南美白对虾响应急冷与无水暴露双重胁迫的生理变化特征

为揭示南美白对虾响应急冷与无水暴露双重胁迫的生理调节机制，优化南美白对虾无水保活运输管理和提升运输存活质量，本实验模拟南美白对虾无水保活流通环境，探究急冷（acute cold exposure,AC）与无水暴露（waterless duration,WD）双重胁迫（AC+WD）对南美白对虾机体代谢途径及肝胰腺组织结构的影响。结果表明，在胁迫进程中，对虾血清乳酸（lactic acid,LD）浓度、肝胰腺和肌肉中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活力上升，血清LDH、己糖激酶（hexokinase,HK）、琥珀酸脱氢酶（succinatedehydrogenase,SDH）、磷酸果糖激酶（phosphofructokinase,PFK）、丙酮酸激酶（pyruvate kinase,PK）、Na+/K+-ATPase活力均先升高后降低，而肌肉三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）和肝胰腺糖原（glycogen,Gn）含量降低。复苏后血清葡萄糖（glucose,Glu）和LD浓度分别为（23.92±0.59）mmol/L和（6.27...     

蛋白溶出与变性结合消减虾仁致敏性

以南美白对虾虾仁为原料,采用高压下蛋白溶出与变性相结合的方法消减虾仁致敏性。在室温下采用不 同压力（0.1～900.0 MPa）处理虾仁,确定适合虾仁蛋白溶出和变性的压力条件,并以虾仁蛋白致敏性的消减效果 为指标确定虾仁的处理条件。结果显示,在200.0 MPa下保压处理30 min,有利于虾仁蛋白的溶出;当压力大于等 于500.0 MPa时,可引起虾仁蛋白的变性;当压力在600.0 MPa时,虾仁蛋白的致敏性最小。将虾仁在200.0 MPa下 处理30 min后,再用600.0 MPa处理30 min,虾仁的致敏性消减率大于80%。因此,高压处理可消减虾仁的致敏性, 采用适合蛋白溶出与变性相结合的压力处理,能够提高虾仁致敏性消减效果。     

急冷与无水双重胁迫下南美白对虾存活变化及防御系统响应规律

为探明无水保活过程中急冷与无水双重胁迫诱导南美白对虾死亡的氧化与免疫损伤机制,模拟实际运输,分析双重胁迫下南美白对虾（Litopenaeus vannamei）肝胰腺氧化应激损伤和免疫系统相关指标变化。结果显示,与正常对照组相比,联合胁迫9 h后对虾存活率下降,活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平在急冷胁迫后显著增加（P＜0.05）,但在随后的无水胁迫环境中有所下降。丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量在急冷及无水胁迫下均显著高于正常对照组（P＜0.05）,且在联合胁迫3 h时达到最高。超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、过氧化氢酶（catalase,CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（glutathion peroxidase,GSH-Px）活力均在急冷胁迫后随着无水暴露时间延长而增加,在9 h分别达到2.82、2.12 U/mg和5.26 U/mg,且复苏2 h后基本恢复到正常对照组水平。在双重胁迫过程中,随着无水暴露时间的延长,非特异性免疫酶中的酚氧化酶（phenol oxidase,PO）、过氧化物酶（peroxidase,POD）活力呈降低趋势;酸性磷酸酶（acid phosphatase,ACP）和碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,AKP）活力逐渐升高,在9 h时活力达到最大值,复苏后可基本恢复到正常对照组水平。组织病理结果显示双重胁迫9 h时肝小管有轻微解体,内壁细胞部分脱落,提示双重胁迫对南美白对虾防御系统造成了一定的损伤,机体通过提升自身抗氧化酶和非特异性免疫酶活力应答环境胁迫,当胁迫超出机体耐受范围时,造成肝胰腺脏器组织不可逆损伤进而引起对虾死亡。     

螺旋藻蛋白提取方法比较研究

采用超声波法、高压均质法和反复冻融法对螺旋藻细胞进行破碎,确定破碎条件和螺旋藻蛋白溶出率。结果表明:在各自的最佳提取条件下,超声波法得到的蛋白溶出率为71.51%,高压均质法得到的藻胆蛋白溶出率为73.87%,反复冻融法得到的蛋白溶出率为72.03%。     

