酶联免疫吸附法检测动物源性食品中氨苯砜残留

应用间接竞争酶联免疫吸附技术,建立了一种快速检测动物源性食品中氨苯砜残留的方法,并对其各项技术参数进行了评价。结果显示,该方法的半数抑制浓度IC50为0.369μg/L,对鸡肉、猪肉样本的检测限为0.2μg/kg,对鸡蛋、蜂蜜样本的检测限为2μg/kg,对牛奶样本的检测限为0.6μg/L;样本添加回收率为78.2%~104.0%,变异系数为5.2%~13.5%;对实际样本的检测结果与液相色谱-串联质谱法基本一致。该方法操灵敏度高、快速准确,适用于动物源性食品中氨苯砜残留的快速检测。     

直接竞争酶联免疫法测定呋喃妥因代谢物

目的建立动物组织中呋喃妥因代谢物1-氨基乙内酰脲的直接竞争酶联免疫(ELISA)检测法,为检测食品中呋喃妥因代谢物残留提供快速检测的方法。方法采用活化酯法制备辣根过氧化物酶标记抗原,并用棋盘法确定酶标抗原和抗体的稀释度,优化反应条件,建立检测呋喃妥因代谢物的直接竞争酶联免疫法,并对其进行方法学评价。结果该方法的线性方程为Y=-34.723X+158.01(r2=0.9922),线性检测范围为0.177~11.508ng/m L,IC50为1.291 ng/m L;猪肉、鸡肉、鱼肉的最低检测限分别为0.115、0.113、0.109μg/kg,加标回收率在82.6%~104.7%之间,批内变异系数在3.6%~9.3%之间,批间变异系数在4.3%~12.4%之间。结论本方法快速准确,适用于动物组织中呋喃妥因代谢物的检测。     

动物组织中赛庚啶竞争酶联免疫法的建立

建立快速检测动物组织中赛庚啶的竞争酶联免疫法。制备赛庚啶人工抗原作为包被原,使用辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体,构建快速检测动物组织中赛庚啶的竞争酶联免疫法。结果表明,Logit/Log拟合标准曲线方程为Y=-2.051 8X-1.353 4,相关系数R为0.995 7,半数抑制浓度（IC50）为0.23μg/L,动物组织样本的检测限为0.3μg/kg,赛庚啶阳性样本的加标回收率为85.1%-114.5%,样本重复检测结果的变异系数为5.2%-9.6%。建立的竞争酶联免疫吸附方法具有较好的特异性、回收率和重复稳定性,可用于动物组织中赛庚啶残留的检测。     

响应面试验优化动物源性食品中呋喃西林代谢物ELISA检测的衍生条件

利用响应面法优化酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测呋喃西林代谢物前处理的衍生条件。根据Box-Behnken试验设计原理,在单因素试验基础上,以呋喃西林代谢物回收率为响应值,应用响应面分析法研究衍生剂体积、衍生剂浓度、衍生温度和衍生时间各因素间的交互作用及对呋喃西林代谢物回收率的影响。最终确定ELISA方法线性检测范围为0.13~10.51 ng/m L,IC50为1.17 ng/m L;在选取样品质量为2 g时,最佳衍生条件为衍生剂体积415μL、衍生剂浓度15 mmol/L、衍生温度57℃、衍生时间50 min,实际回收率为98.57%~103.76%;衍生产物与呋喃西林原药交叉反应率为7.63%,与其他结构类似物、功能类似物及衍生剂交叉反应率均小于0.17%;加标回收率为93.45%~103.21%,批内变异系数为1.86%~6.15%,批间变异系数为3.88%~8.84%。该衍生条件高效,检测方法准确可靠,适用于动物源性食品中呋喃西林代谢物的快速筛查。     

动物组织中呋喃妥因代谢物残留酶联免疫试剂盒的研制

通过对呋喃妥因代谢物分子结构进行改造,制备了半抗原及人工抗原,免疫动物,制备特异性强的单克隆抗体在筛选呋喃妥因代谢物单克隆抗体的基础上,建立酶联免疫检测方法,并研制出检测动物组织中呋喃妥因代谢物残留的试剂盒该试剂盒的IC50值为0.094μg/L,最低检测限为0.1μg/kg,样本添加回收率为78.2％～ 102.7％,变异系数为5.1％～11.4％;与呋喃妥因的交叉反应率为13％,与其他药物的交叉反应率均小于1％;对实际样本的检测结果与液相色谱-串联质谱法基本一致 该方法快速、灵敏、可靠,为动物组织中呋喃妥因代谢物的残留检测提供了便捷、准确的分析检测手段.     

