2020年辽宁省副溶血性弧菌PFGE分型、血清型分布和耐药谱分析

目的 了解辽宁省副溶血性弧菌（VP）的流行特征,为食源性疾病的防控提供可靠的技术支持,提高对食物中毒应急事件的处理能力。方法 对2020年从辽宁省内14个市内食源性疾病病人和食品中分离的VP进行PFGE分子分型、血清学分型、药物敏感试验并分析。结果 44株VP（食源性疾病分离株22株,食品分离株22株）共分为15个血清型,9个血清群,有8株不能进行K分型,不可分型率为18.2%。食源性疾病分离株分为4个血清型、3个血清群,主要血清群为O3,其次为O1;食品分离株分为11个血清型、6个血清群,主要血清群为O2,其次为O1和O3。44株VP对15种抗生素的药敏结果显示,头孢唑啉耐药率高达68.2%,其次是氨苄西林22.7%、红霉素13.6%、阿奇霉素4.5%、头孢西丁2.3%、头孢噻肟2.3%。菌株主要对β-内酰胺类和大环内酯类抗生素耐药,耐药性逐年增强,一些食源性疾病分离株出现多重耐药,且多重耐药株数量逐年增加。食源性疾病分离株较食品分离株耐药率高,血清型O3∶K6为主要流行菌株,且耐药率高,PFGE分子分型按相似度90%以上,可分为5种PFGE优势带型。食源性疾病分离株相似度较高,可聚类成3个组。而食品分离株相似度较低,除了两株菌相似度大于90%外,其余菌株间相似度均在85%以下。结论 O3与O1血清型菌株之间有高度同源性,提示O3与O1血清型菌株密切相关。食品分离株同源性较低,提示食品株间关联性较差。辽宁省2020年VP分离株耐药情况不容乐观,耐药趋势还需进一步关注。     

一起由副溶血性弧菌引起的食源性疾病的病原学研究及溯源分析

目的对一起由副溶血性弧菌引发的食源性疾病进行实验室检测及溯源分析。方法对该起事件中采集的样品进行病原学检测,采用细菌分离培养、生化鉴定、血清学分型、实时荧光聚合酶链反应检测副溶血性弧菌及其毒力基因,对分离的阳性菌进行脉冲场凝胶电泳(pulse-field gel electrophoresis,PFGE)分析。结果本次从1份厨师和10份患者便及肛拭标本中分离培养出11株副溶血性弧菌,均携带tdh毒力基因,神奈川试验结果阳性,血清型为O3:K6型。对11株阳性菌进行PFGE分子分型和溯源分析,所有菌株获得相同的PFGE带型。结论结合流行病学调查,实验室病原学检测和PFGE结果,可判定此次事件为一起由副溶血性弧菌引起的食源性疾病暴发事件。     

宁波地区食品中致病菌监测与流行株分析

目的了解宁波地区食品中致病菌检出情况和菌株的耐药性,发现其流行优势菌。方法致病菌检测采用直接分离与增菌分离相结合的方法;细菌鉴定采用生化筛检和API等方法;细菌分型采用诊断血清和PFGE基因分型;药敏试验采用K-B法,耐药基因检测采用PCR法。结果 6 812份食品样品中检出目标菌7类12种,共2 331份,检出率为34.22%,致病性弧菌检出数最高,其次为沙门菌和致病性气单胞菌。副溶血性弧菌与其他致病菌差异有统计学意义(P0.01),分离出10个血清群和29个PFGE型,其中O6、O5血清群和PFGE 1型是副溶血性弧菌的主要优势流行型。检出的致病菌对大多数抗生素敏感,其中3株气单胞菌为带aacc耐药基因的多重耐药菌。结论宁波地区食品中致病菌种类较多,易引起食源性疾病;各类致病菌均有流行优势株,副溶血性弧菌是最主要的流行优势株;血清分型和PFGE型能发现优势菌,但均有一定的局限性。     