乌贼墨多肽诱导人前列腺癌DU-145细胞凋亡的机制研究

本文探讨了乌贼墨多肽(SHP)诱导DU-145细胞凋亡机制。采用CCK-8法检测SHP对DU-145细胞增殖的影响;采用HE染色和AO/EB荧光染色观察DU-145细胞的形态学的变化;采用流式细胞术检测细胞早期凋亡率;并通过Western Blotting检测细胞中p53、Bcl-2、Bax、Caspase-3、VEGF的蛋白表达变化。结果表明,SHP对DU-145细胞的增殖具有明显的抑制作用且呈现剂量和时间依赖性;SHP作用后的DU-145细胞出现凋亡的形态学特征;流式细胞术结果显示,随着SHP浓度和作用时间的增加,DU-145细胞的早期凋亡率从12.25%增加到34.20%;Western Blotting结果显示,当SHP作用24 h后,VEGF、Bcl-2蛋白表达量降低,p53、Bax、Caspase-3蛋白表达量增加。综上可知,SHP能够诱导DU-145细胞凋亡,其机制有可能是通过激活抑癌基因p53,下调Bcl-2/Bax比例;下调VEGF,激活凋亡蛋白酶Caspase-3,诱发凋亡级联反应来实现的。     

沙蚕活性蛋白酶诱导人肺癌SPC-A-1细胞凋亡的机制研究

本文探讨了沙蚕活性蛋白酶(Nereis active protease,NAP)诱导SPC-A-1细胞凋亡机制。采用MTT法检测NAP对SPC-A-1细胞的抑制作用,倒置显微镜及AO/EB染色观察SPC-A-1细胞的形态学的变化,采用流式细胞术检测细胞早期凋亡率和细胞膜电位的变化;并通过Western Blotting检测细胞中凋亡相关蛋白的表达变化。NAP对SPC-A-1细胞活性具有明显的抑制作用且呈现剂量和时间的依赖性;NAP作用后细胞出现凋亡的形态学特征;经流式细胞术检测结果显示,随着NAP作用浓度的增加,SPC-A-1细胞的早期凋亡率从13.50%提高到22.98%,且线粒体膜电位下降所占的百分率从12.95%提高到25.28%。Western Blotting结果显示,50μg/mL NAP作用24h后,Bax/Bcl-2的比率相对对照组明显增加了6.05倍;Cyt-C、Cleaved-Caspase 9、Cleaved-Caspase 3、Cleaved-PARP等含量显著上调,相对表达量分别达到对照组的2.32、3.07、3.68、1.36倍。NAP诱导SPC-A-1细胞凋亡的作用机理有可能是通过下调Bcl-2蛋白的表达、上调Bax蛋白的表达,进而诱导线粒体膜电位的下降,促使Cyt-C的转移以及激发Caspase家族发生级联反应最终导致SPC-A-1细胞的凋亡。     

南美白对虾冷藏过程中丝氨酸蛋白酶介导黑变的结构基础与酶学机制

为探明南美白对虾冷藏期间黑变进程的结构基础和酶学机制,采用组织化学和透射电镜对黑变敏感组织肝胰腺细胞的完整性进行跟踪观察,结果表明:随着冷藏的进行,肝胰腺细胞结构呈渐进性破裂,至第5天时细胞器完全弥散。低场核磁共振影像结果表明:随着细胞解体组织自由水含量的迅速增高,Ca2+荧光探针和丝氨酸蛋白酶免疫组织化学结果表明:伴随结构解体和水分迁移,Ca2+与丝氨酸蛋白酶也呈规律性迁移,引起ProPO激活,触发和加速黑变进程。     

玉米醇溶蛋白提取及其对酒精发酵的影响

用磷酸盐缓冲液在40℃浸泡玉米36h后，进行脱胚芽处理，用胚乳提取醇溶蛋白。实验确定了提取玉米醇溶蛋白的最佳工艺条件为：添加液料比为6H，的75％乙醇溶液，在60℃浸提2h后，离心分离，醇溶蛋白回收率为67-37％。分别用浸泡过的整粒玉米和胚乳及未经浸泡的胚乳提取玉米醇溶蛋白，结果表明，浸泡有利于醇溶蛋白的提取。将提取醇溶蛋白后的玉米胚乳残渣进行酒精发酵，淀粉出酒率为53．40％，略高于对照试验的53．04％。     

