HYNIC-Anx13的~(99)Tc~m标记及其用于细胞凋亡显像的研究

细胞凋亡是正常人生长、免疫控制、自我动态平衡不可缺少的组成部分,是机体对细胞增殖与成长的1种基本对抗反应。细胞经历凋亡时,将有磷脂酰丝氨酸(PS)暴露于细胞膜的外表面,AnnexinV是对PS具有高亲和力的人体内源性蛋白。因此,AnnexinV成为研究早期细胞凋亡的重要标识物。放射     

正电子核素标记Annexin V的研究进展

Annexin V是一种磷脂结合蛋白,能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸(PS)特异性结合,因此Annexin V是检测细胞早期凋亡的灵敏指针.利用正电子核素对Annexin V进行标记后,通过与PS的结合可检测细胞凋亡,实现活体无创正电子发射计算机断层显像(PET),从而进行人体细胞凋亡研究,达到疾病早期诊断的目的.本文就正电子核素标记Annexin V用于凋亡显像的研究现状进行综述.     

正电子核素标记AnnexinⅤ的研究进展

AnnexinⅤ是一种磷脂结合蛋白,能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸（PS）特异性结合,因此AnnexinⅤ是检测细胞早期凋亡的灵敏指针。利用正电子核素对AnnexinⅤ进行标记后,通过与PS的结合可检测细胞凋亡,实现活体无创正电子发射计算机断层显像（PET）,从而进行人体细胞凋亡研究,达到疾病早期诊断的目的。本文就正电子核素标记AnnexinⅤ用于凋亡显像的研究现状进行综述。     

低剂量率γ射线杀伤肿瘤细胞机制的实验研究

用60Co源以1Gy/min剂量率照射Hela细胞,剂量分别为1、2、5、10、15Gy.用AnnexinV和PI双染法观察凋亡细胞形态;DNA梯形条带证实凋亡存在;克隆形成分析细胞增殖能力.结果显示:(1)Hela细胞凋亡率随照射剂量和时间的增加呈上升趋势,照射后168h组各剂量点凋亡率高于其他各时间组.2Gy以下时凋亡率改变不大,达5Gy时凋亡率显著增加,且达峰值(72.57±2.04)%(P＜0.001).(2)早期凋亡细胞,PS外翻,胞膜呈绿色荧光圈.凋亡晚期出现Annexin V-FITC及PI染色均阳性的外绿内红的细胞图像.坏死细胞则为红色.(3)凋亡细胞碎片呈"梯状"条带.(4)1Gy/min的剂量率照射,剂量为2-15Gy,克隆形成率由(58.95±0.36)%降至(1.67±0.35)%(P＜0.001).表明低剂量率γ射线照射可诱导Hela细胞凋亡,其凋亡率与照射剂量相关,在5Gy时凋亡率最高.     

电离辐射致中国仓鼠卵巢(CHO)细胞凋亡的研究

为研究X射线致中国仓鼠卵巢(CHO)细胞凋亡,探讨电离辐射的生殖毒性机理,用2—20GyX射线照射CHO细胞株,通过荧光显微镜、AnnexinV/PI双染色法结合流式细胞仪,检测和观察细胞凋亡及其形态学改变。结果表明,X射线照射后24、48、72h均出现细胞凋亡,并随照射剂量增加凋亡细胞数亦增加。但照射后48h和72h细胞凋亡更为明显(p<0.05)。凋亡的CHO细胞在荧光显微镜下,观察到细胞核内染色质的不规则聚集、核固缩和周边化,有的呈月牙形,甚至出现凋亡小体等一系列凋亡细胞形态特征。结果显示电离辐射引起生殖细胞严重的DNA损伤,因无法修复继而导致细胞凋亡。     

Tamoxifen联合γ线照射对脑胶质瘤细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用

研究三苯氧胺（Tamoxifen，TAM）对人脑胶质瘤细胞辐射增敏作用及诱导细胞凋亡。用^3H-TdR掺入法、免疫组织化学法、流式细胞术和激光共聚焦显微镜扫描技术检测细胞DNA合成、雌激素受体表达、细胞凋亡及凋亡的形态学特征。结果表明，TAM能抑制细胞DNA合成，与^60Coγ线联用抑制作用增强，表现出协同作用。TAM能诱导细胞凋亡，其凋亡率随TAM浓度的升高而增高，凋亡细胞核固缩和核碎裂，可见凋亡小体。而免疫组化结果显示SHG-44细胞不表达雌激素受体。以上结果表明TAM可能通过诱导细胞凋亡途径来增加细胞的辐射敏感性，而与雌激素受体途径无关。     