上海市闵行地区副溶血性弧菌分子流行病学特征分析

目的 分析上海市闵行地区副溶血性弧菌临床和食源性分离株的分子流行病学特征,了解本地区副溶血性弧菌的流行规律.方法 对2007-2010年临床来源菌株(食物中毒患者和散发腹泻病例)以及食源性样品中分离的184株副溶血性弧菌进行血清分型、耐热直接溶血素基因(tdh)和耐热相关溶血素基因(trh)检测.对102株临床来源O3:K6型菌株及41株食源性样品来源株,应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型和溯源分析.结果 在调查的52起副溶血性弧菌引起的食物中毒事件中,tdh阳性、trh阴性的O3:K6血清型引起的有46起(88.5％),tdh阳性、trh阴性的O4:K8血清型引起的有5起(9.6％).在散发腹泻病例中,tdh阳性、trh阴性的O3:K6、O4:K8和O3:KUT菌株分别占60.3％(38/63)、19.0％(12/63)和15.9％(10/63).41株食源性样品株分属9种O血清群,未见O3:K6和O4:K8血清型菌株,而且tdh和trh均为阴性.PFGE聚类分析显示闵行地区食物中毒O3:K6分离株中存在着遗传关系密切相关的优势流行克隆,散发腹泻患者O3:K6分离株中存在着与食物中毒优势株相同谱型,而所有食源性样品分离株与临床患者来源株亲缘关系都较远.结论 临床和食源性样品来源的副溶血性弧菌在血清分型、毒力基因和分子特征等方面存在显著差异,一大群遗传关系密切、tdh阳性、trh阴性的O3:K6血清型菌株在闵行地区呈优势流行.     

上海地区副溶血性弧菌大流行菌株血清型及分子特征研究

了解上海地区大流行副溶血性弧菌(VP)大流行菌株血清型分布及分子特征。方法 对2010—2012年分离自腹泻患者和食品中的VP菌株进行血清分型,以GS-PCR辨别大流行株,以PCR检测菌株的毒力基因tdh、trh和大流行株分子标识f237噬菌体orf8基因,以PFGE分型来分析菌株间的遗传关系。结果 1136株VP可分为52个血清型(群),其中64.5%的菌株GS-PCR阳性,判定为大流行菌株,其血清型有11种,主要集中于O3∶K6(76.8%)、O4∶K68(9.4%)、O1∶K25(6.8%)、O1∶K36(4.5%)4种血清型。相对于非流行菌株,O10∶K60、O3∶K3、O1∶K33三种血清型的菌株其PFGE图谱与已报道的大流行株更为接近,为新检测到的大流行血清型变种。大流行产毒株中仅能检测到tdh基因,未检测到trh基因,94.3%的大流行菌株携带噬菌体f237的orf8基因,但有5.7%的大流行株orf8基因缺失。相同血清型的大流行菌株其PFGE图谱存在差异,且orf8基因的携带与否不能以PFGE进行区分。结论 上海地区VP大流行菌株血清型相对集中,且不断有新的血清型变种出现。从PFGE图谱的差异和orf8基因的携带与否上来看,大流行菌株仍在演变。     

食物来源和食源性疾病来源的副溶血性弧菌的生物学特性比较研究

目的了解温州市平阳县食物来源和食源性疾病来源的副溶血性弧菌的血清群分布特点以及耐热直接溶血素(TDH)和TDH相关溶血素(TRH)检出情况。方法以59株副溶血性弧菌食品风险监测分离株和39株副溶血性弧菌食源性疾病监测分离株为研究对象,用标准血清进行血清学分群,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测tdh基因和trh基因。结果食品风险监测分离株检出9个血清群,无优势菌群;食源性疾病监测分离株检出O1、O3和O4;以O3和O4为主,分别占48.7%(19/39)和46.2%(18/39)。食源性疾病监测分离株的毒力基因检测结果为38株仅含有tdh基因,1株仅含有trh基因,而食品风险监测分离株仅检出1株只含有tdh基因的菌株。结论平阳县食品风险监测中分离的副溶血性弧菌菌株与分离自食源性疾病监测的副溶血性弧菌菌株的主要血清型、毒力基因都存在差别。本研究为预防和快速检验副溶血性弧菌引起的食源性疾病提供了科学依据。     

