甲状腺素T3对四氧嘧啶诱导糖尿病小鼠胰腺的保护作用

目的：研究甲状腺素T3对四氧嘧啶（alloxan,ALX）诱导糖尿病小鼠胰腺损伤的预防和保护作用。方法：24 只雄性昆明小鼠随机分成4 组,分别给予一次性腹腔注射生理盐水、ALX、ALX和甲状腺素T3、甲状腺素T3,在注射后1、4、6、12、24 h各时间点测定小鼠血液活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平,并在注射后28 d内定期测定小鼠血糖水平变化。28 d后,处死小鼠,取出胰腺进行形态学和生物化学指标分析：检测甲状腺素T3对小鼠胰腺超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、过氧化氢酶（catalase,CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活力以及还原型谷胱甘肽（glutathione,GSH）和氧化型谷胱甘肽（oxidized glutathione,GSSG）含量的影响,分析甲状腺素T3对胰腺细胞抗氧化酶相关基因Nrf2、SOD、GSH-Px、CAT,细胞凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2表达的影响。结果：经ALX诱导的小鼠血糖和血液ROS水平极显著升高（P＜0.01）,血液胰岛素水平极显著下降（P＜0.01）,血液和胰腺抗氧化酶的活力均极显著下降（P＜0.01）。此外,抗氧化酶相关基因以及细胞凋亡相关基因表达水平均出现了极显著变化（P＜0.01）。注射甲状腺素T3能够改善由ALX引起的小鼠血糖水平上升和胰岛素分泌不足,显著或极显著地缓解抗氧化酶活力下降及抗氧化相关基因表达下调（P＜0.05或P＜0.01）,极显著抑制Caspase-3、Caspase-9、Bax等促凋亡基因表达的升高（P＜0.01）,促进抗凋亡基因Bcl-2的表达。结论：甲状腺素T3能够改善ALX诱导的糖尿病小鼠机体氧化还原状态,调节胰腺细胞凋亡相关基因的表达水平,保护胰腺组织,避免胰腺出现β细胞凋亡的情况,从而维持和保护胰腺调节血糖水平的功能。     

巴氏灭活嗜黏蛋白阿克曼氏菌对ox-LDL诱导的HAEC细胞损伤的保护作用及机制初探

目的:本研究以巴氏灭活的嗜黏蛋白阿克曼氏菌（pasteurized Akkermansia muciniphila,PAKK）为研究对象,探究其对氧化低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein,ox-LDL）诱导的人主动脉内皮细胞（human aortic endothelial cells,HAEC）损伤的保护作用。方法:首先利用MTT法评价PAKK对细胞活性的影响并确定合适的剂量。建立ox-LDL诱导的细胞损伤模型,并通过测定细胞乳酸脱氢酶、活性氧等评价PAKK对细胞损伤的保护作用,最后通过测定抗氧化酶活力以及Nrf2抗氧化通路相关基因及蛋白表达等,探讨PAKK改善HAEC细胞氧化损伤的可能机制。结果:菌数为105和106 CFU/mL的PAKK不影响HAEC细胞的活性;能显著降低ox-LDL诱导HAEC细胞的乳酸脱氢酶释放率;显著降低细胞内的活性氧水平,提高超氧化物歧化酶、过氧化氢酶的活力,以及细胞的总抗氧化能力;显著上调细胞内转录因子核因子-E2相关因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2）、血红素氧合酶-1（hemeoxygenase-1, HO-1）、谷胱甘肽巯基转移酶（glutathione S-transferase,GST）以及NADPH醌氧化还原酶1 （NADPH quinine oxidoreductase-1,NQO1）的mRNA表达量;显著上调Nrf2、HO-1、NQO1蛋白的表达。结论:本研究表明巴氏灭活的嗜黏蛋白阿克曼氏菌可缓解ox-LDL对HAEC细胞造成的损伤,且其保护作用可能是通过调节Nrf2信号通路从而增强抗氧化相关基因表达。本研究为开发基于嗜黏蛋白阿克曼氏菌的可用于预防动脉粥样硬化的益生菌相关产品奠定理论基础。     

