双抗夹心ELISA法定量检测食品中大肠杆菌O157：H7初探

以鸡抗O157:H7特异性脂多糖(LPS)抗体(IgY)为捕获抗体,酶标抗体(HRP-IgY)为检测抗体建立双抗夹心ELISA法检测食品中大肠杆菌0157:H7的方法,确定了抗原浓度对数与OD450值的高度线性相关性,根据检测OD450值可从拟合回归曲线确定样品中的含菌量,含菌量≥104CFU/ml的食品样品可直接用双抗夹心法进行检测,含菌量≤104CFU/ml的食品样品可增菌14h后检测.     

食品中大肠杆菌O157:H7的两种检测方法研究

研究食品中大肠杆菌O157∶H7的两种检测方法,PCR法引物针对特异性粘附毒素基因(eaeA)扩增检测,双抗夹心ELISA采用鸡抗O157∶H7特异性脂多糖(LPS)抗体(IgY)检测,结果显示两种方法对纯培养物的检测灵敏度都在103～104cfu/mL之间,特异性能满足食品检测需求;PCR法的敏感度较ELISA法高,且较省时。经以牛奶为参考的食品模拟样品(37℃增菌14h)验证两种检测方法的最低检出限均为2.5cfu/25mL样品。     

食品中大肠杆菌O157:H7的两种检测方法研究

研究食品中大肠杆菌O157∶H7的两种检测方法,PCR法引物针对特异性粘附毒素基因(eaeA)扩增检测,双抗夹心ELISA采用鸡抗O157∶H7特异性脂多糖(LPS)抗体(IgY)检测,结果显示两种方法对纯培养物的检测灵敏度都在103～104cfu/mL之间,特异性能满足食品检测需求;PCR法的敏感度较ELISA法高,且较省时。经以牛奶为参考的食品模拟样品(37℃增菌14h)验证两种检测方法的最低检出限均为2.5cfu/25mL样品。      

食源性致病菌大肠杆菌O157:H7检测方法的研究进展

食源性致病菌是引起食物中毒的重要病原微生物,严重威胁人类健康,对食源性致病菌进行快速、准确的鉴定检测,是预防和控制致病菌的有效方法,而大肠杆菌O157:H7因其感染剂量低,致病性强,引起公众的广泛关注。本文综述了目前用于检测食源性致病菌大肠杆菌O157:H7的主要方法,包括细菌分离法,免疫学检测方法,分子生物学检测方法,并简单介绍了这些方法的优缺点,以期为检测大肠杆菌O157:H7时提供参考。     

食品中大肠杆菌O157:H7控制新技术研究进展

论述了杀菌剂清洗技术、高压脉冲电场技术、高密度CO2技术、超高压技术和辐照技术等新技术的原理及其在控制食品中大肠杆菌O157:H7应用方面的研究进展。展望了未来该研究领域的发展趋势。     

PCR 法检测食品中大肠杆菌O157:H7

对大肠杆菌O157:H7 型菌株的各毒力基因及基因组中的特异序列进行了设计和比对,确定292bp 的检测引物。常规定性PCR 和实时定量PCR 证明该引物特异性强。模拟样品的前增菌实验结果表明本方法可以在原样品活菌浓度约2.0CFU/mL 时通过16h 增菌后检测出来,总的检测时间可以控制在24h 内。本实验建立的PCR 方法可用于食品中大肠杆菌O157:H7 的快速测定。     

大肠杆菌O157:H7及其在食品中的检测

大肠杆菌O15 7:H7是一种感染剂量小 (10个活菌 ) ,危害性很大的致病菌。近年 ,在世界各地屡次发生大肠杆菌O15 7:H7的感染事件。因此 ,在食品卫生和安全领域 ,对大肠杆菌O15 7:H7致病机理、生物学特性、检测方法、预防和控制已成为研究热点。作者对大肠杆菌O15 7:H7的致病性、生化特性、检测方法及其在食品中出现的情况作了系统的介绍     

利用光纤倏逝波生物传感器检测食品中 大肠杆菌O157:H7

目的 建立一种应用光纤倏逝波生物传感器快速检测食品中大肠杆菌O157:H7的方法。方法 对光纤用大肠杆菌O157:H7抗体包被制备检测探针,用纳米量子点对抗体进行偶联制备检测抗体,并确定其检测的灵敏度和特异性,同时通过对人工污染样品的检测确认该方法检测实际样本的可行性。结果 建立的光纤倏逝波生物传感器检测大肠杆菌O157:H7的灵敏度达到50 CFU/mL,并具有较强的特异性。结论 利用光纤倏逝波生物传感器检测食品中污染的大肠杆菌O157:H7方法快速、准确,具有较强应用价值。     

