京尼平的分离纯化及高效液相色谱法测定

研究了用β-葡萄糖苷酶水解栀子苷制备京尼平及京尼平的分离纯化方法,同时还建立了京尼平的高效液相色谱检测法。静态吸附实验表明,HPD700对京尼平的吸附率可达96.50%,动态吸附及洗脱实验结果表明,上样流速以1.5BV/h为宜,采用无水乙醇对京尼平的洗脱率最高,达到94.32%。高效液相色谱法对京尼平的分析结果为:京尼平进样量在0.2~2.0μg范围内,峰面积与进样量呈良好的线性关系,京尼平的回归方程为Y=3.81×106X-19261,相关系数R2为0.9994,方法精密度为1.06%,回收率为98.5%~102.2%。结论:本实验制备的京尼平纯度可达98%以上,为制备高端栀子蓝色素创造了条件。     

碱水解栀子苷大孔树脂分离纯化京尼平苷酸

目的:研究NaOH水解栀子苷,大孔树脂分离纯化京尼平苷酸的工艺。方法:用NaOH将栀子苷水解制备京尼平苷酸,并通过高效液相色谱法监测栀子苷的水解过程;比较7种大孔吸附树脂对京尼平苷酸的静态吸附和解析性能,筛选出一种吸附和解析性能较好的树脂,用动态柱层析法对京尼平苷酸进行分离纯化。结果:H103大孔树脂对京尼平苷酸的吸附和解析性能较好,动态吸附上样后用蒸馏水冲洗2 BV,再用30%乙醇洗脱2 BV,洗脱率达到95.2%,洗脱液真空干燥得到灰白色粉末,HPLC检测其纯度达96.1%。结论:采用碱水解栀子苷再用大孔树脂分离纯化京尼平苷酸,该工艺具有步骤少、收率高等优点,为京尼平苷酸的制备提供了一种新途径。     

栀子蓝色素制备及纯化工艺的研究

本文采用纤维素酶水解京尼平甙生成京尼平,京尼平再与氨基酸合成栀子蓝色素,利用超滤技术对其进行分离、纯化.通过一系列的单因素实验和正交实验,探讨了制备及纯化栀子蓝色素的工艺条件.结果表明,最佳工艺条件为以谷氨酸钠作为氨基酸来源,液固比(V/m)=8:1,酶解时间6h,纤维素酶与京尼平甙的质量比1:8,氨基酸与京尼平甙的质量比1:2,反应时间96 h.最佳超滤纯化工艺为超滤膜截至分子量为5000 Da,超滤压力0.5～0.8 MPa,pH 7,超滤温度为室温.经HPLC测定,经本工艺制备的栀子蓝色素色价E590nm1cm(1%)≥192,纯度≥95%.     

两步法生产栀子蓝色素工艺条件的研究

本实验以栀子黄提取后的废液为原料,通过将β-葡萄糖苷酶发酵和酶促反应分开的两步法制得栀子蓝色素。分别考察了温度、时间和氨基酸的添加比例对栀子蓝生成量的影响。最后确定的最佳工艺条件为:以麸皮培养基固态发酵生产β-葡萄糖苷酶,浸提的β-葡萄糖苷酶液在60℃时水解栀子苷,在获得的栀子苷元溶液中添加1%的组氨酸,混和液再在80℃温度下水浴5h可以获得最大量的栀子蓝色素溶液。     

京尼平苷为底物测定β-葡萄糖苷酶活力的方法

研究以京尼平苷为底物氨基酸为显色剂测定β-葡萄糖苷酶活力的方法.β-葡萄糖苷酶水解京尼平苷的温度为50℃,pH为5.0,京尼平苷浓度为0.625mmol/L,水解10min后,立即加入1ml 1mo1/L Na2CO3终止反应,混匀,再加入体积比为1：1的0.2mg/ml的精氨酸溶液,沸水浴显色10min,冷却后于590nm处测光吸收度值.该方法的检测线性范围为0.05～1U/ml,相关系数为0.9998,检测限为0.02U/ml,精密度为1.5%（n=5）,回收率为99.5%～101.1%,该方法准确度高,结果稳定.     