芦荟多糖对D-半乳糖致HepG2细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨芦荟多糖对HepG2细胞氧化损伤的保护作用,分析其体外抗氧化能力。方法:以HepG2细胞为研究对象,建立D-半乳糖诱导细胞氧化损伤模型,以不同浓度芦荟多糖进行预保护处理。采用细胞增殖与毒性检测试剂盒测定HepG2细胞存活率,生物化学法检测细胞超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力,酶联免疫吸附法测定细胞总抗氧化能力及丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量,实时荧光定量PCR检测细胞Keap1、Nrf2、NQO1和HO-1基因表达水平。结果:与D-半乳糖模型组比较,25、50、100 μg/mL的芦荟多糖预保护处理能不同程度地提高HepG2细胞存活率;芦荟多糖能显著增强细胞中抗氧化酶的活性,降低细胞MDA的生成量（P<0.05）,且作用效果与芦荟多糖浓度成正比;细胞中Keap1基因表达显著降低,Nrf2、NQO1、HO-1 mRNA表达显著提高（P<0.05）。结论:芦荟多糖可以减轻HepG2细胞的氧化应激损伤,激活Nrf2表达并抑制其泛素化降解,提高下游NQO1、HO-1的转录水平,增强细胞抗氧化酶系活性并调控细胞氧化还原系统,以达到减轻细胞氧化损伤程度、提高细胞抗氧化应激损伤的效果。     

葡萄籽原花青素提取物对砷诱导人肝细胞HL-7702损伤的保护作用及其机制

目的：研究葡萄籽原花青素提取物（grape seed proanthocyanidin extract,GSPE）对砷诱导的人肝细胞 HL-7702损伤的保护作用及其机制,为砷中毒的防治和GSPE的抗氧化研究提供理论依据。方法：将人肝细胞HL-7702 分为对照组、砷染毒组（25 μmol/L）、GSPE干预组（5、10、25、50 mg/L）以及GSPE单独干预组（50 mg/L）, 分别处理24 h和48 h后,分别测定天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate transaminase,AST）、丙氨酸氨基转移酶 （alanine aminotransferase,ALT）、谷胱甘肽（glutathione,GSH）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）和丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平以及总抗氧化能力（total antioxidant capacity,T-AOC）变化。噻 唑蓝（3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-yl)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT）法分析细胞生存率,利用实时定量聚 合酶链式反应以及Western blot法检测HL-7702细胞中核因子E2相关因子（nuclear factor erythroid-2 related factor 2, Nrf2）、血红素氧合酶1（heme oxygenase 1,HO-1）、醌氧化还原酶1（quinone oxidoreductase 1,NQO1）和谷 胱甘肽巯基转移酶（glutathione S-transferase,GST）的mRNA以及蛋白表达。结果：MTT实验发现,与对照组比 较,高浓度砷（≥25 μmol/L）染毒组细胞存活率显著降低（P＜0.05）。GSPE干预组（＞10 mg/L）细胞中的ALT 和AST活力、MDA水平显著低于砷染毒组（P＜0.05）,SOD活力、GSH含量以及T-AOC水平显著高于砷染毒组 （P＜0.05）,GSPE干预组HL-7702细胞中Nrf2、HO-1、NQO1、GST的mRNA及蛋白表达增高（P＜0.05）。结 论：GSPE对砷诱导的人肝细胞HL-7702氧化损伤具有拮抗作用,且具有一定的剂量效应关系,其机制可能是通过 激活Nrf2介导的抗氧化信号通路,提高细胞抗氧化能力,从而改善砷引起的肝损伤。     

根皮苷对高脂膳食喂饲仓鼠氧化损伤保护机制的研究

以饲喂高脂膳食的仓鼠为动物模型,研究根皮苷在喂饲高脂膳食仓鼠体内的抗氧化活性。实验动物随机分为对照组和3 个实验组（3、6、9 g/kg根皮苷）,6 周后测定仓鼠血清、心脏、肾脏及肝脏中抗氧化酶超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathion peroxidase,GSH-Px）、过氧化氢酶（catalase,CAT）和总抗氧化力（total antioxidant capacity,T-AOC）的活力、丙二醛（malonaldehyde,MDA）含量及采用荧光定量聚合酶链式反应（real time-polymerase chain reaction,RT-PCR）法检测肝脏中抗氧化相关基因mRNA表达水平。抗氧化酶活力测定结果显示,给予根皮苷后血清、心脏、肾脏及肝脏中SOD、GSH-Px、CAT酶活力均有升高,氧化产物MDA含量显著降低。RT-PCR结果显示,3 个不同剂量根皮苷实验组CuZn-SOD、Mn-SOD、GSH-Px、血红素加氧酶1（heme oxygenase 1,HO-1）、核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2）mRNA表达水平与对照组相比均极显著升高（P＜0.01）;给予6、9 g/kg根皮苷,CAT基因表达水平较对照组极显著升高（P＜0.01）。因此,根皮苷对高脂膳食喂饲仓鼠氧化应激损伤的保护作用可能是通过激活抗氧化基因Nrf2表达,并上调抗氧化基因SOD、GSH-Px、CAT、HO-1 mRNA表达水平,进而增加抗氧化酶的活力实现的。     