热休克诱导表达的HSP70对X射线诱发淋巴细胞凋亡的影响

Ficoll法分离大鼠外周血淋巴细胞，于42℃、5％CO2培养箱中热休克处理90mill，采用流式细胞仪检测热休克预处理后恢复不同时间的淋巴细胞中HSP70的表达情况；采用流式细胞术AnnexinV／PI双标法检测经过热休克预处理的淋巴细胞经0．5Gy、1．0Gy、1．5Gy、2．0Gy、2．5Gy、3．0GyX射线辐照后细胞凋亡率的变化。以探讨热休克预处理后淋巴细胞中HSP70的表达情况和HSP70对X射线辐照后淋巴细胞凋亡率的影响。结果显示：1．淋巴细胞经热休克预处理后恢复1h，HSP70表达即有明显增加，4h达到高峰，可持续表达24h。2．热休克预处理诱导表达的HSP70可以抵抗X射线（1．0～3．0Gy）诱导的淋巴细胞凋亡。由此本工作可以得出结论，热休克预处理表达的HSP70可抵抗X射线诱发的淋巴细胞凋亡。     

WORT增强γ射线对SHG44细胞周期及凋亡的影响

研究渥曼青霉素（Wortmannin，WORT）对人脑胶质瘤细胞辐射增敏作用及诱导细胞凋亡。用克隆法、流式细胞术和激光共聚焦显微镜扫描技术检测细胞克隆形成、细胞周期和凋亡以及凋亡的形态学特征。结果表明：WORT能抑制细胞克隆形成，和^60Coγ射线联用抑制作用增强，表现出协同作用。WORT和^60Coγ射线联用能引起SHG-44细胞G1期阻滞，WORT能增强^60Coγ射线诱导的细胞凋亡，凋亡细胞核固缩和核碎裂，可见凋亡小体。以上结果表明，WORT可能通过诱导细胞G1期阻滞和凋亡途径来增加细胞的辐射敏感性。     

辐射诱导细胞凋亡及其在肿瘤治疗中的应用研究进展

细胞凋亡是一种生理性细胞死亡，其特征与细胞坏死不同。深入了解和研究细胞凋亡，对辐射生物学理论探讨及对指导辐射防护实践和肿瘤治疗实践都有重要价值。本文就辐射诱导正常细胞和癌细胞凋亡及其基因调控机制以及它在肿瘤放疗中的应用前景，作了简要介绍     

射线诱导的细胞凋亡过程中端粒酶表达及其活性

利用原位端粒酶-凋亡双染色法检测A549细胞和L02细胞hTERT和凋亡双表达，端粒序列扩增检测(TRAP)方法检测群体细胞端粒酶活性，研究γ射线照射人肿瘤细胞和正常细胞后端粒酶的表达变化与凋亡-发生的关系。结果表明，1—SGy照射后24—72h，A549细胞和L02细胞内hTERT表达增强，端粒酶和凋亡双染色阳性细胞随照射剂量的提高而增多；在凋亡发生的过程中，群体细胞端粒酶活性呈剂量依赖性增强，提示放射线诱导人肿瘤和正常细胞凋亡可能不是通过直接抑制端粒酶活性的机制；而辐射诱导端粒酶活性增高可能是细胞修复辐射损伤的机制之一。     

放射性核素153Sm诱导不同肿瘤细胞凋亡及相关基因表达研究

采用细胞抑制率实验、光镜、电镜、流式细胞仪和免疫组化方法研究了^153Sm作用于前列腺癌PC—3细胞、乳腺癌ER—75—30细胞和肺癌A549细胞后对细胞的抑制作用，诱导肿田细胞凋亡的时间剂量效应关系和周期依赖性以及凋亡相关基因bcl—2和bax蛋白在其中的表达情况。结果显示，^153Sm对3种肿田细胞有明显的杀伤作用，能诱导肿田细胞产生凋亡的形态学变化，并且随着浓度的增大和时间的延长，凋亡率增加，且呈时间剂量和周期依赖性。比1—2表达减弱，bax表达增强，细胞阻滞于G2／M期，bcl—2和bax基因均参与^153Sm诱导细胞凋亡过程。3种细胞对^153Sm的敏感性由高到低依次为PC—3细胞、ER—75—30细胞和A549细胞。     

