黑蒜提取物对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症因子的影响

目的:以黑蒜提取物为研究对象,探讨其对脂多糖(LPS)刺激RAW264.7细胞的体外抗炎作用及其机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度的黑蒜提取物对RAW264.7细胞活性的影响;采用Griess法检测黑蒜提取物对LPS刺激RAW264.7细胞的一氧化氮(NO)释放量;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中PGE2、IL-1β及IL-6的分泌量;采用反转录PCR(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)检测COX-2、i NOS m RNA及蛋白的表达。结果:黑蒜提取物能明显抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞NO、PGE2、IL-1β和IL-6的分泌,不同程度从转录和翻译水平抑制COX-2和i NOS的表达。结论:初步证实了黑蒜具有抗炎作用,其作用与在转录水平和翻译水平上抑制i NOS和COX-2有关。     

紫甘蓝总花色苷提取物抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞的炎症反应

探讨紫甘蓝总花色苷提取物对脂多糖(LPS,1μg/mL)诱导RAW264.7细胞炎症反应的影响。以不同质量浓度(1μg/mL、10μg/mL、50μg/mL)的紫甘蓝总花色苷提取物处理RAW264.7细胞后,试剂盒法分别检测一氧化氮(NO)和前列腺素E2(PGE_2)的分泌水平。酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和IL-8分泌水平。实时定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测细胞中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶-2(COX-2)、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的m RNA表达水平。结果显示,紫甘蓝总花色苷提取物能有效下调iNOS与COX-2的m RNA表达,抑制NO和PGE_2的释放。特别地,高浓度的紫甘蓝总花色苷提取物(50μg/mL)能显著地抑制LPS所诱发的iNOS(65.80%)与COX-2(48.28%)的m RNA表达,降低NO(58.81%)和PGE_2(46.26%)的释放水平。同时,紫甘蓝总花色苷提取物还能显著下调TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的m RNA表达水平,并抑制TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的分泌。结果表明,紫甘蓝总花色苷提取物具有较强的抗炎活性,能够抑制LPS诱导的RAW264.7细胞所发生的炎症反应。     

纳豆菌糖肽对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用

为考察纳豆菌糖肽(BNGP)对正常状态及脂多糖(LPS)激活状态巨噬细胞的免疫调节作用,本文用不同浓度的BNGP单独处理或LPS和不同浓度的BNGP共同处理RAW264.7巨噬细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖作用,中性红吞噬试验检测吞噬能力,Griess试剂检测细胞培养上清液中NO含量,酶联免疫分析法(ELISA)检测细胞培养上清液中细胞因子(IL-1β、TNF-α)、促炎介质(PGE2)含量,Western Blot检测COX-2和i NOS蛋白表达水平。试验结果表明:BNGP在62.5~500μg/m L浓度范围内能提高正常状态的RAW264.7巨噬细胞的代谢活力,增加NO、IL-1β、TNF-α、PGE2的分泌量,提高COX-2和i NOS的表达量,高浓度(125μg/m L)能增强巨噬细胞的吞噬能力;当细胞处于LPS激活状态时,BNGP在62.5~500μg/m L浓度范围内能抑制IL-1β、TNF-α、PGE2的分泌,浓度为500μg/m L时可抑制NO的产生及i NOS的表达,高浓度(125μg/m L)则能下调COX-2的表达。     

高核苷酸酵母水解物对脂多糖诱导RAW264.7细胞免疫调节的影响

为探讨高核苷酸酵母水解物对RAW264.7小鼠巨噬细胞免疫活性调节及其相关作用机制,采用脂多糖(1μg/mL)刺激RAW264.7细胞来建立体外细胞炎症模型,以不同质量浓度的高核苷酸酵母水解物干预来明确其抗炎效果。ELISA法检测细胞培养上清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的含量,RT-PCR法检测相关mRNA表达水平,Western blot法检测细胞iNOS及胞核内核转录因子NF-κBp65蛋白水平。结果表明:高核苷酸酵母水解物作用RAW264.7细胞的安全范围≤150μg/mL。与LPS模型组相比,质量浓度60～150μg/mL的高核苷酸酵母水解物能显著增强RAW264.7吞噬能力,高核苷酸酵母水解物(60～150μg/mL)能有效抑制脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW264.7细胞释放NO、TNF-α、IL-1β和IL-6炎症因子及相关mRNA表达,降低iNOS及NF-κB蛋白水平。研究结果证实了高核苷酸酵母水解物对LPS刺激RAW264.7细胞炎症的保护作用,作用机制与NF-κB通路有关,为食疗干预慢性病提供一定的理论依据。     