呕吐毒素对HK2细胞增殖及诱导凋亡蛋白表达的调节作用

该研究探究了呕吐毒素抑制HK2细胞的增殖与诱导凋亡蛋白表达作用。不同浓度的呕吐毒素作用于HK2细胞后,采用MTT法检测呕吐毒素对细胞增殖的抑制作用,通过荧光显微镜观察细胞形态学的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化,采用Western bloting法检测凋亡蛋白Bax、bcl-2、NF-KB、Caspase-2、3、6、8、9的表达水平。研究结果表明,呕吐毒素可显著抑制HK2细胞的增殖,具有明显的量效关系,15、30、40、60和80 μmol/L的呕吐毒素对HK2细胞的抑制率分别为61.82%、53.64%、42.43%、38.66%和36.54%;30 μmol/L的呕吐毒素处理HK2细胞0、12、24、48、72和96 h后,细胞的存活率分别为99.84%、80.51%、60.25%、52.22%、62.50%和71.34%。15、40和80 μmol/L的呕吐毒素处理细胞24 h后,细胞的凋亡率分别为2.30%、30.20%和53.50%。Western bloting结果显示呕吐毒素可上调Bax、Caspase-2、3、6、8、9蛋白表达,抑制了bcl-2和NF-KB的蛋白表达。结果表明,呕吐毒素对HK2细胞的增殖有明显的抑制作用,使得细胞发生凋亡,同时对凋亡蛋白的表达具有一定的调节作用。     

桑叶浸出液抑制MDA-MB-231细胞增殖和抑制Survivin蛋白表达

为了研究桑叶浸出液对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和对凋亡抑制蛋白Survivin的作用。本实验采用体外培养MDA-MB-231细胞,倒置显微镜观察桑叶浸出液作用后细胞形态变化;CCK-8法检测桑叶浸出液对MDA-MB-231细胞增殖的影响;流式细胞仪分析桑叶浸出液对MDA-MB-231细胞凋亡及周期的影响;Western Blot印迹法检测桑叶浸出液对凋亡抑制蛋白Survivin表达的影响。结果表明桑叶浸出液会引起MDA-MB-231生长形态的变化,抑制细胞增殖,增加细胞凋亡数量,且在桑叶浸出液作用后MDA-MB-231细胞的G0/G1期细胞明显高于正常组(p<0.05),同时桑叶浸出液降低凋亡抑制蛋白Survivin的表达,且表达量随着桑叶浸出液浓度的升高而降低。研究表明,桑叶浸出液能够抑制MDA-MB-231细胞的增殖,促进细胞凋亡及导致G0/G1期阻滞,同时能够降低凋亡抑制蛋白Survivin的表达。     

凡纳滨对虾主要过敏原鉴定及酶法消减技术的研究

以凡纳滨对虾为研究对象,用免疫印迹法检测其主要过敏原蛋白组分;用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶对凡纳滨对虾水溶性蛋白水解,消减过敏原。并且通过间接酶联免疫吸附实验和致敏豚鼠全身免疫实验对过敏原消减情况进行检测,确定酶法消减过敏原条件。结果表明,凡纳滨对虾的主要过敏原为99、33、19kD 以及14kD 的蛋白质组分。胰蛋白酶最佳水解条件为：pH8.0,酶与底物比1:100(m/m,下同),45℃,底物质量浓度3g/100mL,水解时间3h;木瓜蛋白酶最佳水解条件为pH6.5,酶与底物比1:100,60℃,底物质量浓度3g/100mL,水解时间3h;菠萝蛋白酶最佳水解条件：pH7.5,酶与底物比1:100,55℃,底物质量浓度5g/100mL,水解时间3h。并且胰蛋白酶水解产物和木瓜蛋白酶水解产物对致敏豚鼠的全身免疫实验安全性很好。     

南美白对虾即食虾仁加工工艺和贮藏研究

为了获得贮藏期长的即食南美白对虾制品,对其关键加工工艺进行研究,并对其贮藏过程中质构、蛋白质、游离氨基酸、虾青素含量、TBA值以及微观结构的变化进行测定。经蒸汽蒸制加工,腌渍调味,115℃高压蒸汽灭菌处理的虾仁,40℃条件可贮藏30d以上。贮藏过程中虾仁质构下降明显,其质构变化与蛋白质的降解、肌纤维的结构破坏有关,脂肪的氧化引起虾青素的降解和虾仁色泽的变化。     