虾青素保护视网膜色素上皮细胞免受蓝光发光二极管诱导的氧化应激损伤

目的：探究虾青素对蓝光发光二极管（light-emitting diodes,LED）诱导ARPE-19细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制。方法：采用不同浓度的虾青素预处理细胞1 h后,蓝光LED下光氧化损伤诱导24 h。噻唑蓝法测定细胞活力,乳酸脱氢酶检测法分析细胞毒性,2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针法测定细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）的水平,JC-1荧光探针法测定细胞内线粒体膜电位的变化,利用酶学相关试剂盒测定细胞内源性抗氧化酶活力,实时荧光定量聚合酶链式反应法测定细胞内II相解毒基因的转录表达水平,Western blot法测定细胞内核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2）的核蛋白表达水平。结果：虾青素（5、10 μmol/L和20 μmol/L）预处理以浓度依赖的方式抑制蓝光LED诱导的ARPE-19细胞活力降低,缓解细胞毒性;虾青素预处理能够减少细胞内ROS的产生,稳定线粒体膜电位,提高内源性抗氧化酶活力。此外,虾青素诱导了Nrf2的核转位,增加了抗氧化酶和II相解毒基因的表达,从而保护ARPE-19细胞免受蓝光LED诱导的氧化应激损伤。结论：虾青素通过诱导Nrf2的核转位,促进抗氧化酶和II相解毒基因的表达水平升高从而保护ARPE-19细胞免受蓝光LED诱导的氧化应激损伤。     

薰衣草总黄酮对皮肤光损伤小鼠氧化应激的影响

目的：探究薰衣草总黄酮抗小鼠皮肤光损伤的有效性及氧化应激的相关作用机制，为薰衣草的开发利用提供依据。方法：将84只雌性昆明小鼠随机分为7组，正常组、UVB组、溶剂组、维生素E组（0.013 g/kg）、薰衣草总黄酮低、中、高剂量组（0.25、1.25、2.50 g/kg）。建立小鼠皮肤光损伤模型，观察薰衣草总黄酮对光损伤模型小鼠行为特征、背部皮肤状态的影响；采用苏木素-伊红和维多利亚蓝染色观察其组织病理学改变及小鼠表皮厚度的变化；Western blot法检测小鼠Nrf2信号通路相关蛋白的表达。结果：薰衣草总黄酮能够明显减轻小鼠皮肤外观损伤程度、表皮厚度及皮肤组织的病理学变化，且能显著增强Nrf2、Keap1、HO-1、NQO1、GCLC蛋白的相对表达。结论：薰衣草总黄酮对小鼠皮肤光损伤具有一定的防护作用，其作用机制可能与激活Nrf2信号通路、调控氧化应激反应有关。     

绿原酸抗疲劳功效评价及作用机理研究

探究绿原酸缓解疲劳的作用机制。设置空白组、试验组、对照组，连续灌胃28 d，进行负重游泳试验评价其抗疲劳效果，分别检测相关生化指标、氧化反应指标及核因子E2相关因子（nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2）、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、NADPH醌氧化还原酶-1(NADPH quinone oxidoreductase-1,NQO-1)的蛋白表达，利用分子对接分析与Nrf2的结合情况。绿原酸对延长小鼠负重游泳力竭时间，提升血清葡萄糖、肌糖原、肝糖原水平，降低乳酸、尿素氮、丙二醛含量及增强超氧化物歧化酶、过氧化物酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力有显著作用（P<0.05）。Western blot结果显示绿原酸能够上调胞核Nrf2表达，下调胞浆Nrf2表达，增加HO-1和NQO-1表达。绿原酸与Nrf2蛋白的分子结合能为-3.34 kcal/mol，亲和力较强。绿原酸有助于缓解小鼠运动疲劳，可能与Nrf2信号途径提升抗氧化能力相关。     