铁观音茶提取物对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用及机制

研究铁观音茶提取物对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用及机制。用脂多糖作用于RAW264.7细胞,建立炎症模型,并用吲哚美辛和不同浓度铁观音提取物处理,检测NO和IL-6的分泌情况,qPCR检测一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶2(COX-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素6(IL-6)mRNA相对表达,Western Blot检测炎症相关蛋白激酶(IKKβ),核转录因子κB抑制因子(IκB)、核转录因子κB p65(NF κB p65)及其磷酸化产物的相对表达。结果显示,铁观音茶提取物能显著抑制炎症介质NO分泌和IL-6蛋白表达量(p<0.05),抑制炎症相关基因iNOS、COX-2、TNF-α和MCP-1等表达,并极显著抑制NF-κB信号通路相关蛋白IKKβ、IkB和p65的磷酸化(p<0.01)。以上结果表明,铁观音茶提取物可明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应,其机制可能与抑制NF-κB信号通路激活有关。     

野生蒙古口蘑多糖通过STAT3和HIF-1α通路对LPS诱导的巨噬细胞发挥抗炎调节作用

研究蒙古口蘑多糖提取物对脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7细胞)炎症保护作用的机理。用不同预量质量浓度的蒙古口蘑多糖处理RAW264.7细胞,通过CCK-8法检测细胞活性;Griess法测定NO的产生量;酶联免疫吸附测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素1β(IL-1β);实时定量检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、诱导型一氧化氮和酶(iNOS)、核因子κB(NF-κB)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)和环氧化酶2(COX-2)的mRNA表达量;免疫印迹检测HIF-1α、NF-κB、STAT3和COX-2蛋白质的表达量。结果表明,蒙古口蘑多糖提取物作用RAW264.7细胞的最大剂量为100μg/mL;与LPS模型组相比,蒙古口蘑多糖提取物质量浓度0.01、0.1、1、10μg/mL均能有效抑制NO(抑制率分别是38.21%、64.17%、58.16%和79.42%)、TNF-α(抑制率分别为27.91%、36.31%、36.14%、45.09%)和IL-1β(抑制率分别为47.75%、58.47%、60.21%、64.55%)的产生;在质量浓度为10μg/mL的蒙古口蘑多糖提取物作用下,除NF-κB外,HIF-1α、STAT3、COX-2和iNOS的mRNA的表达量均降低;免疫印迹的结果也显示,除NF-κB外,HIF-1α、NF-κB、STAT3及COX-2的蛋白质的表达量均有不同程度的降低。蒙古口蘑多糖提取物对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞具有保护作用,其抗炎的机制主要通过JAK-STAT3及HIF-1α信号通路,而不主要通过NF-κB信号通路发挥作用。     

大蒜素对脂多糖诱导腹腔巨噬细胞炎症反应的抑制作用及机制

目的:探讨大蒜素对脂多糖(LPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应的抑制作用及机制。方法:建立LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应细胞模型,并用地塞米松和不同浓度大蒜素处理,MTT法检测细胞活力,中性红吞噬实验检测吞噬能力,Griess法检测一氧化氮(NO)及ELISA法检测COX-2酶活性和IL-6的分泌,qPCR检测环氧合酶2(COX-2)、一氧化氮合酶(iNOS)和IL-6的mRNA表达水平,Western Blot检测COX-2、iNOS和IL-6的蛋白表达以及核转录因子NF-κB p65及其磷酸化产物的相对表达。结果:大蒜素浓度在40~160 μg/mL范围内对腹腔巨噬细胞均无细胞毒性;与LPS组比较,大蒜素处理组能促进腹腔巨噬细胞的吞噬能力,能显著(P<0.05)抑制炎症因子COX-2酶活性、NO和IL-6的分泌,能显著(P<0.05)抑制基因COX-2、iNOS和IL-6 mRNA和蛋白的相对表达,并极显著(P<0.01)抑制NF-κB p65信号通路的磷酸化。结论:大蒜素能显著抑制LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞的炎症反应,其机制可能与抑制NF-κB信号通路激活有关。     