共固定化酶催化栀子苷水解制备栀子蓝色素

采用黑曲霉发酵产β-葡萄糖苷酶,再用戊二醛交联,海藻酸钠包埋法共固定化酶和菌丝,然后将共固定化酶用于水解栀子苷,再与谷氨酸钠反应制备栀子蓝色素。对共固定化条件进行了优化,优化后的条件为:交联剂戊二醛浓度为0.15%,交联温度为20℃,交联时间为2h。同时还对共固定化酶水解栀子苷的条件进行了优化,优化后的水解条件为:水解温度为50℃,水解时间为6h,水解pH为5.0。水解后的转化液与谷氨酸钠反应得到栀子蓝色素溶液,经大孔树脂HPD300吸附洗脱,洗脱液经真空减压浓缩、干燥后得栀子蓝色素粉末,色价E590nm1%为120。共固定化酶水解栀子苷制备栀子蓝色素的工艺与传统方法相比具有成本低、环境友好、易于工业化放大的特点。     

产β-葡萄糖苷酶菌株的筛选及发酵栀子蓝色素的研究

利用京尼平与谷氨酸的显色反应从自然界筛选到一株产β-葡萄糖苷酶的细菌菌株，并将该菌株应用于栀子蓝色素的发酵试验，试验结果表明，该细菌菌株发酵栀子蓝色素的最佳温度为37℃，发酵液pH为6．5，发酵时间为40h。     

响应面优化酶法水解京尼平苷工艺

目的:优化京尼平苷的酶解工艺。方法:以京尼平含量为响应值,在单因素实验基础上,以酶添加量、酶解温度、酶解时间、p H为实验因素,采用响应面法建立数学模型,筛选最佳酶解工艺条件。结果:通过二次回归模型响应面分析,影响京尼平苷酶解的因素按主次顺序排列为:酶添加量酶解温度p H酶解时间;确定京尼平苷酶解最佳工艺条件为酶添加量6.6 m L(约140 U),酶解温度56.5℃,酶解时间150 min,p H4.0,此条件下京尼平含量为4.66 mg/m L,模型方程理论预测值为4.80 mg/m L,两者相对误差小于3%。结论:采用响应面法优化得到了京尼平苷酶解的最佳工艺,该工艺方便可行。     

高色价栀子蓝色素的制备及其稳定性研究

研究20种氨基酸与京尼平的呈色反应及部分反应产物的稳定性.分别将20种氨基酸与京尼平在80℃反应16 h,再用HPD100大孔树脂吸附栀子蓝色素,然后用80%乙醇水溶液洗脱色,洗脱液在50℃进行减压干燥,得到深蓝色粉末,测定其色价,然后研究固体状态的栀子蓝色素的光照稳定性和温度稳定性.20种氨基酸与京尼平反应后生成的栀...     

产水解银杏黄酮苷的β-葡萄糖苷酶菌株的筛选及鉴定

以银杏提取物为唯一碳源,利用栀子苷-谷氨酸钠显色法,从贵州银杏树土壤样品中分离产水解银杏黄酮苷的β-葡萄糖苷酶菌株。采用3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定β-葡萄糖苷酶酶活。得到一株酶活为1.03 U/m L的菌株NY-13,并且该菌株能水解芦丁生成槲皮素。经生理生化特征及16S r RNA分子生物学鉴定,菌株NY-13为解鸟氨酸柔武氏菌(Raoultella ornithinolytica)。     

羊毛织物的京尼平苷酸染色性能

研究了天然环烯醚萜类染料京尼平苷酸在羊毛织物上的染色性能.利用UV-vis分析了整个反应过程,探讨了染色机理,确定了染色的最佳工艺条件,并测试了染色后羊毛织物的色牢度和抗菌性能.其染色机理为京尼平苷酸经酶水解得到的京尼平苷酸苷元与蛋白质纤维中的氨基发生呈色反应,京尼平苷酸苷元对羊毛织物直接染色的效果很好,在pH为7.5...     