珠江三角洲地区副溶血性弧菌遗传多样性和致病性相关研究

副溶血性弧菌(Vibiro parahaemolyticus)是一种常见的食源性致病菌,本文研究了珠江三角洲地区副溶血性弧菌的遗传多样性。从54株副溶血性弧菌出发,研究了它们的API20E生化反应、抗生素耐药性、O抗原血清型,进行了ERIC-PCR分子分型,并检测了两种毒力基因tdh和trh的分布。54株副溶血性弧菌可被分为6个生化反应类群,主要类群为Biochem-A;菌株对萘啶酮酸、环丙沙星、氯霉素均不耐药,而对氨苄青霉素耐药率最高,耐药率0.88;O抗原血清型分别为O1、O2、O3、O4、O5、O6、O8、O10、O11,O2为主要血清型,O3为临床主要血清型;ERIC-PCR分子分型将54株菌分成47个型别,ERIC-PCR图谱相似性大于0.80的类群有12个,没有明显的优势类群;有12株副溶血性弧菌为tdh阳性,阳性率为0.22,其中10株为临床来源菌株;有2株副溶血性弧菌为trh阳性,阳性率为0.04,均为食品分离株。珠三角地区食品和临床来源的副溶血性弧菌具有丰富的遗传多样性。     

江西省食源性沙门菌血清分型及脉冲场凝胶电泳指纹图谱研究

研究江西省食源性沙门菌的血清型,用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法对优势血清型进行分子分型,建立江西省食源性沙门菌PFGE指纹图谱资料库,为食源性疾病溯源提供数据。方法 对136株食源性沙门菌进行血清分型,对其中优势血清型德尔卑沙门菌菌株进行PFGE分型,获得分子分型指纹图谱,运用Bionumerics v6.6软件进行聚类分析。结果 136株沙门菌分离株血清群以B群为主,优势血清型主要是德尔卑沙门菌(49.26%),67株德尔卑沙门菌可分为41个型别的PFGE指纹图谱(相似值100%的为同一PFGE型别),主要集中在3个型别中。结论 江西省食源性沙门菌血清型分布呈多样性,优势血清型是德尔卑沙门菌,生肉制品是其主要的来源,同种血清型别的PFGE指纹图谱无相关性。     

2011—2013年广州市海珠区不同来源副溶血性弧菌分离株血清分型及耐药性研究

了解近年来广州市海珠区副溶血性弧菌食物中毒分离株、散发腹泻病人监测分离株、外环境分离株的血清分型及耐药现状。方法 2011—2013年61株副溶血性弧菌,包括17株食物中毒菌株、27株散发腹泻病人菌株、17株外环境监测菌株,对其进行生化鉴定、血清分型及药敏试验。结果 17株食物中毒分离菌株,共分6个血清型,O3∶K6共12株(70.6%);27株散发腹泻病人分离菌株,共分10个血清型,O3∶K6共17株(63.0%);17株外环境分离菌株,共分11个血清型,其血清型分布分散。61株菌株出现两重耐药3株,三重耐药1株。结论 广州市海珠区食物中毒、腹泻病人中主要流行的血清型是O3∶K6,不同来源的分离株存在不同程度的抗生素耐药。     

不同来源副溶血弧菌分离株的遗传相关性分析

选取来自上海、宁波、舟山的109株临床、食品和环境分离株,对其进行血清分型和ERIC-PCR分型研究。通过玻片凝集反应进行血清分型,结果显示:在26种血清型中,O3∶K6和O4∶K8所占比例较高,分别为20.7%和19.5%,合计达40.2%;其次为O4∶K68,O1∶K25,O3∶K68,O3∶K25,O3∶K8和O1∶K6等。结合来源分析表明:环境分离株的血清型分布呈现出显著的多样性,与食品和临床分离株差异较大。采用ERIC-PCR基因分型方法,结合聚类分析比较各分离株之间的遗传相关性,结果显示:ERIC-PCR指纹图谱可将109株副溶血弧菌分为65个型,31个类群,分辨力指数为0.942。亲缘关系分析结果显示:不同来源的分离株可聚为一类,在基因水平上存在一定的相关性。本研究揭示了不同来源的副溶血弧菌血清型分布情况及遗传相关性,结合血清分型和ERIC-PCR分型可进行流行病学溯源,为副溶血弧菌的预防控制提供理论依据。     