凡纳滨对虾过敏原精氨酸激酶的质谱鉴定及其免疫交叉反应研究

目的：鉴定凡纳滨对虾分子质量40 kD过敏原,并分析其在有壳水产食物中的免疫交叉反应。方法：运用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪（matrix assisted laser desorption ionization/time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF/TOF-MS）鉴定凡纳滨对虾40 kD过敏原组分;使用软件BLAST、Clustal X2、MEGA 5.0分析该蛋白氨基酸序列的种间同源性;制备抗凡纳滨对虾过敏原精氨酸激酶的多克隆抗体,并与17 种常见有壳水生动物粗提液进行Western blotting,以分析该过敏原的免疫交叉反应。结果：凡纳滨对虾40 kD过敏原为精氨酸激酶（arginine kinase,AK）;其氨基酸序列同源性分析显示AK在虾类（96%～100%）、蟹类（91%～93%）、贝类（49%～52%）、蟑螂（83%）中具有很高的同源性;Western blotting结果显示抗AK多抗与17 种不同虾类、蟹类、贝类的AK均能发生反应。结论：精氨酸激酶在甲壳类动物、软体动物、甚至昆虫中具有高度保守性,且能引起强免疫交叉反应,是有壳水生动物中的一种泛过敏原。     

免疫印迹法对四种海虾主要过敏原的鉴定

以凡纳滨对虾、中国明对虾、刀额新对虾以及虾蛄4 种海虾为研究对象,对这4 种海虾过敏原蛋白组分进行研究。首先利用聚丙烯酰胺凝胶电泳对4 种海虾过敏原组分进行分析,然后经免疫印迹鉴定其主要过敏原。结果显示：凡纳滨对虾的主要过敏原为99、33、19、14kD 的蛋白质组分;中国明对虾的主要过敏原为39、33、28kD 的蛋白质组分;刀额新对虾的主要过敏原为33kD 和24kD 的蛋白质组分;虾蛄的主要过敏原为56kD 和48kD的蛋白组分。     

凡纳滨对虾组织蛋白酶L性质分析及其对肌肉蛋白的降解

本研究从凡纳滨对虾肝胰腺中纯化获得一种组织蛋白酶L,其分子质量约为31 k D,肽质量指纹图谱分析得到8个片段共112个氨基酸残基,与报道的凡纳滨对虾组织蛋白酶L序列完全一致。该酶的最适温度和最适pH值分别为35℃和5.5,且在0~40℃以及pH 5.5~6.5之间酶活力稳定。该酶仅对底物Z-Phe-Arg-MCA特异分解。半胱氨酸蛋白酶抑制剂E-64和Leupeptin对其有明显的抑制作用,而金属蛋白酶抑制剂乙二胺四乙酸和乙二醇二乙醚二胺四乙酸对其有少量的激活作用。扫描电子显微镜观察结果显示,随着低温贮藏时间的延长,对虾肌肉纤维的断裂程度不断增加。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示,组织蛋白酶L可使肌肉蛋白发生分解,推测其可能参与对虾低温贮藏过程中肌肉的降解。     

海藻糖类抗冻保水剂对冻藏南美白对虾(Litopenaeus vannamei)品质的影响

以冻藏南美白对虾(Litopenaeus vannamei)虾仁为研究对象,0.5%和1.0%(w/v)海藻糖、海藻酸钠、海藻酸钠寡糖溶液作为抗冻保水剂,蒸馏水、0.5%和1.0%(w/v)焦磷酸钠分别为阴性对照组和阳性对照组,于-18 ℃下贮藏6周,通过对冻藏南美白对虾仁的解冻损失、颜色、肌原纤维蛋白含量、Ca2+-ATPase活性以及微观结构等指标进行分析,评价海藻糖类等对冻藏虾仁品质的影响。结果表明,与对照组相比,海藻糖、海藻酸钠寡糖、焦磷酸钠处理组虾仁的解冻损失显著降低(p<0.05)。海藻糖类提高了南美白对虾冻藏期间颜色的稳定性。海藻糖和海藻酸钠寡糖处理有效地保持了冻藏虾仁中肌原纤维蛋白含量和Ca2+-ATP酶活性,其中肌原纤维含量分别为104.2、103.2 mg/g,Ca2+-ATP酶活性分别为0.141、0.142 μmol Pi/mg·min。染色实验和电泳实验结果表明,海藻糖类对冻藏后肌肉蛋白质的降解和肌肉组织结构的损伤具有减缓作用,虾仁肌肉肌纤维结构完整,肌肉间无较大空隙形成,较好地保持了冻藏虾仁组织完整性,副肌球蛋白和肌动蛋白条带的强度都没有明显的降低。研究表明:在南美白对虾的冻藏过程中,海藻糖和海藻酸钠寡糖抗冻剂起到了良好的抗冻效果,能够更好地保证冻藏虾仁的质量和品质,得到一种冻藏水产品复合磷酸盐保水剂的较好替代品。     