大豆异黄酮水解物的制备

利用黑曲霉产酶发酵培养基制备β-葡萄糖苷酶,再利用β-葡萄糖苷酶水解大豆异黄酮粉制备异黄酮苷元。研究结果表明,较优产酶发酵培养基的C/N为6∶4,加水量1.4倍,培养基中不添加诱导物。水解500 mg40%大豆异黄酮粉的最佳条件为:加酶量100 U,水解温度50℃,水解时间1 h。     

热稳定酸性β - 葡萄糖苷酶的分离纯化及其酶学性质

耐酸性黑曲霉菌株Aspergillus niger L.的菌丝体破碎液依次经过乙醇沉淀、离子交换层析和凝胶过滤等步骤处理,获得电泳纯的β-葡萄糖苷酶,SDS-PAGE显示其分子质量为125.7kD。β-葡萄糖苷酶水解对硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷的最适pH值为3.0～4.0,最适温度为70℃,表观米氏常数(Km)值为2.35mmol/L,表观kcat/Km值为2.99×104L/(mol ·s);水解京尼平苷、水杨苷的表观kcat/Km值分别是1.26×104、1.37×104L/(mol ·s);水解活性受Mn2+的显著激活和Fe2+、Zn2+、Cu2+等离子的微弱抑制。该酶活性在pH2.0～8.3保持稳定;酶在65℃时保温60min,残余酶活达到了85%,是一种热稳定酸性β-葡萄糖苷酶。     

栀子紫色素制备及其稳定性研究

利用纤维素酶水解京尼平苷后与氨基酸反应制备栀子紫色素。研究了栀子紫色素的光稳定性、热稳定性、pH稳定性和耐氧化还原性,并就食品中常见的金属离子和食品添加剂对栀子紫色素稳定性的影响进行探讨。结果表明:光照对栀子紫色素影响较小,在光照中,栀子紫色素呈微弱褪色趋势;栀子紫色素在80℃内比较稳定,随着时间的延长色素吸光度值呈微弱下降趋势,而在100℃中有较大褪色趋势;pH对栀子紫色素影响较大,在pH为6.0时吸光度值最高,因此栀子紫色素最好保存于弱酸性环境中;其抗氧化性较差,但对还原剂的耐受性良好;栀子紫色素不受大多数金属离子的影响,而在Zn2+、Fe2+、Fe3+与Cu2+环境中容易形成沉淀。大部分食品添加剂对栀子紫色素稳定性影响不大。栀子紫色素具有良好的理化性质,为栀子紫色素的生产应用提供了参考数据。     

水解毛桃果酒中花色素苷的β-葡萄糖苷酶酶学特性

花色素苷广泛存在于植物细胞中,是植物花和果实的主要呈色物质。毛桃果酒酿造过程中添加β-葡萄糖苷酶处理后,花色素苷被分解,提升了果酒品质和风味。选取果酒中花色素苷含量最大的矢车菊素-3-O-葡萄糖苷作为样品,对β-葡萄糖苷酶水解花色素苷的特性进行了研究。结果显示:β-葡萄糖苷酶水解花色素苷的最佳条件为35℃、pH4.0、最佳添加酶量为30 U/mL,Na~+及Fe~(3+)能促进反应进行,适当乙醇浓度对酶活有促进作用,β-葡萄糖苷酶水解花色素苷的米氏常数Km和Vmax分别为1.175 mg/L和0.221 mg/h·L。     

利用双水相萃取栀子黄废液中的栀子苷酶法生产栀子蓝色素的研究

研究有机溶剂/ 磷酸氢二钾双水相体系对栀子黄废液中栀子苷的萃取条件,并将萃取后的栀子苷用于栀子蓝色素的生产。根据分相后上下相中栀子苷的分配系数及两相体积比,选择合适的双水相体系,并改变溶剂与废液的体积比、磷酸氢二钾加入量、废液pH 值以及萃取温度等参数,研究萃取栀子苷的最佳条件。实验结果表明,乙醇/ 磷酸氢二钾为合适的萃取体系。当双水相体系总量为10ml 时,乙醇与栀子黄废液的体积比为6:4,加入磷酸氢二钾1.0g,体系分相完全后栀子苷分配系数(K)为4.56,两相体积比(R)为6.38,栀子黄废液pH 值及萃取温度在正常条件下对K 值及R 值影响不大。放大实验表明,以乙醇/ 磷酸氢二钾体系萃取栀子黄废液中的栀子苷,所得栀子苷纯度可达62.12%,收率可达96.32%。萃取后的栀子苷经β- 葡萄糖苷酶水解精氨酸显色后得到栀子蓝色素,色价E1% (590nm)65.92。     