某企业婴儿肉毒中毒乳粉相关样品中肉毒梭菌的分离与分型

目的 对从某企业获取的30批次婴儿配方乳粉样品进行肉毒毒素和肉毒梭菌检测，对分离到的1株B型肉毒梭菌进行全基因组测序分析。方法 参照GB 4789.12—2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 肉毒梭菌及肉毒毒素检验》对样品进行肉毒梭菌分离及肉毒毒素分型实验；对分离到的菌株进行全基因组测序，并分析菌株的遗传特征。结果 30批次样品中均未检出肉毒毒素；将增菌液进行小鼠腹腔注射后，4批次乳粉样品出现了典型小鼠肉毒中毒症状，但仅从1批次乳粉样品中分离到肉毒梭菌。基因组测序分析显示，该菌为Ⅰ群B型肉毒梭菌，毒素基因簇为Ha型，毒素基因为B2亚型。结论 针对背景微生物复杂的婴儿配方乳粉中肉毒梭菌检测，不应以菌种分离作为金标准，而应以增菌液小鼠毒性实验结合肉毒抗血清保护实验作为确认方法。全基因组测序可对分离菌种进行精准鉴定和相关遗传特征分析，为中毒事件处理提供可靠的技术支撑。     

2015—2020年宜宾市肉类食品沙门菌血清型及分子分型研究

目的 研究宜宾市肉类食品中沙门菌分离株的血清型和分子分型特征,分析沙门菌污染的危险因素。方法 收集2015—2020年宜宾市辖区(县)肉类食品沙门菌分离株29株,进行血清型鉴定和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型分析,并就地域、物种来源和售卖方式对沙门菌血清群检出构成比的影响进行多因素Logistic回归分析。结果 29株沙门菌分离株共检出14种血清型(分属4个群),主要优势血清型为鼠伤寒沙门菌、吉韦沙门菌和肠炎沙门菌。聚类分析显示PFGE分子分型为18种带型。肠炎沙门菌带型相似度100%,来自同一传染链;吉韦沙门菌有2种带型,鼠伤寒沙门菌有4种带型,相似度较差;多因素Logistic分析显示,影响D群沙门菌检出的主要危险因素为地域分布(OR=1.053,P<0.05);影响E群沙门菌检出的主要危险因素为物种来源(OR=3.887,P<0.05)和地域分布(OR=1.227,P<0.05)。结论 监管部门应从家禽养殖地地域来源和肉类物种来源两个方面加强宜宾市肉类食品安全监督。     

2015—2021年湖州市食品中沙门菌污染与分子分型研究

目的 了解湖州市市售食品中沙门菌的污染状况,为预防与控制食源性疾病的发生提供依据。方法 采集2015—2021年5类1 463份样品按照GB 4789.4—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》对沙门菌进行检验,对分离到的沙门菌进行血清分型、抗生素敏感试验和脉冲场凝胶电泳分子分型（PFGE）检测,结果用Excel、SPSS 19.0进行统计分析。结果 2015—2021年共检测5类1 463份食品样品,检出沙门菌菌株47株,总检出率为3.21%(47/1 463)。不同食品类别中生畜肉检出率最高,为6.61%(23/348)。共检出19种血清型的沙门菌,其中优势血清型为鼠伤寒沙门菌。不同食品中检出的沙门菌血清型有差别。对2019—2021年分离到的20株沙门菌进行药敏试验和PFGE检测,结果显示分离株对氨苄西林和四环素耐药性较强,耐药率分别为70%(14/20)和60%(12/20)。分子分型显示,经Xba I酶切后,19株沙门菌产生11个PFGE带型,多态性较高。结论 2015—2021年湖州市市售5类食品中均有检出沙门菌,其中两类为即食食品（中式凉拌菜和散装熟肉制...     