呋喃西林代谢物单克隆抗体及荧光免疫层析试纸条的制备

为建立一种基于荧光免疫层析技术的呋喃西林代谢物的快速检测方法,采用活性酯法合成呋喃西林代谢物（氨基脲盐酸盐）（semicarbazide hydrochloride,SEM）人工抗原,并获得SEM的单克隆抗体,通过将量子点微球（quantumdot submicrobeads,QBs）与SEM偶联,得到QBs探针,制备荧光免疫层析试纸条。结果表明：SEM免疫荧光层析试纸条检测鱼肉组织的检测限为0.247 μg/L,不同添加质量浓度的回收率均在70%～120%之间,批内、批间变异系数均在15%以下,符合我国动物源食品中兽药残留检测方法相关指导文件的规定,且在2～8 ℃条件下可以保存6 个月以上,稳定性良好。     

动物组织中苯并咪唑类药物多残留ELISA方法的建立

应用竞争酶联免疫吸附技术,建立了一种快速检测动物组织中苯并咪唑类药物多残留的方法,并对其技术性能进行了评价.结果显示,该方法的半数抑制浓度IC50浮动范围为0.9μgL～1.5μg/L,动物组织样本的检测限为8μg/kg;样本添加回收率为79.8％～100.5％,变异系数为7.2％～9.5％;可用于检测氟苯咪唑、丙氧咪唑、甲苯咪唑、阿苯达唑、奥芬达唑等苯并咪唑类药物.该方法灵敏、快速,为动物组织中苯并咪唑类药物的残留检测提供了便捷的筛选检测方法.     

酶联免疫法检测婴幼儿配方奶粉中的维生素B_(12)

建立酶联免疫法检测婴幼儿配方奶粉中维生素B_(12)的分析方法,该方法线性相关系数大于0.996,范围在3~243μg/kg。奶粉样本经60%甲醇-水提取,再做1︰4稀释,通过酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定样本中维生素B_(12)。加标浓度为20μg/kg,奶粉中维生素B_(12)的回收率在95%~118%;加标浓度0,3,6,20和50μg/kg,样本的加标回收率在87%~102%;方法检出限为3μg/kg;与高效液相色谱法检测结果的相对标准偏差小于10%。方法操作简便,准确度和灵敏度高,可适用于婴幼儿配方奶粉中维生素B_(12)的检测。     

液相色谱-串联质谱法检测动物源性食品中 7种抗病毒类药物残留

目的建立动物源性食品中7种抗病毒类药物残留的液相色谱-串联质谱测定方法。方法动物源性食品中的抗病毒类药物经甲醇-1%三氯乙酸(1:1,V:V)提取,通过固相萃取柱净化、浓缩后,在正离子模式下用液相色谱-串联质谱法检测。结果 7种抗病毒类药物检测限为0.3~1.5μg/kg,定量限为1.0~5.0μg/kg。在0.1~100μg/kg浓度范围内线性关系良好,相关系数r0.99。在1.0、5.0、10.0μg/kg三个浓度添加水平下,该方法的平均回收率为87.2%~121.4%,相对标准偏差为0.6%~8.4%(n=6)。结论本方法专属性强、准确性好、灵敏度高,适用于动物源性食品中抗病毒类药物残留的检测。     

酶联免疫法检测酱油中的黄曲霉毒素B1

目的建立酶联免疫法检测酱油中黄曲霉毒素B_1(Aflatoxin B_1,AFB_1)的分析方法。方法酱油样本经纯乙腈(料液比=1:2,V:V)提取,再做1:9稀释,通过酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定样本中AFB_1。结果当加标浓度为2μg/kg和5μg/kg时,纯乙腈对酱油中AFB_1的提取回收率结果分别为121.3%和106.5%;方法检出限为1μg/kg。与国标方法检测结果的相对标准偏差小于10%。结论本方法准确、灵敏度高,可适用于酱油中AFB_1的检测。     

Development of enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of neomycin residues in pig muscle,chicken muscle,egg, fish,milk and kidney

A colorimetric competitive direct enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) method was developed using polyclonal antibody to determine neomycin residues in food of animal origin. No cross-reactivity of the antibody was observed with other aminoglycosides. The limit of detection of the method was 0.1 μg/kg. A simple and efficient sample extraction method was established with recoveries of neomycin ranged from 75% to 105%. The detection limits were 5 μg/kg(l) in pig muscle, chicken muscle, fish and milk, 10 μg/kg in kidney and 20 μg/kg in egg, respectively. Chemiluminescence assay was developed for detecting neomycin residues in pig muscle and chicken muscle. The limit of detection of the method was 0.015 μg/kg, and the detection limits were 1.5 μg/kg in pig muscle and 6 μg/kg in chicken muscle. The ELISA tests were validated by HPLC, and the results showed a good correlation (r²) which was greater than 0.9.     