菊花多糖对2型糖尿病大鼠的降血糖作用

目的:研究菊花多糖对2型糖尿病(T2DM)大鼠的降血糖作用。方法:利用水提醇沉法对菊花多糖进行提取,高脂高糖饲料饲养大鼠6周后,一次性腹腔注射STZ(30 mg/kg·BW),建立T2DM大鼠模型,试验过程中记录大鼠体重、摄食量、饮水量,每2周测定大鼠空腹血糖值(FBG),试验最后1周进行糖耐量(OGTT)试验,采用Elisa法测定大鼠胰岛素(INS)水平,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。测定大鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)水平,以及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)等水平,采用蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测Nrf2、Keap1、HO-1的表达水平。结果:经菊花多糖治疗后,能够缓解T2DM大鼠体重的下降,减少其摄食量和饮水量,提高T2DM大鼠糖耐量,降低大鼠INS及HOMA-IR。能够显著降低T2DM大鼠TC、TG、LDL-C水平(P<0.05),并显著提高HDL-C水平(P<0.05)。T2DM大鼠SOD、GSH、CAT水平有显著提高(P<0.05),MDA水平显著下降(P<0.05)。经菊花多糖治疗后的T2DM大鼠的Nrf2、Keap1、HO-1蛋白水平均趋于正常组的蛋白水平。结论:菊花多糖能够有效改善T2DM大鼠“三多一少”的症状,降低FBG水平,提高OGTT,改善INS水平及HOMA-IR,改善T2DM大鼠异常脂代谢和氧化应激水平,并通过调控Nrf2/Keap1/HO-1通路相关蛋白起到治疗T2DM的作用。     

葡萄籽原花青素通过Nrf2信号通路拮抗高糖高脂诱导的MIN6细胞铁死亡

目的：铁死亡可能是高糖高脂诱导胰岛β细胞死亡的一种主要形式,本研究探讨葡萄籽原花青素提取物（grape seed procyanidin extract,GSPE）对高糖高脂诱导胰岛β细胞铁死亡的拮抗作用机制。方法：用25 mmol/L葡萄糖和200μmol/L棕榈酸钠干预MIN6细胞建立胰岛β细胞损伤模型,进一步用不同质量浓度10、20、30、40、50、75、100 mg/L的GSPE以及核转录因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)进行干预,用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8 assay,CCK8）检测细胞活性,用试剂盒检测细胞内谷胱甘肽（glutathione,GSH）、丙二醛（malonaldehyde,MDA）含量以及活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平,用Western blot检测Nrf2、血红素氧化酶1(heme oxygenase-1,HO-1)、醌氧化还原酶1(NA...     

沙棘花青素提取物对双氧水诱导的H1299细胞损伤的保护作用及Nrf2/HO-1通路的影响

目的：研究沙棘花青素提取物（The anthocyanidin extract of Hippophae rhamnoides L.,HRAE）对双氧水诱导H1299细胞氧化损伤的保护作用及其机制。方法：利用双氧水诱导H1299细胞氧化损伤模型,采用MTT法检测HRAE对细胞活力的影响,采用荧光探针DCFH-DA检测细胞内活性氧（Reactive oxygen species,ROS）的含量;采用试剂盒分别测定超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）、过氧化氢酶（Catalase,CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathion peroxidase,GSH-Px）及丙二醛（Malondialdehyde,MDA）的含量;采用Western Blot法检测血红素氧合酶-1(Heme oxygenase-1,HO-1)、醌氧化还原酶-1(NAD(P)H quinine oxidoreductase 1,NQO1)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kelch like ECH-associated protein 1,Keap1)和核转录因子E2相关因子（Nu...     