巴氏蘑菇多糖对巨噬细胞RAW264.7免疫活性的影响

探讨不同浓度巴氏蘑菇多糖(ABPS)对巨噬细胞RAW264.7免疫活性的影响。以ABPS作用巨噬细胞RAW264.7 12,24 h和36 h,采用MTT法检测巨噬细胞的增殖。以ABPS及脂多糖(LPS)作用巨噬细胞RAW264.7 24 h,分别收集细胞培养上清和细胞,提取全细胞蛋白,检测iNOS含量。细胞培养上清用来检测NO生成量。结果表明:ABPS对巨噬细胞RAW264.7作用12,24 h和36 h后,与空白对照组相比,一定浓度的ABPS均可促进巨噬细胞RAW264.7的增殖,差异极显著(P0.01)。不同浓度的ABPS和LPS作用巨噬细胞RAW264.7 24 h后,除ABPS质量浓度为250μg/m L时,iNOS生成量与阴性对照组无显著性差异外,其他浓度下iNOS及NO生成量均极显著高于阴性对照组(P0.01)。LPS作用后iNOS和NO的生成量极显著高于ABPS组(P0.01),其中ABPS质量浓度为1 mg/m L时,NO的生成量显著低于LPS组(P0.05)。在一定浓度范围内,iNOS及NO生成量与ABPS浓度存在剂量效应。当ABPS质量浓度为1 mg/m L时,二者生成量最高。ABPS能够促进巨噬细胞RAW264.7的增殖及其产生iNOS和NO,对其免疫活性起正向调节作用。     

甜叶菊废渣提取物及其主要成分异绿原酸的抗炎作用

目的:研究甜叶菊废渣提取物及其主要成分异绿原酸的抗炎作用。方法:通过建立LPS诱导小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)炎症模型和角叉菜胶致小鼠足部肿胀模型,以一氧化氮(NO)、前列腺素E2(PGE2)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)等为检测指标,检测甜叶菊废渣提取物及其主要成分异绿原酸的体内外抗炎作用。结果:体外RAW264.7细胞炎症模型结果显示,甜叶菊废渣提取物及其主要成分异绿原酸均能抑制RAW264.7细胞产生NO,抗炎效果为异绿原酸C≈甜叶菊废渣提取物异绿原酸A。3种样品对小鼠足肿胀有显著的抑制作用,抑制效果为异绿原酸C异绿原酸A≈甜叶菊废渣提取物。高剂量的甜叶菊废渣提取物及其主要成分异绿原酸能抑制小鼠肝脏NO的生成,甜叶菊废渣提取物和异绿原酸C可显著降低小鼠血清NO和PGE2含量,且异绿原酸A与异绿原酸C能显著提高小鼠SOD活性并降低MDA含量,减轻机体自由基损伤。3种样品对小鼠肝脏PGE2生成无显著影响。结论:甜叶菊废渣提取物中的异绿原酸类物质具有很好的抗炎效果。     

兜唇石斛发酵多肽Asp-Asp-Asp-Tyr和Asp-Tyr- Asp-Asp对LPS诱导RAW264.7细胞的抗炎作用

为了研究兜唇石斛发酵多肽Asp-Asp-Asp-Tyr（DDDY）、Asp-Tyr-Asp-Asp（DYDD）对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞抗炎活性。以合成的兜唇石斛发酵多肽为研究对象,采用噻唑蓝法筛选增殖活性最高的发酵多肽浓度,通过中性红吞噬实验和倒置显微镜观察发酵多肽对细胞的吞噬作用和分化形态变化,使用ELISA试剂盒测定细胞中NO及细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10和肿瘤坏死因子TNF-α的分泌量。结果表明：12.5、25、50和100 μg/mL四组质量浓度的发酵多肽对细胞无毒性并有增殖作用;100 μg/mL的DDDY和DYDD和1 μg/mL的LPS处理可以激活细胞,增强细胞吞噬能力,相对吞噬率为2.05%、1.97%和2.19%;构建LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型,发现两种发酵多肽处理有效抑制细胞分化,使细胞恢复正常形态;抑制细胞NO分泌能力,100 μg/mL DDDY和DYDD处理组的NO分泌能力降低到LPS组的0.41倍和0.49倍;并且对抑炎细胞因子分泌能力的提高和促炎细胞因子的降低有显著效果,均表现出剂量反应关系。由此可知,DDDY和DYDD对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应具有抗炎作用,为后面探究发酵多肽的炎症机制提供理论支持。     

