乳酸菌洗涤菌体合成共轭亚油酸的研究

为了解瑞士乳杆菌L7(Lactobacillus helveticusL7)洗涤菌体生物合成共轭亚油酸(CLA)的能力,通过单因素和正交优化研究,确定了瑞士乳杆菌L7洗涤菌体合成c9,t11-CLA的最适条件:0.05mol/LPBS缓冲液(pH5.8)、1.00mg/mL亚油酸、23℃反应12h。在最适转化条件下,c9,t11-CLA产量达到0.54mg/mL。结果表明,洗涤菌体合成CLA的产量和分批发酵相近,可以继续进行瑞士乳杆菌L7固定化细胞发酵生产CLA的研究。     

不同培养基对耶氏解脂酵母合成共轭亚油酸的影响

为了提高共轭亚油酸(CLA)在耶氏解脂酵母重组菌株中的产量,选择YEA、YPD、YP2D4、YNBDO2和YNBDL25种培养基,对其进行摇瓶发酵,分析其生长状态,并利用气相色谱法测定菌体中的总脂含量及脂肪酸组成.结果表明:培养基中充足的碳源和氮源是提高菌体生物量及重组蛋白表达量的前提;在培养基中添加脂肪酸显著提高了菌体中的总脂含量和t10,c12-CLA产量;在5种培养基中,YNBDL2是最适合t10,c12-CLA合成的培养基,其培养基中t10,c12-CLA产量为185.8 mg/L,是YPD培养基中t10,c12-CLA产量的13倍.     

乳酸菌制备CLA的研究

我们利用从酸菜汁中分离出的一株植物乳杆菌Lactobacillus plantarumL18转化亚油酸(LA)来制备共轭亚油酸(CLA)。在MRS培养基中添加0.06%(wt/vol)的LA作为诱导剂,获得制备CLA的洗涤细胞。以游离LA为底物,植物乳杆菌Lactobacillus plantarumL18的洗涤细胞为催化剂,厌氧环境有利于生成CLA。0.1M的磷酸钠缓冲液、pH7.0、LA浓度2%(wt/vol)、细胞浓度为20%(wt/vol)、30℃,反应64h,CLA的产量最高。反应液中生成的CLA产物为c9,t11/t9,c11-CLA和t10,c12-CLA异构体的混合物。     

c9t11- 和t10c12- 共轭亚油酸抗癌和影响脂质代谢的异同

共轭亚油酸(CLA)是一组位置和构象异构体的总称,异构体c9t11-CLA 和t10c12-CLA 或二者的协同作用赋予了CLA 的许多生理功能,比如抗癌、降低体脂含量、预防糖尿病的发生、降低血脂抑制动脉粥样硬化等;异构体c9t11-CLA 和t10c12-CLA 在结构及来源上存在一定差别--由于双键位置的不同,t10c12-CLA 异构体比c9t11-CLA 异构体更容易氧化;而在生理功能上二者也有差异-- c9t11-CLA 异构体的主要作用是抗癌,而 t10c12-CLA 则是降低体脂、血脂等,大量单一异构体的体外实验研究表明二者在抗癌及脂肪代谢的调节上作用机制也不尽相同。     

季节对天祝白牦牛乳中共轭亚油酸含量的影响

用气相色谱法测定天祝白牦牛在枯草期、返青期和青草期3个不同时期乳中CLA的质量浓度,乳样经氯仿-甲醇提取、氢氧化钾-甲醇甲酯化后,进行气相色谱分析;采用程序升温,以保留时间定性,外标法定量。结果表明,采用该方法使白牦牛乳中CLA异构体得到很好的分离。枯草期白牦牛乳中c9,t11-CLA的质量浓度显著低于返青期和青草期（P〈0.05）,返青期和青草期乳中c9,t11-CLA的质量浓度不具有差异显著性（P〉0.05）;3个不同时期乳中均未检测出c10,t12-CLA。     

超临界法制备玉米共轭亚油酸的工艺研究

以玉米胚芽油为原料,采用超临界法制备玉米共轭亚油酸(CLA)。通过正交试验方法确定最佳工艺条件为温度80℃、油:碱为1:0.5、时间4h、油:溶剂为1:2、压力15MPa,此时异构化效果理想,经气相色谱检测CLA转化率97.65%,产品中c9,t11-CLA与t10,c12-CLA含量分别为27.72%和30.88%。     

产共轭亚油酸植物乳杆菌的筛选、鉴定与诱变

从传统泡菜中筛选得到1 株乳酸菌lp15 能够合成共轭亚油酸(CLA),经16S rRNA 全序列分析法和API 系统鉴定法鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。利用人工诱变方法,以lp15 为出发菌株,采用紫外线、硫酸二乙酯(DES)依次诱变处理,经进一步液体发酵复筛获得多株突变菌株,CLA合成能力较出发菌株提高了29.3%～52.2%。其中lp15-2-1 突变菌株为CLA 生成能力最高菌株,MRS 培养液中添加0.2mg/mL LA 培养48h,CLA 产量达30.13μg/mL。经气相色谱(GC)检测分析,产物中cis9, trans11- 共轭亚油酸(c9, t11-CLA)占76.5%,trans10, cis12-共轭亚油酸(t10,c12-CLA)占23.5%。     

植物乳杆菌p-8转化亚油酸为共轭亚油酸的分析

研究植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）p-8的菌体、菌体破碎液和重组亚油酸异构酶系转化亚油酸（linoleic acid,LA）为共轭亚油酸（conjugated linoleic acid,CLA）的能力和机制。结果表明：L. plantarum p-8在含有LA的MRS上清液和菌体破碎液体外催化LA时,都可以低效产生cis9,trans11-CLA（c9,t11-CLA）、trans10,cis12-CLA（t10,c12-CLA）和trans9,trans11-CLA（t9,t11-CLA）,但菌体中只有很少的t10,c12-CLA。实时聚合酶链式反应结果表明,亚油酸异构酶系的表达水平较低可能是CLA产量较低的原因。独立表达的重组亚油酸异构酶系成员、黄素腺嘌呤二核苷酸（flavin denine dinucleotide,FAD）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸都存在才可完成LA转化为c9,t11-CLA、t10,c12-CLA和t9,t11-CLA,转化途径与L. plantarum AUK1009一致。L. plantarum p-8的亚油酸水合酶经同源建模后有3 个结构域,底物结合位点与FAD位点位于3 个结构域连接处的疏水空腔中,M76和Y180是2 个必需基团。     

瑞士乳杆菌L7生物转化共轭亚油酸的研究

建立了瑞士乳杆菌L7(Lactobacillus helveticusL7)分批发酵生物转化c9,t11-CLA的优化条件:MRS培养基、30℃发酵、静置培养、LA浓度为1.000 mg/mL、发酵时间36h。5L发酵罐分批发酵时,c9,t11-CLA的产量高达0.572 mg/mL。     

瘤胃细菌生物合成共轭亚油酸的累积特性

为了解瘤胃细菌生物合成共轭亚油酸(CLA)的特性,通过毛细管电泳(CE)分析,发现瘤胃细菌生物合成CLA的主要异构体有c9,t11-CLA、t10,c12-CLA和t9,t11-CLA 3种。在厌氧和有氧条件下,瘤胃细菌均能合成CLA,且氧气有利于CLA的累积,随反应时间的延长,CLA的量呈现先增加后减少的变化趋势。结果表明瘤胃细菌参与了反刍动物体内CLA异构体的生物合成与代谢,瘤胃细菌生物合成CLA异构体的特异性还有待更深入的研究。