were immobilized on the modified gold electrode using a strong magnetic field. Cyclic voltammetry (CV), electrochemical impedance spectroscopy (EIS) and surface plasmon resonance (SPR) were used to characterize each step in immunosensor development. The impedance variation due to the specific antibody-OTA interaction was correlated with the OTA concentration in the samples. The increase in electron-transfer resistance values was proportional to the concentration of OTA on a linear range between 0.01 and 5 ng/mL, with a detection limit of 0.01 ng/mL. SPR measurements showed a larger response range (1-50 ng/mL) with a detection limit of 0.94 ng/mL. Analytical results were in accordance with standard ELISA test kit.     

利用图像SPR分析仪检测多组分蛋白芯片

介绍了一种新型高通量表面等离子体谐振(SPR)生化分析仪。基于图像分析技术和自动进样技术,该仪器可对微阵列SPR敏感芯片进行动态检测,实现高通量、多参数、多组分快速检测和定量分析。对兔IgG和人IgG分别与羊抗兔IgG和羊抗人IgG的免疫结合反应进行了实验检测。结果表明:该分析系统具有灵敏度高、免标记等优点,且阵列芯片中所设置的参比单元可以消除溶液本体折射率和温度变化的影响,提高了测量精度和准确性;另外,芯片可以再生重复使用,降低了测试成本。     

Flexible and disposable immunosensors based on layer-by-layer self-assembled carbon nanotubes and biomolecules

A low-cost, flexible, and disposable immunosensor is presented in this paper. The single-walled carbon nanotubes (SWNTs) and biomolecules are self-assembled between two micro-patterned electrodes. The immuno-chip acts as a platform of a horseradish peroxidase (HRP) labeled sandwiched Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay (ELISA). The pH change induced by the biochemical reactions influences the electrical conductance of SWNT. A detection resolution of 0.4 ng/ml (2.5 pM) for normal rabbit immunoglobulin G (IgG) is demonstrated. The new fabrication technique and the HRP labeled detection protocol can be extended to the recognition of other antigens for critical applications to clinical diagnosis, food toxin detection, and environment monitoring.     

Targeted inhibition of Klotho binding to fibroblast growth factor 23 prevents hypophosphetemia

Klotho is a transmembrane protein which plays significant role in the pathogenesis of phosphate ion (Pi)-related disorders. Pi accumulation in human kidney tissues results in the major metabolic disorders due to malfunctioning of Klotho-FGFR1-FGF23 trimeric complex. The potential role of Klotho in Pi metabolism was elaborated through modeling and interaction analysis of glycosyl hydrolase (GS1 and GS2) domains with Fibroblast growth factor 23 (FGF23). In order to inhibit the association of Klotho and FGF23, binding patterns of three reported hits (N-(2-chlorophenyl)-1H-indole-3-carboxamide, N-[2-(1-cyclohexen-1-yl)ethyl]-6,7,8,9-tetrahydropyrido[1,2-e]purin-4-amine and 2-(1-propyl)amino-11-chlorothiazolo[5,4-a]acridine) were evaluated through molecular docking analysis. These inhibitors effectively targeted both GS1 and GS2 domains of Klotho at the similar sites required for FGF23 binding. To further characterize the comparative binding profile of these compounds, molecular dynamics simulation assays were performed. Taken together, current study emphasizes that Klotho may be anticipated as a target molecule in familial hypophosphatemic rickets and mentioned compounds may prove to be effective therapeutic targets against hypophosphetemia induced disorders.     

基于分治策略的组块分析

组块分析的主要任务是语块的识别和划分,它使句法分析的任务在某种程度上得到简化。针对长句子组块分析所遇到的困难,该文提出了一种基于分治策略的组块分析方法。该方法的基本思想是首先对句子进行最长名词短语识别,根据识别的结果,将句子分解为最长名词短语部分和句子框架部分;然后,针对不同的分析单元选用不同的模型加以分析,再将分析结果进行组合,完成整个组块分析过程。该方法将整句分解为更小的组块分析单元,降低了句子的复杂度。通过在宾州中文树库CTB4数据集上的实验结果显示,各种组块识别结果平均F1值结果为91.79%,优于目前其他的组块分析方法。     

Resonantly excited AlN-based microcantilevers for immunosensing

The purpose of this work is to study the performance of resonantly driven microcantilevers excited with a piezoelectric aluminium nitride thin film as a mass sensor for the detection of interactions in the field of immunosensing. Two cantilevers with different width (i.e. 300 and 200?μm), but constant length and thickness of 300 and 20?μm were considered. The figures of merit of these structures, such as the mass sensitivity and the limit of mass detection, were determined. According to the results obtained, a cantilever being 300?×?200?μm² in size and a high frequency mode was the best combination to detect antibody/antigen interactions. The previous combination was applied to detect the affinity between rabbit immunoglobulin G (IgG) and the complementary anti-rabbit IgG produced in goat. The binding was registered as a shift of the resonance frequency of the mode under investigation and the correlation between the added mass and the measured shift is analysed.     

一种基于纳米金／石墨烯／普鲁士蓝（PB）修饰玻碳电极非标记免疫传感器

采用电聚合的方法将普鲁士蓝（PBl聚合在玻碳电极表面,再将石墨烯修饰在PB上面,然后再采用电沉积的方法将HAuCL直接还原成纳米金粒子,沉积在石墨烯表面,最后将羊抗人IgG抗体直接固定于该修饰的玻碳电极表面,制备了用于人IgG抗原检测的非标记电化学免疫传感器。利用循环伏安法和交流阻抗研究了修饰电极表面的电化学特性,用差分脉冲伏安法对人IgG抗原进行了测定。实验表明,此免疫传感器在含不同浓度人IgG的PBS溶液（pH6．98）中测定,响应电流与人IgG浓度在5．55～455．5ng／mL范围内有良好的线性关系,其相关系数r=0．9926,检测限为0．015ng／mL（S／N=3）。该免疫传感器具有制备简单、响应时间快（5min）、稳定性好等特点。