酱香型白酒中吡嗪类物质体外抗炎作用研究

为研究酱香型白酒中吡嗪类物质的体外抗炎活性及其作用机制,采用脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞建立炎症模型,并通过酶联免疫吸附试验（ELISA）测定细胞上清液中一氧化氮（NO）、白细胞介素-6（IL-6）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量,进而检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、环氧化酶-2（COX-2）、血红素氧合酶-1（HO-1）、白细胞介素-1（IL-1）、IL-6、TNF-α的信使核糖核酸（mRNA）的表达及对花生四烯酸代谢通路中与生成前列腺素E2（PGE2）有关的关键酶的影响。结果表明,2,3,5-三甲基吡嗪（BQ-5）可抑制细胞上清液中NO上升,抑制磷脂酶A2（PLA2）及COX-2活性,下调LPS诱导的iNOS、COX-2、IL-1、IL-6及TNF-α的mRNA的表达。由此可见,酱香型白酒中含有的吡嗪类物质具有一定的抗炎活性,其中BQ-5可减少炎症介质（IL-1、IL-6、TNF-α）的表达,抑制iNOS基因的表达从而抑制NO的产生,抑制花生四烯酸代谢途径中PGE2合成的关键酶而发挥抗炎作用。     

Anti-inflammatory activity of Chrysanthemum zawadskii var. latilobum leaf extract through haem oxygenase-1 induction

Chrysanthemum zawadskii var. latilobum (CZ) has been widely used as a tea in Korea. In this study, we investigated the involvement of anti-inflammatory haem oxygenase-1 (HO-1) in the inhibitory activity of a CZ leaf extracts on nitric oxide (NO) production and inducible nitric oxide synthase (iNOS) expression in lipopolysaccharide (LPS)-stimulated RAW264.7 cells. At the highest concentration of CZ leaf extract (50 μg/mL), NO production was 10% of that in LPS-stimulated macrophages, whereas iNOS protein expression was 5% of that in LPS-stimulated macrophages. CZ leaf extract also inhibited iNOS mRNA expression in a concentration-dependant manner, and at 50 μg/mL, iNOS mRNA expression was approximately 15% of that in LPS-stimulated cells. The CZ leaf extract induced HO-1 expression in a dose-dependent manner, and blocking HO-1 activity abolished the anti-inflammatory effect of CZ leaf extract. These results suggest that CZ leaf extract has a potent anti-inflammatory activity in RAW264.7 cells through the induction of HO-1.     

Anti-inflammatory activity of ethanolic extract of Sargassum sagamianum in RAW 264.7 cells

Aim of the study is to evaluate the antiinflammatory effects of ethanolic extract of the marine brown alga Sargassum sagamianum collected from Yeonhwari coast of Korea. Ethanolic extract of S. sagamianum (SA-E extract) inhibited expression of nitric oxide (NO) and cytokines (IL-6, IL-1β, and TNF-α) as well as inducible nitric oxide synthase (iNOS) and cyclooxygenase (COX)-2 in lipopolysaccharide (LPS)-induced RAW 264.7 cells without affecting cell viability. In addition, the expression of nuclear factor (NF)-κB p65 was suppressed by SA-E extract. Furthermore, the rate of formation of edema in the mouse ear was reduced by 46% at the highest dose tested (250 mg/kg) compared to that in the control. This study suggests that SA-E extract exerts potent inhibitory effects on LPS-induced expression of inflammatory mediators such as NO, iNOS, COX-2, and cytokines in macrophages through suppression of the NF-κB p65 pathway. SA-E extract might have potential clinical applications as an anti-inflammatory agent.     

蓝莓多酚对巨噬细胞中iNOS、COX-2基因表达的影响

RAW264.7巨噬细胞被脂多糖预刺激后,添加从蓝莓中分离制备的不同质量浓度的可萃取多酚（extractablepolyphenols,EPP）和不可萃取多酚（non-extractable polyphenols,NEPP）,培养不同的时间,研究不同质量浓度及培养时间对诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）、环氧合酶（cyclooxygenase-2,COX-2）基因相对表达量的影响。结果表明：从蓝莓中分离的EPP和NEPP均能抑制iNOS、COX-2基因表达,在12 h培养时间内,2 种多酚的抑制效果较好,且EPP的抑制效果明显好于NEPP。这证明蓝莓中的NEPP同EPP一样,可通过抑制iNOS、COX-2 mRNA的表达表现出明显的抗炎活性。     

Suppression of LPS-induced inflammatory activities by Rosmarinus officinalis L.