京尼平交联制备枯草杆菌碱性蛋白酶聚集体

本研究利用新型交联剂京尼平制备了枯草杆菌碱性蛋白酶交联聚集体(BAP-CLEAs)。以酶活回收率为指标,确定了BAP-CLEAs制备的最佳条件为:交联剂质量浓度0.50%,交联温度35℃,交联时间12 h,此时BAP-CLEAs的酶活回收率为55.04%。采用扫描电镜及红外光谱对BAP-CLEAs进行表征,结果证明枯草杆菌碱性蛋白酶在京尼平的作用下成功交联。与游离酶相比,BAP-CLEAs的最适p H值向碱性方向偏移,由9.4变为10.3,在较宽的p H范围和温度范围内保持较高的酶活。另外,在2%浓度的酪蛋白底物中重复使用5次后,BAP-CLEAs还能保持86.42%的酶活性。以上催化特性的结果表明,枯草杆菌碱性蛋白酶在京尼平的作用下可成功交联形成酶聚集体,且该交联酶聚集体具有比游离酶更优越的p H稳定性、温度稳定性和重复使用稳定性,有良好的工业应用前景。     

京尼平改性明胶在制革中的潜在应用

京尼平是一种从栀子果实中提取出来的环烯醚萜类化合物.由于其细胞毒性较低,京尼平常用来替代戊二醛和甲醛,作为交联剂使用.本文对京尼平改性明胶产品作为皮革填充剂使用进行了研究.首先优选了京尼平改性明胶的最佳反应条件.然后,按比例进行放大生产,制备出京尼平改性的明胶产品,并用其对蓝湿革的不同部位进行处理,再分别进行复鞣、染色和加脂,得到RCF坯革,然后测定成革的物理力学性能,并进行主观评价.结果表明,京尼平改性明胶产品处理后的坯革,物理力学性能与对照样相差不大,但感官性能(手感、丰满性、粒面褶纹和颜色)比对照样好得多.对蓝湿革和RCF坯革的湿热稳定性研究结果表明,RCF坯革的收缩温度高一些.扫描电子显微镜检测结果表明,皮革纤维明显地被京尼平改性明胶产品所包覆,这种现象在转谷氨酰胺酶改性明胶的研究中也曾发现.因此.京尼平改性明胶在制革过程中具有应用潜力,可以为传统的鞣后加工处理提供一种环境友好的替代产品.     

酶水解对大豆异黄酮粗提物中苷元含量的影响

采用β-葡萄糖苷酶水解的方法将大豆异黄酮糖苷转化为苷元,以染料木素和大豆苷元含量为指标,通过单因素试验对水解过程中的不同影响因素进行了考察。以染料木素含量为指标,运用正交试验优化了β-葡萄糖苷酶水解大豆异黄酮的工艺条件为反应温度40℃、水解时间1.5h、水解介质pH4.5、水解底物浓度10mg/mL,在此条件下,水解得到的大豆异黄酮苷元中染料木素的含量可达到22.91%。     

栀子豉汤固体发酵菌质的制备及主要成分含量变化

采用双向固体发酵技术,通过发酵菌种和发酵时间的考察,以栀子苷转化率为评价指标筛选栀子豉最佳发酵工艺。采用高效液相色谱（HPLC）法测定栀子苷、京尼平和氨基酸的含量,采用紫外分光光度法测定栀子豉水溶液的吸光度值。结果表明,以栀子、青蒿、桑叶水煎液浸泡黑豆作为发酵基质,接种枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）和伞枝犁头霉（Fusarium umbellatum）复合菌（1∶1）于28 ℃发酵168 h制备栀子豉,此优化发酵条件下,栀子苷完全转化且生成的栀子蓝色价最高（OD590 nm值为0.575）,精氨酸、丝氨酸和天冬氨酸含量分别下降了94.9%、71.6%和52.0%,而脯氨酸、组氨酸和谷氨酸含量分别升高了3.4倍、1.5倍和1.5倍。发酵法制备栀子豉实现了主要成分的体外生物转化及药效提高,可为栀子豉汤新剂型及食疗产品开发提供依据。