广西单核细胞增生李斯特菌的流行率、毒力特征和分子分型研究

目的 比较广西不同种类食品中单核细胞增生李斯特菌（以下简称单增李斯特菌）的流行情况、毒力特征和分子分型特征，更好地了解单增李斯特菌的遗传特点及其传播的潜力。方法 对来自2002—2020年的210株单增李斯特菌进行全基因组测序（WGS），分析其序列分型（ST）、克隆群（CC）型及毒力基因。结果 2002—2020年广西53.8%单增李斯特菌分离株来源于肉与肉制品，59.0%分离株来自于谱系Ⅱ，优势ST型为ST8和ST9。79.4%菌株携带LIPI-1基因（hly、prfA、plcA、plcB、mpl、actA），83.7%菌株携带LIPI-2基因（inlC、inlF、inlJ、inlK）。17.6%菌株携带LIPI-3基因（llsA、llsB、llsD、llsG、llsH、llsP、llsX、llsY）。结论 肉与肉制品是广西单增李斯特菌检出率最高的食品类型，分子分型结果证实了单增李斯特菌种群具有高度的遗传多样性，WGS的高分辨力可用于监测食源性单增李斯特菌病的暴发。毒力基因的分布表明广西单增李斯特菌存在不同程度毒力基因的缺失，应警惕高致病性的菌株引起的食源性暴发事件。     

杭州市1株不产毒霍乱弧菌食品分离株的基因组特征与溯源研究

目的 研究杭州市1株不产毒小川血清型霍乱弧菌食品分离株与国内外食品和临床分离株的溯源关系及其分子特征。方法 采用荧光定量聚合酶链式反应检测菌株毒力基因分布,使用高通量测序获得基因组序列,使用生物信息学方法鉴定其多位点序列分型（MLST）型别。将101株食品和临床分离株基因组序列比对到参考基因组N16961获得单核苷酸突变位点（SNV）,去除重组并构建进化树,分析食品分离株和近源菌株的基因分布情况。结果 该食品分离株是不产霍乱毒素和产毒素共调菌毛的霍乱弧菌（CNTP）,MLST分型结果为ST1480,与杭州地区流行的ST75型CNTP菌株属于同一克隆群。该菌属于进化树L3b. 1分支,与杭州2011年临床分离株（HZ11-1,HZ11-2）高度同源,去除重组后仅有26个SNVs位点差异。结论 从甲鱼涂抹拭子中检出与杭州地区流行的CNTP高度同源的菌株,杭州地区散发病例感染来源可能与爬行类食品污染因素有关,应加强对其养殖场所及销售场所进行消毒。     

河南省2016—2020年食品污染科瓦利斯沙门氏菌及食源性疾病的溯源状况

目的 研究河南省2016—2020年食品污染科瓦利斯沙门氏菌及食源性疾病的溯源状况。方法 2016—2020年河南省食品中分离出22株科瓦利斯沙门氏菌,从腹泻患者粪便中检出5株科瓦利斯沙门氏菌。参照国家食品安全风险监测手册进行血清分型、药敏试验和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型,PFGE和药敏数据使用BioNumerics 7.6软件包进行聚类分析。结果 22株科瓦利斯沙门氏菌均来生鲜禽肉食品。从耐药结果来看,食品来源的菌株多重耐药现象不是十分严重,而腹泻患者来源的菌株耐药谱比较复杂,有敏感株存在,也有2株对13种抗生素耐药的超级耐药菌出现;从PFGE分子分型结果来看,同一时期同一区域的食品株之间有相似度很高的现象出现,提示了污染食品在夏季某一区域有聚集的可能。从腹泻患者株和食品株的比对溯源来看,没有食品直接引起的疾病发生,可能是经过一定的传播途径后才致病的。结论 食品安全风险监测数据可以给市场监督提供有效的线索,耐药监测和分子分型技术的普及和应用推动了食源性疾病的溯源和精准化预防,更大限度地实现了疾病预防和保护健康的目标。     