Rosemary (Rosmarinus officinalis L.) has been used in folk medicine to treat headaches, epilepsy, poor circulation, and many other ailments. It was found that rosemary could act as a stimulant and mild analgesic and could reduce inflammation. However, the mechanisms underlying the anti-inflammatory effects of rosemary need more study to be established. Therefore, in this study, the effects of rosemary on the activation of nuclear factor kappa beta (NF-kB) and mitogen-activated protein kinases (MAPKs), the expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS) and cyclooxygenase-2 (COX-2), and the production of nitric oxide (NO), prostaglandin E₂ (PGE₂), and cytokine in lipopolysaccharide (LPS)-stimulated RAW 264.7 cells were investigated. A methanol extract of rosemary and its hexane fraction reduced NO generation with an IC₅₀ of 2.75 and 2.83 μg/ml, respectively. Also, the methanol extract and the hexane fraction inhibited LPS-induced MAPKs and NF-kB activation associated with the inhibition of iNOS or COX-2 expression. LPS-induced production of PGE₂ and tumour necrosis factor-alpha (TNF-α) were blocked by rosemary. Rosemary extract and its hexane fraction are important for the prevention of phosphorylation of MAPKs, thereby blocking NF-kB activation, which in turn leads to decreased expression of iNOS and COX-2, thus preventing inflammation.     

毛蕊花糖对巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用的研究

目的：明确毛蕊花糖对巨噬细胞RAW264.7免疫功能的调节作用。方法：分别以质量浓度25、50、100、200、400μg/mL的毛蕊花糖对RAW264.7巨噬细胞进行培养,以10μg/mL的脂多糖(LPS)为阳性对照组、不加任何样品的培养基为空白对照组。通过噻唑蓝(MTT)实验、吞噬中性红实验、NO释放量测定及酶联免疫吸附法测定细胞因子(IL-6、IL-1β、IFN-α、IFN-γ)的分泌量,评价毛蕊花糖的免疫调节作用。结果：质量浓度为25～400μg/mL的毛蕊花糖对巨噬细胞RAW264.7作用24h后,可显著提高巨噬细胞的增殖活性、吞噬活性、NO释放量以及细胞因子的分泌水平,并且毛蕊花糖溶液质量浓度为200μg/mL时效果最好。结论：毛蕊花糖对小鼠腹腔巨噬细胞系RAW264.7具有免疫调节活性,是一种良好的免疫增强剂。     

海南无刺蜂蜂蜜中多酚类物质成分分析及其抗氧化、抗炎活性评价

以海南无刺蜂蜂蜜及其多酚类提取物为研究对象,分别测定分析无刺蜂蜂蜜的理化成分和多酚物质,研究其抗氧化和抗炎活性。通过液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱分析多酚类成分,并采用福林-酚法和硝酸铝比色法测定多酚类提取物总酚酸和总黄酮含量。采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、2,2’-联氮-双-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐自由基（2,2’-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate) radical,ABTS＋·）清除实验和铁离子还原力实验评价多酚类提取物的体外抗氧化活性,并采用细菌脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导的RAW 264.7细胞体外炎症模型,探究多酚类提取物的抗炎活性。结果显示,无刺蜂蜂蜜水分质量分数为（26.3±0.1）%,pH 3.7±0.2,蛋白质含量为（628.2±9.0）mg/kg,淀粉酶值为（19.6±0.2）mL/（g·h）,总糖质量分数为（46.7±6.0）%,包括果糖（21.0±3.7）%、葡萄糖（24.9±2.2）%、蔗糖（0.8±0.1）%;多酚类提取物的总酚酸和总黄酮含量分别为（96.6±0.4）μg CAE/g和（16.1±0.3）μg QE/g;多酚类提取物的DPPH自由基和ABTS＋?清除能力IC50值分别为（435.1±0.4）、（423.0±0.3）μg/mL,铁离子还原力为（0.6±0.02）μmol Trolox/g;在体外抗炎实验中,多酚类提取物能显著抑制由LPS诱导的RAW 264.7细胞NO的释放,并显著抑制促炎症基因iNOS、IL-1β、IL-6和MCP-1的表达,显著增强抗氧化基因HO-1的表达,并呈剂量相关性。综上所述,海南无刺蜂蜂蜜营养成分丰富,富含酚酸和黄酮类物质,且具有很强的抗氧化和抗炎能力,具有良好的开发利用价值。