一种多菌灵酶联免疫快速检测方法的建立

利用酶联免疫吸附法原理建立了一种能够定量测定果蔬、茶叶、烟叶中多菌灵残留量的方法。通过酸碱中和化学反应,制备多菌灵半抗原,再通过免疫小鼠筛选出抗多菌灵单克隆抗体,制得酶标羊抗鼠抗抗体,并将制备出的抗多菌灵单克隆抗体和酶标羊抗鼠抗抗体用于酶联酶联免疫试剂盒的研制。结果表明,在0.1~8.1μg/L的线性范围内,目标物多菌灵线性关系良好,相关系数(R2)可达到0.995。在300,600,1 200μg/kg 3个添加水平下试剂盒的回收率为76.0%~102.2%,相对标准偏差均小于10%。试剂盒检测烟叶、苹果、白菜、茶叶样本中的多菌灵,检测限依次为266.3,421.0,349.1,484.4μg/kg(n=20)。该方法属于快速检测方法,适用于果蔬、茶叶、烟叶中多菌灵残留量的测定。     

Determination of 103 Pesticides and Their Main Metabolites in Animal Origin Food by QuEChERS and Liquid Chromatography–Tandem Mass Spectrometry

A rapid and sensitive analytical multiresidue method has been developed for the simultaneous determination of 103 pesticides (herbicides, insecticides, and fungicides) and 18 metabolites in foods of animal origin using liquid chromatography-tandem with triple quadrupole in dynamic multiple reaction monitoring (DMRM) mode. A modified quick, easy, cheap, effective, rugged, and safe (QuEChERS) sample preparation technique was established, and the efficiency of the dispersive solid-phase extraction (d-SPE) cleanup step was evaluated by comparing the effects of different d-SPE sorbent combinations (primary secondary amine (PSA) + graphitized carbon black (GCB), PSA + C18, C18, and C18 + GCB). The limits of quantification (LOQs) ranged from 1 to 10 μg/kg, and the coefficient of determination (R ²) was ≥0.995 within the calibration linearity range of 0–250 μg/L for all pesticides. The combination of C18 + GCB was validated at two spiking levels (10 and 50 μg/kg) in chicken, fish, pork, and rabbit. Satisfactory recoveries (70–119%) and RSDs ≤17% were achieved for all analytes, except for naptalam (60–69%), pyrimethanil (40–49%), and thiabendazole (62–66%) at 10 μg/kg spiking level. The validated method was successfully applied to the analysis of real samples of food of animal origin.     

气相色谱-质谱法测定食品中的3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩

针对含油脂食品、不含油脂食品分别建立了有效的前处理方法,利用气相色谱-质谱技术,建立了一种简便高效、高灵敏度的检测食品中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的定性定量分析方法。含油脂食品经甲醇提取后冷冻过滤、不含油脂食品经正己烷提取后离心,以气相色谱-质谱为检测手段,外标法定量。研究结果显示,3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩在0.005μg/mL^1μg/mL浓度范围内曲线线性良好,相关系数为0.9999;在不同基质及不同加标浓度下,加标回收率为86.6%~104.6%,相对标准偏差(RSD_S,n=6)为0.9%~1.9%;3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩在不同基质中的检出限均可达到0.01mg/kg,定量限达到0.03mg/kg。该方法前处理操作简便、技术难度低,准确度和灵敏度高,抗干扰能力强,定性定量准确并快速的测定出食品中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的残留量。     

酶联免疫吸附法快速检测黄曲霉毒素

结合间接竞争反应机制,运用酶联免疫吸附技术(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),从抗原(antigen,Ag)包被时间、体系反应温度、酶标二抗作用时间、显色时间等主要因素开展快速检测黄曲霉毒素改进方法的研究。研究结果表明适宜的优化条件为:采用Ag包被20 h、反应温度24℃左右、酶标二抗作用时间30 min、底物显色时间15min。通过对饲料等11种样本的检测得出:半抑制浓度IC50<0.1μg/L,添加回收率在67%~116%,灵敏度达到0.03μg/L,线性系数>0.99,板内变异小于5%。检测试验结果良好,表明该改进方法具有可行性。     