三种饵料微藻在凡纳滨对虾育苗中的饲喂效果评价

以对虾幼体存活率和水质状况为考察指标,研究了牟氏角毛藻、眼点拟微球藻和钝顶螺旋藻在凡纳滨对虾N~M1期幼体饲喂中的效果评价。结果表明,(1)牟氏角毛藻按2.5×105 cells/mL浓度每天投喂三次,幼体存活率最高,达到82.79%,幼体变态正常、活力强;(2)单独投喂或与牟氏角毛藻混合投喂的结果都证实,眼点拟微球藻均会导致幼体变态拖期、挂脏等现象,不适合作为凡纳滨对虾幼体的饵料;(3)钝顶螺旋藻可以部分替代牟氏角毛藻,混合投喂时最高幼体存活率88.23%,显著高于对照组,虾苗变态发育正常,活力好,但水质受一定影响;(4)投喂牟氏角毛藻和眼点拟微球藻能明显降低氨氮、亚硝氮和菌落数等指标,净化水质。说明在凡纳滨对虾育苗中,合理使用三种饵料微藻能提高幼体存活率和净化水质。     

膨化制粒和环模制粒工艺对饲料制粒加工质量和凡纳滨对虾生长性能的影响

本次研究比较了膨化制粒和环模制粒工艺对饲料制粒加工质量和凡纳滨对虾生长性能、饲料利用、肝胰腺和肠道组织学的影响。设计鱼粉质量分数为20%的基础饲料，分别采用环模制粒和膨化制粒的方式，生产硬颗粒饲料和沉性膨化颗粒饲料，在检测饲料制粒加工质量指标后，饲喂初重为7.72 g的凡纳滨对虾6周。和硬颗粒饲料相比，沉性膨化颗粒饲料的容重、耐久性指数和淀粉糊化度显著增加（P<0.05），硬度和含粉率显著降低（P<0.05）， 但二者在溶失率上没有显著差异（P>0.05）。经过6周养殖后，沉性膨化颗粒饲料组的饲料系数显著低于硬颗粒饲料组（P<0.05），虾体增重率在数值上高于硬颗粒饲料组（P>0.05）；二者在摄食量、成活率、含肉率、全虾组成和肝胰腺消化酶、糖代谢相关酶活性方面均无显著差异（P>0.05）；在肝胰腺和肠道组织学方面，摄食沉性膨化颗粒饲料和硬颗粒饲料的凡纳滨对虾均表现为组织结构清晰完整，未见明显的损伤。综上，沉性膨化颗粒饲料较硬颗粒饲料具有更优的加工性能和更高的饲料利用效率（更低的饲料系数），二者对于凡纳滨对虾肝胰腺消化酶、糖代谢相关酶活性和肝胰腺、肠道组织学方面具有基本一致的影响。     

冰衣对冷冻南美白对虾贮藏品质的影响

通过测定－20 ℃冷冻条件下无冰衣组、15%镀冰衣组和25%镀冰衣组南美白对虾的感官评分、解冻损 失、蒸煮损失、挥发性盐基氮（total volatile basic nitrogen,TVB-N）含量、盐溶蛋白含量及肌苷酸（inosine-5’- monophosphate,IMP）关联物各比值,研究镀冰衣处理对冻藏南美白对虾品质的影响。通过分析IMP关联物各比值 （K、Ki、G、P、H及Fr）与主要鲜度指标间的相关性,探讨更适宜作为－20 ℃冷冻条件下镀冰衣南美白对虾品质评 价的指标。结果表明：随着贮藏时间的延长,3 组南美白对虾的解冻损失、蒸煮损失和TVB-N含量均呈明显上升趋势, 盐溶蛋白含量显著下降,25%镀冰衣组南美白对虾的品质始终优于无冰衣组和15%镀冰衣组;根据各指标间的Pearson相 关性分析,K、Ki、G、P、H及Fr值中,K值更适合用于评价该贮藏条件下南美白对虾的整体质量;无冰衣组、15%镀冰 衣组和25%镀冰衣组分别在贮藏第12、16、16周感官不可接受,镀冰衣能够有效延长冻藏南美白对虾的贮藏期。