^60Coγ射线诱导HL-7702细胞子代蛋白质表达的改变

利用双向凝胶电泳（2-DE）和质谱技术,采用不同剂量60Coγ射线照射人正常肝细胞系HL-7702细胞,观察比较受照细胞克隆子代2-DE图谱的变化,并对差异蛋白质进行鉴定。结果表明,受照肝细胞克隆子代蛋白质表达发生了改变,串联质谱测序和串联质谱数据的Mascot共鉴定出17个差异表达的蛋白质点,4个是上调蛋白质,13个是下调蛋白质;上调蛋白质中,线粒体热休克蛋白60（HSP60）和珠蛋白转录因子1（GATA-1）明显高表达;免疫印迹技术进一步证实HSP60和GATA-1的表达随照射剂量的增加而增强。结果提示,在辐射诱发基因组不稳定性过程中,HSP60和GATA-1蛋白质可能发挥着作用。     

结直肠癌细胞辐射敏感性的定量比较蛋白组学研究

为筛选结直肠癌细胞辐射敏感相关的蛋白质,用于结直肠癌放疗的个体化选择,采用荧光差异显微凝胶电泳(DIGE)技术分离并筛选Cy3、Cy5及Cy2荧光素标记的不同辐射敏感性的结直肠癌细胞系SW480和LOVO的移植瘤组织的差异表达蛋白质,结果共筛选出35个差异表达蛋白点,其中,在SW480组肿瘤组织中表达上调的蛋白点有17个,在LOVO组肿瘤组织中表达上调的蛋白点有18个。用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术进行鉴定并分析,成功鉴定蛋白质点27个,LOVO组肿瘤组织表达上调蛋白17个,SW480组肿瘤组织表达上调蛋白15个。这些差异表达蛋白质有可能在结直肠癌辐射敏感性的预测中作为特异性的标记物,在结直肠癌患者的放疗选择中发挥重要作用,为结直肠癌患者的治疗选择提供技术参考。     

^60Coγ射线诱导BEP2D细胞蛋白质表达的改变

利用双向凝胶电泳和质谱技术,研究人支气管上皮细胞（BEP2D细胞）经^60Coγ射线照射后细胞蛋白质表达的改变。结果表明：受照BEP2D细胞蛋白质表达发生了改变,共同差异表达的蛋白质点上调的有3个,下调的有1个;通过质谱分析和数据库检索,有2个蛋白质点（样品D和样品660）经检索鉴定为肌球蛋白质轻链（MLC2和MLC3）,其中MLC2蛋白质的表达量随着剂量的升高而增高。这些蛋白质的高表达可能与辐射诱发肺部肿瘤有关。     

低剂量辐射对小鼠血清蛋白差异表达的影响

应用蛋白质组学方法筛选对低剂量?射线敏感的蛋白质,并采用双向凝胶电泳和基质辅助激光解析飞行时间串联质谱技术分离、鉴定不同低剂量?射线导致的小鼠血清差异表达蛋白。不同低剂量?射线照射后,对实验组与对照组的血清双向电泳图谱进行比较分析,通过质谱鉴定得到7个差异表达点,分别是载脂蛋白C-III、?珠蛋白、腮腺分泌蛋白、?2巨球蛋白前体、转甲状腺蛋白晶体结构H链、C1qc蛋白和丛生蛋白。提示低剂量?射线辐照能导致小鼠血清中某些蛋白表达发生变化。     

BEP2D细胞受照前后蛋白质组学研究

本研究利用蛋白质组学技术对受1.5Gy、3Gy γ射线照射的人支气管上皮(BEP2D)细胞和未经照射的人支气管上皮细胞蛋白差异表达谱进行了分析与鉴定。研究结果表明:2-D电泳后在分子量14.4～94kD,等电点3～10范围内分离出约1000多个不同蛋白质斑点。凝胶图象显示1.5Gy的γ射线照射后与对照组相比有15个蛋白点上调,104个下调;3Gy的γ射线照射后有26个蛋白点上调,144个下调;二个不同照射剂量共同表达的差异蛋白点有18个,其中上调的有3个,下调的有15个。通过对选取的10个蛋白点进行质谱分析,有2个蛋白点(样品D和样品660)经检索鉴定为肌球蛋白轻链(MLC)。这些蛋白表达量的改变可能与辐射诱发肺部肿瘤的发生有关,为进一步研究肺癌的发病机理提供了一定的基础。     