高效液相色谱-串联质谱法测定动物源食品中氯霉素残留

目的建立高效液相色谱-串联质谱法测定几种动物源食品中氯霉素残留的方法。方法对《动物源食品中氯霉素残留量的测定高效液相色谱-串联质谱法》(农业部第781号公告)中的测定方法进行优化,样品经提取后经HLB固相萃取小柱净化,采用甲醇-水进行梯度洗脱,经Agilent Eclipse-plus C₁₈色谱柱(3.0 mm×100 mm,1.8μm)分离,采用多反应检测负离子模式进行定性及定量分析。结果在0.5~10.0 ng/mL范围内,氯霉素的浓度和色谱峰面积线性关系良好(r=0.9998),方法检出限为0.03μg/kg,定量限为0.1μg/kg,在1.0、2.0和5.0 ng/mL 3个水平的加标回收率为91.58%~109.52%,相对标准偏差小于7.5%。结论该方法快速、准确、灵敏,能满足几种动物源食品中氯霉素残留的测定。     

电感耦合等离子体质谱法测定海鱼中6种重金属含量

目的建立电感耦合等离子体质谱法测定海鱼中6种重金属的检测方法。方法样品用硝酸溶液微波消解进行前处理,采用电感耦合等离子体质谱法对样品中6种重金属进行测定。结果各元素在0~1.0 mg/L范围内呈良好的线性关系,相关系数均>0.999。方法检出限为铅:2.5μg/kg,镉:0.3μg/kg,汞:2.5μg/kg,砷:12.5μg/kg,铬:10μg/kg,镍:13μg/kg。回收率为92.4%~101%,相对标准偏差为2.1%~4.5%。结论该方法具有较高灵敏度、准确度及精密度,适用于海鱼中6种重金属元素的测定。     

河北省市售食品中双酚A和双酚S残留状况调查与分析

目的了解河北省市售食品(小麦粉、大米、肉类、淡水鱼、海水鱼、饮料及桶装水、肉罐头、鱼罐头和谷物罐头)中双酚A和双酚S残留状况。方法参考食品中化学污染物及有害因素监测技术手册方法,乙腈提取, GCB固相萃取柱净化,采用液相色谱-串联质谱法进行检测。结果在检测的356份样品中,双酚A共检出314份,检出率为88.2%,检测结果为小于检出限到514.8μg/kg,罐头食品是双酚A检出最高的食品类别,检出率为100%,检测结果为3.7~514.8μg/kg;双酚S共检出137份,检出率为38.5%,检测结果为小于检出限到93.8μg/kg,肉类食品(畜禽肉和鱼肉)是双酚S检出最高的食品类别,检测结果为小于检出限到268.9μg/kg。结论双酚A和双酚S在河北省不同食品中存在不同程度的残留,其污染情况值得关注。     

The Determination of PCBs in Meat and Sea Food by GC-QqQ-MS/MS

A new method was developed for the determination of 12 polychlorinated biphenyls (PCBs) in meat and sea food by gas chromatography coupled to triple quadrupole mass spectrometry using selected reaction monitoring technique. The method was based on ultrasonic extraction and florisil column cleaning up. Recoveries of the 12 PCBs ranged from 70.4?% to 100.6?% and the relative standard deviations were from 0.5?% to 12.6?%. The limits of detection ranged from 0.006 to 0.009 μg/kg and the limits of quantitation ranged from 0.02 to 0.03 μg/kg. Eight meat and sea food samples were analyzed for the analysis of the polychlorinated biphenyls using the proposed method.     

LC-MS/MS测定牛奶中氟虫腈及代谢物残留量

建立了液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法测定牛奶中氟虫腈及其代谢物残留量的方法。根据基质及目标物特点选择乙腈进行提取,通过比较Cleanert PEP Plus固相萃取柱,Florisil固相萃取柱、Waters Oasis PRiME HLB净化柱,氨基石墨复合柱净化效果及实验效率,选择Cleanert PEP Plus(60 mg/3 mL)固相萃取柱净化。经C18色谱柱分离,以0.1%甲酸乙腈溶液和0.1%甲酸水溶液(含浓度10 mmol/L乙酸铵)为流动相进行梯度洗脱,选择负离子多反应监测模式检测,外标法定量。结果表明1~50μg/kg范围内线性关系良好,相关系数R²>0.99。方法的检出限为0.6μg/kg,定量限为1μg/kg。在空白牛奶基质中3个不同添加水平实验中回收率为82.5%~97.4%,相对标准偏差为4.0%~10.5%。该方法简便、快速、准确、灵敏,适用于牛奶中氟虫腈及残留物的测定。