2016—2021年无锡市副溶血性弧菌毒力基因和耐药性分析及分子分型研究

目的 分析2016—2021年无锡市不同来源副溶血性弧菌的毒力基因、耐药性和分子分型结果。方法 采用多重荧光PCR、微量肉汤稀释法、脉冲场凝胶电泳（PFGE）分别对204株分离自无锡市各类监测样本中的副溶血性弧菌进行tlh/tdh/trh毒力基因检测、耐药试验和分子分型。数据比较采用χ²检验。结果 204株菌tlh基因携带率为100%（204/204），tdh基因携带率为82.35%（168/204），trh基因携带率为2.45%（5/204），食品及环境分离株与病患分离株tdh基因携带率差异具有统计学意义（P<0.001）。菌株对头孢唑啉耐药率最高达96.08%（196/204），对3种及以上抗菌药物的耐药率为2.94%（6/204），食品及环境分离株与病患分离株对氨苄西林、四环素、磺胺甲??唑/甲氧苄啶、环丙沙星耐药率差异具统计学意义（P<0.05）；204株副溶血性弧菌经过聚类分析，分为123个PFGE带型，相似度49.1%~100.0%，按85%的相似度聚类可分为18个带型簇。结论 无锡市副溶血性弧菌病患分离株大部分携带tdh基因；菌株对头孢唑啉耐药率最高；PFGE型别呈多态性，优势带型不明显。     

2018—2020年北京市海淀区腹泻患者弯曲菌流行特征及PFGE分型研究

目的 分析和掌握2018-2020年北京市海淀区腹泻患者中弯曲菌流行特征和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型情况。方法 对2018-2020年在3家哨点医院就诊的756例腹泻患者便标本进行弯曲菌的分离和鉴定,对其中25株弯曲菌菌株进行PFGE分型试验。结果 弯曲菌总体检出率为4.37%（33/756）,空肠弯曲菌和结肠弯曲菌检出率分别为3.04%（23/756）和1.32%（10/756）;不同性别、年龄和职业之间的弯曲菌检出率比较,差异均无统计学意义（P>0.05）;48.48%（16/33）的弯曲菌感染患者出现了发热,弯曲菌患者大便性状以水样便为主。弯曲菌检出主要集中在5~7月,除不明食品外,可疑暴露食品占比最高的为肉与肉制品。17株空肠弯曲菌聚类分析得到16种带型,8株结肠弯曲菌聚类分析得到7种带型。结论 海淀区弯曲菌污染状况不容乐观,本研究填补了北京市海淀区腹泻患者弯曲菌感染状况数据的空白,为海淀区食源性疾病的预防和控制提供了参考依据。     

温州市食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌分布及分子分型研究

目的 了解温州市食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的分子分型及分布特征。方法 4 ℃增菌后用选择性培养基对食品中的小肠结肠炎耶尔森氏菌进行分离鉴定,分析阳性菌株的生物型、血清型、毒力基因型、耐药性和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子型别。结果 采集6类食品,共676份样品,其中68份样品检出69株小肠结肠炎耶尔森氏菌,检出率为10.1%（68/676）。调理肉制品检出率最高（20.5%,9/44）,其次为速冻食品（17.2%,11/64）。95.7%（66/69）的分离株为生物1A型,生物血清型以1A/O∶5（29.0%）为主,其次为1A/O∶8（14.5%）;88.4%（61/69）的菌株仅携带ystB基因,检出1株4/O∶3型菌株携带毒力基因ail、ystA、yadA、virF。分离株对14种抗菌药物的敏感率达到94%以上。32株血清已分型菌株,分为29种PFGE带型。结论 温州市食品中存在一定程度的小肠结肠炎耶尔森氏菌污染,且检出致病性小肠结肠炎耶尔森菌,菌株耐药率处于较低水平,分子分型提示菌株呈高度遗传多态性。     

一起金黄色葡萄球菌食物中毒事件的病原检测和溯源分析

目的 对上海市浦东新区一起食物中毒事件进行病原检测和溯源分析,为此类事件的处置和判定提供依据。方法 对病例和从业人员肛拭子以及留样食品样品进行病原分离和鉴定;对分离株进行肠毒素检测、药物敏感性试验、脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)分子分型和溯源。结果 从9份病例肛拭子、1份从业人员肛拭子及3份留样食品样品中分离到13株金黄色葡萄球菌。10株人源分离株产A型和E型肠毒素,3株食源分离株产A型、D型和E型肠毒素。13株分离株均对青霉素耐药,PFGE条带相似度为100%,MLST分型均为ST6型。结论 本起事件是由金黄色葡萄球菌污染引起的食物中毒事件,需要进一步加强对食品加工企业、食堂等的宣传教育和管理,防止类似事件的发生。