~(137)Csγ射线累积照射SD大鼠后肝脏蛋白质组的分析

采用相对和绝对定量的同位素标签技术(Isobaric tags for relative and absolute quantitation,i TRAQ)分析累积受137Csγ射线照射大鼠肝脏组织的蛋白质表达,筛选出差异蛋白质,对差异表达的蛋白质进行GO注释分析及相互作用网络分析,探讨137Csγ射线累积照射对SD大鼠肝脏蛋白质的影响。结果显示,质谱数据经蛋白质数据库搜索,在3组样品中有定量信息的蛋白质有2 220个;0.2 Gy照射组与对照组相比,差异蛋白有149种,52种蛋白上调,97种蛋白下调;2 Gy照射组有243种差异蛋白,123种上调,120种下调;两组共同表达差异的蛋白有122种,其中,52种蛋白表达上调,70种蛋白表达下调;利用GO注释对122个共同差异蛋白质功能进行聚类分析,结果表明:根据分子功能注释,差异蛋白以酶催化、蛋白质结合、核酸结合等功能为主,另外少数蛋白还有翻译调控活性;根据细胞组成注释,多数蛋白参与细胞胞浆、细胞核、细胞膜的组成;根据生物学过程注释,多数蛋白参与代谢调节和生物过程调节。利用PAJEK软件对两个剂量组共同差异表达的蛋白进行相互作用网络分析。结果显示SF3B1、ATP6V1C1是蛋白相互作用网络的重要节点,这两个蛋白直接或间接地与其它差异蛋白存在相互作用。上述研究结果表明,137Csγ射线累积照射可诱导SD大鼠肝脏组织蛋白质组的改变,SF3B1、ATP6V1C1蛋白可能在累积照射的肝脏损伤机制中发挥作用。     

大肠癌细胞辐射敏感相关蛋白的初步筛选

人大肠癌细胞LOVO和SW480细胞具有不同的辐射敏感性。用直线加速器分别予以0、2、4、6GyX射线照射，然后运用SELDI-TOF蛋白质芯片技术测定照射后24h细胞的蛋白质谱，分析两株细胞间在不同照射剂量后的蛋白质表达情况，通过Swiss-Prot数据库搜索初步筛选出可能与大肠癌细胞辐射敏感性相关的几种蛋白：GADD45B、Thioredoxin、Metallothionein1(MT1)。结果表明：大肠癌辐射敏感性的预测能够从蛋白质水平来体现，而SELDI-TOF蛋白质芯片技术可从蛋白质水平预测人大肠癌细胞辐射敏感性，为临床大肠癌患者的个体化放疗提供选择依据。     

白藜芦醇对肺癌A549细胞的放射增敏作用及其机制研究

摘要采用MTT法检测不同浓度白藜芦醇对肺癌A549细胞的毒性;克隆形成实验测定白藜芦醇对A549细胞增殖抑制作用;碱性单细胞凝胶电泳实验（彗星实验）检测细胞DNA受损情况;采用Westernblot法检测白藜芦醇与辐射联合作用对抑制凋亡蛋白Survivin的影响。结果表明,白藜芦醇对肺癌A549细胞的抑制作用随着白藜芦醇浓度升高及时间延长而增加：白藜芦醇与辐射联合作用可以明显增加辐射所致A549细胞的DNA损伤（p〈0．05）,并降低克隆形成率及抑制凋亡蛋白Survivin的表达。表明白藜芦醇对A549细胞具有放射增敏作用,且放射增敏作用可能是通过抑制Survivin蛋白的表达实现的。     

他莫昔芬联合~(60)Co γ射线辐照下调脑胶质瘤细胞PKCα蛋白表达的实验研究

研究他莫昔芬(Tamoxifen,TAM)联合Y射线辐照对脑胶质瘤细胞PKCα蛋白表达的影响,初步探讨TAM降低辐射抗性的机制.采用Western-Blot法检测PKCα和G1期调控蛋白CylinD1的表达;碱性单细胞凝胶电泳法检测DNA链断裂.结果提示,TAM联合γ射线辐照可诱导PKCα蛋白和CyclinD1蛋白表达量降低,增加单纯照射对DNA的损伤并抑制其修复.结果提示,TAM联合Y射线辐照能够增强TAM或辐照单独处理对PKCα蛋白表达的下调、诱导CyclinD1低表达和抑制DNA损伤修复,与TAM降低SHG-44细胞的辐射抗性有关.     

他莫昔芬联合60CO γ射线辐照下调脑胶质瘤细胞PKCα蛋白表达的实验研究

研究他莫昔芬(Tamoxifen,TAM)联合Y射线辐照对脑胶质瘤细胞PKCα蛋白表达的影响,初步探讨TAM降低辐射抗性的机制.采用Western-Blot法检测PKCα和G1期调控蛋白CylinD1的表达;碱性单细胞凝胶电泳法检测DNA链断裂.结果提示,TAM联合γ射线辐照可诱导PKCα蛋白和CyclinD1蛋白表达...     

A proteomics analysis for certain signature proteins of rabbit lacrimal passages after 125I seeds brachytherapy

To search for certain signature proteins and the expression profiles in lacrimal passage stenosis,rabbit models of lacrimal passage stenosis were treated by 125I seed brachytherapy.All the signature proteins were separated by two-dimensional electrophoresis,and identified by mass spectrometry.The results show that the up-regulated proteins are peptidyl-prolyl cis-trans isomerase A(PPIase A),and epidermal fatty acid-binding protein(E-FABP),while the down-regulated proteins are myosin light chain 1(isomer of skeletal muscle),myosin light polypeptide 6(isomer 1 of smooth muscle and non-muscle),myosin light chain 1(isomer of slow-twitch muscle A),isomer 2 of ERC protein 2,and α-crystallin family protein.The proteins may play a role in healing the wound and regulating synaptic active zone of neurons due to correlation to cell apoptosis,proliferation and migration of smooth muscle cell.These provide molecular mechanism for preventing stenosis and restenosis of lacrimal passage.     