原料乳中大肠杆菌O157:H7的快速检测

建立了一种快速检测原料乳中大肠杆菌O157:H7的PCR技术.该方法利用过滤富集菌体后的PCR技术来检测原料乳中大肠杆菌O157:H7,先对人工污染大肠杆菌O157:H7的原料乳进行离心脱脂,然后添加EDTA-2Na获得澄清乳液,最后通过0.45 μm微膜过滤收集菌体,整个过程只需6 h左右即可完成.检测灵敏度高达10-mL-1.这种方法在传统检测方法的基础上做了有效改进,使得原料乳中的大肠杆菌O157:H7的检测能够快速、准确、灵敏的进行.     

食品中出血性大肠杆菌O157:H7检验方法的建立

Ｏ157:Ｈ7大肠杆菌是出血性大肠埃希氏菌 (Ｅｎｔｅｒｏ -ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ.ｃｏｌｉＥＨＥＣ)的一个常见的血清型。自1982年美国首次发生由Ｏ157:Ｈ7大肠杆菌引起的食物中毒小型爆发以来 ,欧美各国、日本相继有本菌所致疫情爆发的报道。已知Ｏ157:Ｈ7是一种以食物传播为主要传播途径的人畜共患疾病的病原菌 ,生食受污染的食品或饮用水可引发感染 ,有时可导致大规模爆发流行。我国同样存在Ｏ157:Ｈ7引发食物中毒的隐患 ,建立统一的食品中Ｏ157:Ｈ7检验方法迫在眉睫。为此 ,我们参考日本厚生省及ＵＳＤＡ检验方法 ,[2 ,5] 建立了适用于…     

双抗体夹心ELISA法检测食品中出血性大肠杆菌O15

以灭活重组基因工程菌EHEC O157Δler/stx（p BR322::stx1/2B::eae）免疫新西兰大耳白兔获得的兔多抗作为捕获抗体,以针对出血性大肠杆菌O157主要毒力因子的特异性单抗2H9为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA方法并绘制标准曲线用于食品中出血性大肠杆菌O157的定量分析。标准曲线线性方程为y=0.3479x-0.4121,R²=0.9862。该ELISA的重复性变异系数小于5%,稳定性良好。应用该方法测得出血性大肠杆菌O157∶H7 EDL933的最小检出限为10³cfu/m L。食品样品接种实验表明:牛肉或猪肉样品接种量为0.08 cfu/g,增菌8 h后可以检出阳性反应;蔬菜和牛奶样品接种量为0.12 cfu/g（m L）,增菌10 h后可以检出阳性反应。      

酶联免疫吸附试验在食品检测中的应用

本文简要介绍了ELISA 的基本原理和类型,详述了国内外使用ELISA 方法在食品过敏源、农药残留、致病微生物、转基因等方面检测的最新研究进展,列出了部分目前市售用于食品检测的试剂盒,并对该检测技术的发展趋势及其在食品安全检测中的应用前景进行了展望。     

检测食品中志贺氏菌的双抗夹心ELISA方法的研究

研究获得纯化抗志贺氏菌IgY,经检测10mg/mL纯化抗志贺氏菌IgY的效价为1∶320;以志贺氏菌免疫新西兰大耳白兔,获得抗志贺氏菌的兔抗体,效价可达1∶12800。以此两种抗体建立双抗夹心ELISA,正交试验分析表明,兔抗体包被条件为4℃过夜,采用不封闭,抗原与包被抗体结合条件为37℃、1h;加入检测抗体(IgY)的浓度为0.25mg/mL,其结合条件为37℃、1h。该方法对纯培养菌液检出限为105cfu/mL,具有良好的敏感性;10株其他菌株的检测结果表明,该方法只与志贺氏菌发生特异性反应,不与其他菌株的抗原发生交叉反应。染菌的食品样品经选择性增菌后进行双抗夹心ELISA检测,含0.1～1cfu/mL志贺氏菌的样品在增菌13h后可检出阳性反应,含1～10cfu/mL志贺氏菌的样品在增菌11h后可检出阳性反应。     