^147Pm诱发免疫细胞凋亡的电镜观察及CHX和ActD的防护作用

对裂变产物＾１４７Ｐｍ照射人淋巴细胞白血病细胞株Ｍｏｌｔ－４细胞和巨噬细胞株Ａｎａ－１细胞诱发的细胞凋亡及其防护因子进行了研究，通过透射电镜的形态观察，发现＾１４７Ｐｍ可诱发Ｍｏｌｔ－４和Ａｎａ－１两株免疫细胞核断裂，核染质边聚，以及呈现膜包裹着的凋亡小体形成为特征的细胞凋亡。研究表明，蛋白质合成抑制剂ＣＨＸ和ＲＮＡ的合成抑制ＡｃｔＤ可显著抑制由＾１４７Ｐｍ诱发的免疫细胞ＤＮＡ链断裂，对＾１４７Ｐ     

60Co γ射线照射对K562细胞凋亡的影响及其作用机制的研究

采用不同剂量的^60CoY射线照射人红细胞系白血病细胞（K562细胞），于照射后不同时间用流式细胞仪检测细胞凋亡率、蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bel-2和Bax、流式细胞仪检测细胞周期的变化，以探讨^60CoY射线照射对K562细胞凋亡的影响及其作用机制。结果表明，与正常对照组相比，3和7Gy剂量组在照后48和72h，10、15和20Gy剂量组在照后72h细胞凋亡率显著升高。2Cy照射后24h，照射组的Q／M期阻滞明显（P〈0．05），S期细胞比例明显减少（P〈0．05），照射组Bel-2／Bax比例明显比正常对照组降低。以上结果说明，随着照射剂量的增加和时间的延长，细胞凋亡率有随之上升的趋势；y射线对细胞周期的影响主要是显著的G2／M期阻滞和S期细胞减少；y射线可能是通过线粒体途径诱导K562细胞凋亡。     

188Re诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究

采用MTT法，光镜，电镜，流式细胞仪和免疫组化方法研究了^188Re诱导三种肿瘤细胞凋亡的形态学变化，剂量时间效应关系以及凋亡相关基因Bcl-2和Bax在其中的表达情况。结果表明：^188Re对三种肿瘤细胞有明显的杀伤效应，能效导其产生凋亡的形态学变化，并且随着浓度的增大和时间的延长，凋亡率增加，Bcl-24表达减弱，Bax表达增强，二者比值下降;细胞阻滞于G2／M期，三种肿瘤细胞对^188Re的敏感性由高到低依次为PC－3细胞，ER－75－30细胞，A549细胞。     

N-乙酰半胱氨酸对HT22细胞辐射诱导氧化应激及增殖和凋亡的影响

为探讨N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetylcysteine, NAC)对辐射相关氧化应激和海马神经元HT22细胞的增殖及凋亡的影响。首先选用不同剂量(0、2、4、6、8、10、12 Gy)的X射线分别照射HT22细胞,筛选出最佳照射剂量(10 Gy),然后进行实验分组:空白对照(Control)组,单纯照射(RT)组,照射+NAC(RT+NAC)组,照射后继续培养24 h后,CCK-8法检测细胞增殖、AnnexinV/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡情况;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平以评估细胞内氧化应激程度,比色法测定细胞内谷胱甘肽(glutathione, GSH)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性,Western blot检测Cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达变化。结果表明,(1)2 Gy的照射对细胞增殖的影响不明显,当辐射剂量大于2 Gy时,随着辐射剂量的增高,HT22细胞增殖率明显降低(p<0.05);辐射剂量达10 Gy时,细胞增殖抑制率接近50%,因此将10 Gy作为实验最佳辐射剂量。(2)给予10 Gy X射线照射前给予NAC预处理可明显增加HT22细胞的增殖率(p＜0.01)。(3)给予10 Gy X射线照射可明显增加细胞内ROS、MDA含量(p＜0.01),减少细胞内GSH含量和SOD的活力(p＜0.01),促进凋亡蛋白Bax、Cleaved-caspase-3的表达(p＜0.01),细胞凋亡率显著增加(p＜0.01);NAC可减少照射后细胞内ROS和MDA含量(p＜0.01),提高GSH水平及SOD活性(p＜0.01),显著减少凋亡蛋白的表达和细胞凋亡。以上结果表明NAC可抑制辐射相关氧化应激,减少辐射对HT22细胞增殖抑制,减少细胞凋亡。     