同步辐射X荧光分析海州香薷根中铜结合蛋白的微量元素

利用Sephadex G-50凝胶过滤从Cu处理海州香薷根中分离得到两个不同的铜结合蛋白。用同步辐射X荧光(SRXRF)分析了两个蛋白的微量元素，结果表明分子量较小的铜结合蛋白2与Cu络合能力要强于分子量较大的铜结合蛋白1。另外，Pb、Fe和Zn等金属元素可以与铜结合蛋白竞争结合。两个铜结合蛋白中S含量都很低，说明海州香薷根中铜结合蛋白可能并不以含硫量较高的金属硫蛋白(MTS)或植物络合肽(PCs)为主。实验证明SRXRF技术可以很好地用于凝胶过滤分离蛋白的元素分析。     

安多霖对高功率微波照射大鼠睾丸细胞凋亡相关蛋白的影响

以p53、cyt-c和apaf-1为观察指标,选用性成熟Wistar大鼠按体重随机分为对照组、照射模型组、3 mg/kg、6 mg/kg和9 mg/kg给药组,给药组大鼠连续灌胃给药7天,对照组和模型组每天给予蒸馏水。给药结束后,给药组和模型组动物以100 mW/cm2的高功率微波照射15 min,大鼠分别在微波照前、照后第3、7和10天解剖取睾丸固定。采用免疫组织化学的方法检测睾丸组织中的目的蛋白,再用Image pro plus分析软件分析蛋白表达含量。结果表明:大鼠经高功率微波照后第3、7和10天,模型组睾丸细胞p53蛋白含量较对照组显著降低(p<0.05),但给药组明显高于辐照模型组(p<0.05);模型组大鼠睾丸细胞cyt-c含量也明显低于对照组(p<0.05),给药组虽然也降低,但明显高于模型组(p<0.05);对于apaf-1而言,辐照模型组含量较对照组显著升高(p<0.05),而给药组则比模型组显著降低(p<0.05)。     

用同步辐射X荧光分析血浆蛋白质的微量元素

用同步辐射X荧光(SRXRF)分析技术与凝胶色谱生化分离相结合，分析了用抗肿瘤药物顺铂处理过的和未处理过的小鼠血浆的大分子蛋白质。对以轻元素为基体的小量样品，用X荧光谱中的康普顿散射强度作为质量的因子，获得了在大于22ku分子量的蛋白质中Pt、S、Ca、Fe、Ni、Cu、Zn、Se、Br和Sr等元素含量在不同样品问的相对变化。由此推测，经顺铂处理后，Pt元素可与血浆中的大分子蛋白结合，含CM和S的大分子蛋白含量明显升高，而含Zn的减少。     

氡染毒大鼠支气管肺泡灌洗液蛋白质的双向电泳分析

观察氡染毒后大鼠支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)蛋白质表达谱的变化.雄性Wistar大鼠吸入氡的累积剂量达200工作水平月(Working level month,WLM)后,收集大鼠BALF,提取BALF细胞总蛋白,采用双向电泳技术(Two-dimensional electrophoresis,2-DE)分离总蛋白质,银染显色,进行差异蛋白质的分析.ImageMaster 2D Platinum软件分析结果显示正常组和氡染毒组大鼠BALF细胞总蛋白双向电泳图谱上分别可见到645和554个蛋白点,共获得48个显著的蛋白质差异点,其中23个点在正常大鼠BALF中表达或表达明显增强,25个点在染毒大鼠BALF中表达或表达明显增强.结果提示,正常大鼠与氡染毒大鼠BALF细胞的蛋白质表达谱存在差异.     

X射线全身照射对小鼠胸腺细胞Cyclin B1和p34cdc2蛋白表达的影响

本文采用免疫组织化学法研究了低、高剂量X射线全身照射后不同时间小鼠胸腺细胞CyclinB1和p34^cdc2蛋白表达的变化。结果表明,与假照组相比,75mGy X射线全身照射后8h小鼠胸腺细胞CyclinB1蛋白表达开始升高,12h达高峰,48h恢复至正常水平;而2Gy照射后4h小鼠胸腺细胞CyclinB1蛋白表达开始降低,12h降至最低,24h有回升趋势,48h恢复至假照水平。p34^cdc2蛋白的表达,与假照组相比,75mGy照射后4～48h未见明显变化;而2Gy照射后的时程变化与相同剂量照射后CyclinB1蛋白表达的变化基本一致。提示：低剂量X射线全身照射可诱导小鼠胸腺细胞CyclinB1蛋白表达增强,从而促进细胞周期进程,但对p34^cdc2表达无影响;相反,较高剂量照射导致CyclinB1和p34^cdc2蛋白表达均下降,最终发生G2阻滞。