Plant flavonol quercetin and isoflavone biochanin A differentially induce protection against oxidative stress and inflammation in ARPE-19 cells

In this work, differential ability of plant flavonol quercetin and plant isoflavone biochanin A to modulate oxidative stress and inhibit inflammation-related responses was investigated using human retinal pigment epithelial cells (RPE) at gene expression level. Quercetin protected cells from oxidative stress-induced cell death, whereas biochanin A had no statistically significant protective effects. Quercetin reduced the expression of cytokines IL-6 and IL-1?? in cells treated with H₂O₂, and expression levels of Nrf2 and HO-1 were increased by quercetin treatment suggesting protective function against oxidative stress. Our data indicate that quercetin may protect cells by inhibiting the production of pro-inflammatory factors such as IL-6, and by inducing the expression of ROS-catalyzing phase II proteins such as HO-1. Therefore, plant extracts rich in flavonol quercetin may be an interesting resource for functional food products and other foods targeted for reduced risks of age-related macular degeneration.     

Dimerumic acid protects pancreas damage and elevates insulin production in methylglyoxal-treated pancreatic RINm5F cells

The effects of dimerumic acid (DMA) on apoptosis prevention and insulin production in the glucose metabolite methylglyoxal (MG)-treated pancreatic RINm5F cells were evaluated. MG was found to induce apoptotic signal molecules mediated by oxidative stress in RINm5F cells, including caspase-3 and caspas-9, resulting in cell death and decreasing insulin production. In addition, DMA elevated insulin synthesis via up-regulating mammalian homologue of avian MafA/L-Maf (Maf-A) and pancreatic-duodenal homeobox-1 (PDX-1) and inhibited MG-mediated CCAAT/enhancer binding proteins-β (C/EBPβ) expression, which is a negative regulator for insulin production. Nuclear factor-erythroid2-related factor 2 (Nrf2) is essential for antioxidant responsive element (ARE)-mediated induction. Results indicated that nuclear translocation of Nrf2 was promoted by DMA in MG-treated RINm5F cells to increase heme oxygenase-1 (HO-1) and glutamate-cysteine ligase (GCL) expressions. We confirmed that DMA protected PDX-1, Maf-A, and insulin production against MG-induced oxidative stress mediating by Nrf2 in Nrf2-knockdown RINm5F cells. These results suggest that DMA exerts antioxidative ability to attenuate MG-induced pancreatic cell damage and elevates insulin level to improve diabetes.     

姜黄素对过度训练所致大鼠心肌细胞凋亡的保护作用

目的:研究姜黄素缓解过度训练所致的氧化应激,抑制大鼠心肌细胞凋亡的保护作用。方法:60只7周龄SPF级雄性Wistar大鼠经适应性饲养及训练后随机分为对照组(C组,12只)、过度训练组(OM组,24只)、姜黄素+过度训练组(COM组,24只)。C组不进行任何训练,OM组、COM组大鼠进行8周递增负荷游泳训练。训练期间,COM组以200 mg/(kg·d)剂量姜黄素进行灌胃,灌胃体积5 mL/kg,其余两组灌胃等体积0.5%羧甲基纤维素纳。末次训练后24 h,光镜观察心肌组织病理学改变,检测血清睾酮(T)、皮质酮(Cor)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)浓度,以及心肌组织凋亡水平和核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、B淋巴细胞瘤因子-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达,同时测定心肌组织总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)浓度。结果:8周递增负荷游泳训练后,光镜下C组大鼠心肌组织结构正常;OM组出现组织病理学改变;COM组较OM组明显减轻。与C组比较,OM组血清Cor、cTnI、心肌细胞凋亡水平和促凋亡蛋白Bax表达水平及心肌MDA浓度均升高(p<0.01),血清T水平、心肌T-AOC和SOD活性(p<0.01)、心肌HO-1及抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平(p<0.05)降低;心肌Nrf2表达水平无显著变化(p>0.05)。与OM组比较,COM组血清Cor、心肌细胞凋亡水平、Bax表达水平(p<0.01)和血清cTnI水平、心肌MDA浓度(p<0.05)降低,血清T水平、心肌Nrf2和Bcl-2表达水平、心肌T-AOC和SOD活性(p<0.01)、心肌HO-1(p<0.05)升高。组间T/Cor比值变化趋势与T变化相一致,Bcl-2/Bax比值变化趋势与Bcl-2变化相一致。结论:姜黄素通过上调Nrf2、HO-1蛋白表达,有效缓解过度训练引发的氧化应激,从而增加Bcl-2表达,减少Bax表达,抑制大鼠心肌细胞凋亡,保护心脏组织结构和功能正常。