低剂量电离辐射对小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

研究不同低剂量X射线对小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响。采用常规苏木精-T尹红(HE)染色法和原位末端标记术(TUNEL)通过光镜观察不同低剂量x射线照射后小鼠睾丸在生精周期不同阶段各类生精细胞凋亡的剂量及时程效应关系。结果表明，低剂量电离辐射诱导生精细胞凋亡具有明显的细胞种类规律性，在较低剂量照射(0．025Gy)时，以精原细胞凋亡为主，随剂量增加(0．05-0．2Gy)才逐渐累及精母细胞，并且精原细胞凋亡率明显高于精母细胞，很少累及精子细胞和精子。低剂量电离辐射诱导生精细胞凋亡具有一定规律性．这为深入探讨低剂量辐射兴奋效廊机制提供了更深层次的实验证据。     

辐射诱导IEC-6细胞GSK3β信号转导途径的激活与细胞凋亡的关系研究

探讨了辐射诱导IEC-6细胞GSK3β信号转导途径的激活与细胞凋亡的关系，以及调控GSK3β信号转导途径对γ辐射诱导IEC-6细胞凋亡的保护作用。分别用RT-PCR检测GSK3β和caspase-3mRNA表达，Western-blot法检测GSK3β蛋白质磷酸化水平，放射活性法检测GSK-3β蛋白酶活性，caspase-3分光法检测caspase-3酶活性，Hoechst 33342荧光染色法检测细胞凋亡，琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段化。发现6Gyγ射线照射可导致IEC-6细胞GSK3β基因表达上调，蛋白磷酸化水平降低，激酶活性增高；同时可使GSK3β介导的下游蛋白激酶caspase-3基因表达上调及酶活性增强；GSK3β和caspase-3特异性抑制剂预处理IEC-6细胞可使γ辐射诱导的IEC-6细胞凋亡细胞百分率降低，染色体DNA片段化消失。研究结果表明γ辐射可通过激活GSK3β从而进一步激活细胞凋亡相关蛋白激酶分子caspase-3，最终导致IEC-6细胞凋亡。抑制GSK3β和caspase-3激活可减轻6Gyγ辐射导致的IEC-6细胞凋亡，实验证实了GSK3β与caspase-3在γ辐射致肠上皮IEC-6细胞株损伤过程中的重要作用。     

细胞凋亡小分子PET显像剂的研究进展

细胞凋亡是细胞死亡的一种重要形式,细胞凋亡分子显像对于疾病的诊断和疗效评价具有重要的临床价值。分子影像学发展的关键技术之一是特异性分子探针的研究开发。正电子发射断层显像(PET)技术作为目前分子影像学发展最先进的技术,以及细胞凋亡PET显像剂的研发应用使活体内无创PET检测细胞凋亡成为现实,研发新型小分子PET探针将是该领域重要的发展方向。本文主要介绍细胞凋亡PET小分子探针及其最新研究应用进展。     

荧光显微镜及放射自显影观察^147Pm内照射诱发免疫细胞凋亡

对荧光涂料＾１４７Ｐｍ内照射人淋巴细胞血病细胞株Ｍｏｌｔ－４巨噬细胞株ＡＮＡ－１细胞诱发细胞凋亡进行了研究。估算了＾１４７Ｐｍ在不同阶段培养细胞中的辐射累积吸收剂量。通过荧光显微镜的形态观察，发现免疫细胞Ｍｏｌｔ－４和ＡＮＡ－１细胞在受和＾１４７Ｐｍ内照射作用后，可诱发明显的核断裂和核固缩，以及凋亡小体形成为特征的细胞凋亡。微观放射自显影研究表明，＾１４７Ｐｍ可通过免疫细胞膜，在细胞内呈亲膜性积聚     

细胞凋亡检测剂125,131I-Annexin Ⅴ的制备和初步评价

利用国内基因工程制备的Annexin Ⅴ,采用Iodo-Gen标记方法,研究了125,131I-Annexin Ⅴ的标记条件.在每管加入50 μg Iodo-Gen、pH=6～7.8、Annexin Ⅴ的质量浓度大于25 μg/mL的条件下,反应10 min,标记物的标记率大于80%.经PD-10色谱柱纯化后,标记物的放化纯度大于95%,室温下,标记物能稳定40 h.在正常小鼠体内的生物分布实验表明,碘标记的Annexin Ⅴ主要浓聚于肝、脾、肾,在体内清除很快.凋亡细胞结合分析表明,碘标记的Annexin Ⅴ保持了较好的生物活性,对PS的解离常数K为8.53 nmol/L,结合容量RT为1.23×106结合位点数/个细胞.所制备的细胞凋亡检测剂125,131I-Annexin Ⅴ可以用于进一步的动物模型或人体实验.