对硫磷酶联免疫吸附分析方法的建立和评价

通过制备对硫磷的多克隆抗体,建立了对硫磷的间接竞争酶联免疫吸附分析方法(icELISA)。通过活泼酯法将半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,获得免疫抗原和包被抗原。使用对硫磷抗血清,经优化条件参数建立了对硫磷的icELISA分析方法。该方法检测线性范围为3.39～533.05ng/mL,最低检测限为0.90ng/mL,对蔬菜样品和水样品的平均添加回收率为75.6%～127.4%,能用于实际样品中对硫磷的检测。     

PCR法快速检测超市生鲜牛肉卷和腌制牛肉片

通过扩增线粒体DNA片段,建立了检测生鲜牛肉和腌制牛肉片中掺入猪肉的快速检测PCR的方法。反应程序为:94℃预变性4min,然后经过30个循环,每个循环为94℃变性30s,退火温度为59.4℃反应30s,延伸温度72℃反应30s,30个循环后72℃保温延伸7min,通过电泳进行检测。经过多次实验,结果表明:所选定的引物只有在同一种属模板DNA存在的情况下才会发生PCR扩增,该方法特异性强、稳定、灵敏度高。本方法简单快速,无需酶切,适用于样品较多的检测。     

活性炭对枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶的作用

考察了活性炭对枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶液的脱色与纯化作用。结果表明,酶液在脱色温度50℃、活性炭量3%、吸附时间2h条件下,不仅可使酶液脱去一部分色素,并纯化酶3.77倍,收率达到86.19%±2.99%。     

氟喹诺酮药物格林沙星抗体制备及其icELISA方法建立

目的:制备格林沙星多克隆抗体并建立间接竞争酶联免疫吸附分析方法(icELISA)。方法:采用碳二亚胺法将格林沙星偶联于牛血清白蛋白(BSA)作为免疫原,免疫新西兰大白兔获多克隆抗体;采用活泼脂法分别将格林沙星、克林沙星、加替沙星、培氟沙星和沙拉沙星偶联于卵清白蛋白(OVA),制备5种包被抗原并做性能比较;建立icELISA方法并对其灵敏度和特异性进行评价。结果:成功制备了免疫原和包被抗原及抗体,抗体效价最高达64 000倍。以克林沙星-OVA作异源包被,建立的icELISA方法灵敏度最高,半抑制药物浓度(IC50)为9.14 ng/mL,检测限(IC10)为0.9 ng/mL,检测范围(IC20~IC80)为2.3~36.4 ng/mL,与其他喹诺酮类药物无明显交叉反应。结论:首次制备出格林沙星抗体并建立间接竞争酶联免疫吸附检测方法,该法灵敏度高、特异性强,为分析生物样品中格林沙星含量的测定提供了1种新的方法。     

魔芋葡甘聚糖改性及其应用

综述了魔芋葡甘聚糖酯化、醚化、交联、接枝共聚等化学改性及其应用的研究,指出了存在的问题和发展前景。     

β-甘露聚糖酶作用魔芋胶条件研究

利用枯草芽孢杆菌产生的胞外β-甘露聚糖酶水解魔芋胶,探讨单因素的影响作用,并用均匀设计考察多因素的影响作用。经二次多元回归分析,得出影响的最显著因子为时间;其次为魔芋胶浓度和温度;影响最小的因子为酶量。     

利用同相等差感应电势法检测膨化食品中阿斯巴甜的研究

利用同相等差感应电势法,向初级线圈施加5 V～20 V激励电压和300 Hz～500 Hz频率的激励参数,探究次级线圈中阿斯巴甜溶液的电学特性。结果发现,0～100 mg/kg阿斯巴甜溶液的瞬时绝对电压与初级线圈激励电压大小呈正相关,但不随频率变化而改变。20 V、300 Hz条件下,100 mg/kg阿斯巴甜溶液电势差较50 mg/kg提高32.46%,当阿斯巴甜质量分数增加时,体系电势差随激励电压增加而增大。阿斯巴甜质量分数、激励电压、频率及体系电势差呈线性相关,相关系数（r）为0.94。利用同相等差感应电势与化学法检测5种市售膨化食品中的阿斯巴甜总含量,其检测结果相对误差均在2.50%以内,同相等差感应电势法具有良好的重复性和准确性。将膨化食品预处理后的料液作为次级线圈,通过同相等差感应电势法测定其电信号特性来量化阿斯巴甜总含量,为膨化食品中阿斯巴甜的检测提供了一种新技术方法。     

超高压加工对荔枝果肉中两种品质酶的影响

研究了超高压处理对荔枝果肉中可溶性蛋白质和过氧化物酶、果胶甲基酯酶的特性影响,同时研究了柠檬酸、L-抗坏血酸以及氯化钙与超高压共同处理对荔枝果肉中过氧化物酶(POD)和果胶甲基酯酶(PME)活性的影响。     

微粉化对天麻（Gastrodia elata Bl.）粉理化性质和吸收的影响

研究了微粉化处理对天麻(Gastrodia elata Bl.)粉的理化性质及在大鼠体内吸收的影响。对天麻普通粉和超微粉进行粒径大小、分布、微观形貌、休止角、滑角、膨胀力、松密度、水溶性和主要成分等理化指标的测定,以及天麻活性成分天麻素的生物利用度研究。结果表明:微粉化处理使天麻粉平均粒径由121.50μm减小到34.09μm,粒径分布范围变窄,粉体更加均匀;天麻微粉膨胀力、松密度和水溶性较之细粉均有不同程度的提高,粉体的流动性降低;红外光谱显示天麻经超微粉碎后其主要成分未发生变化。普通粉和微粉的天麻素绝对生物利用度分别是34.18%和45.49%。研究结果表明微粉化处理对天麻粉物理特性的改善有助于营养成分溶出,显著提高天麻有效成分的吸收率,为指导天麻微粉的应用生产提供理论依据。     

基于酶联适配体的四环素检测方法研究

通过Mannich法偶联辣根过氧化物酶(HRP)和四环素(tetracycline,TC)分子制备酶标记物,采用棋盘滴定法确定链霉亲和素(streptavidin,SA)的包被浓度为8μg/mL,适配体稀释浓度为20 nmol/L。通过单因素实验优化了检测条件,碳酸盐缓冲液(CB,0.05 mol/L,pH 9.6)为包被液,适配体稀释液选择含有5 mmol/L Mg2+的磷酸缓冲液PBS,TC-HRP稀释度为1:50,标准品稀释液为PBS溶液,适配体孵育1 h,最终建立了四环素酶联适配体检测(enzyme-linked aptamer assay,ELAA)方法。该法半抑制浓度(IC50)为0.705μg/mL,检测限(LOD)为2.5 ng/mL,与其结构类似物(多西环素、土霉素、金霉素)测试中,发现除与金霉素稍有交叉反应(25.9%)外,与其他药物基本没有明显交叉反应。本研究所建立的直接竞争酶联适配体检测方法特异性强、灵敏度高,能够满足四环素定量分析要求,适用于食品中四环素的快速检测。