Comparison of Decontamination Efficacy of Antimicrobial Treatments for Beef Trimmings against Escherichia coli O157:H7 and 6 Non-O157 Shiga Toxin-Producing E. coli Serogroups

Abstract: The decontamination efficacy of 6 chemical treatments for beef trimmings were evaluated against Escherichia coli O157:H7 and 6 non‐O157 Shiga toxin‐producing E. coli (nSTEC) serogroups. Rifampicin‐resistant 4‐strain mixtures of E. coli O157:H7 and nSTEC serogroups O26, O45, O103, O111, O121, and O145 were separately inoculated (3 to 4 log CFU/cm²) onto trimmings (10 × 5 × 1 cm; approximately 100 g) fabricated from beef chuck rolls, and were immersed for 30 s in solutions of acidified sodium chlorite (0.1%, pH 2.5), peroxyacetic acid (0.02%, pH 3.8), sodium metasilicate (4%, pH 12.5), Bromitize^® Plus (0.0225% active bromine, pH 6.6), or AFTEC 3000 (pH 1.2), or for 5 s in SYNTRx 3300 (pH 1.0). Each antimicrobial was tested independently together with an untreated control. Results showed that all tested decontamination treatments were similarly effective against the 6 nSTEC serogroups as they were against E. coli O157:H7. Irrespective of pathogen inoculum, treatment of beef trimmings with acidified sodium chlorite, peroxyacetic acid, or sodium metasilicate effectively (P < 0.05) reduced initial pathogen counts (3.4 to 3.9 log CFU/cm²) by 0.7 to 1.0, 0.6 to 1.0, and 1.3 to 1.5 log CFU/cm², respectively. Reductions of pathogen counts (3.1 to 3.2 log CFU/cm²) by Bromitize Plus, AFTEC 3000, and SYNTRx 3300 were 0.1 to 0.4 log CFU/cm², depending on treatment. Findings of this study should be useful to regulatory authorities and the meat industry as they consider nSTEC contamination in beef trimmings. Practical Applications: Findings of this study should be useful to: (i) meat processors as they design and conduct studies to validate the efficacy of antimicrobial treatments to control pathogen contamination on fresh beef products; and (ii) regulatory agencies as they consider approaches for better control of the studied pathogens.     

特异性抗肠出血性大肠杆菌O157:H7内毒素鸡卵黄抗体的制备

目的:比较研究LPS和O-SP的免疫原性,制备出特异性抗内毒素(LPS)鸡卵黄免疫球蛋白(eggyolkimmunoglobulin,IgY),用于对E.coliO157:H7的免疫预防及检测。方法:分别用灭活E.coliO157:H7菌体、不同浓度内毒素(LPS)及O-特异性多糖链(O-SP)与不完全弗氏佐剂充分乳化后作抗原免疫临产蛋母鸡,以水稀释法从卵黄中提取抗体,阴离子交换色谱法实现对抗体的纯化,间接ELISA及双向免疫扩散检测抗体产生效价与活性。结果与结论:所制内毒素(LPS)和O-SP均有较好的免疫原性,刺激鸡体后可产生高效价抗体,灭活菌体、600μg/mlLPS、1200μg/mlLPS、2000μg/mlLPS、O-SP抗体产生效价最高可分别达1:32000、1:28000、1:32000、1:12000、1:40000。结合离子交换色谱,用0.185mol/L的离子强度可实现一步洗脱纯化抗体,制备出高纯度、高活性、特异性强的鸡卵黄免疫球蛋白IgY,为大肠杆菌O157:H7的感染防治提供了可靠的保证,在此实验基础之上可进一步探讨应用特异性IgY对大肠杆菌O157:H7的检测。     

克百威残留检测直接竞争ELISA试剂盒的研究

在多克隆抗体的基础上研制了一种适用于检测水样、土样和蔬菜样品中克百威残留的直接竞争酶联免疫吸附测定法(FLISA)试剂盒,并与高效液相色谱(HPLC)分析方法相比较和验证将克百成添加到水样、土样和蔬菜样品中,用所制备的试剂盒和HPLC分析方法检测样品中的克百威残留,并对试剂盒的灵敏度、特异性、精密度、准确度和有效期进行测定结果表明:研制的试剂盒最低检测限为0.01mg╱L,线性检测范围为0.01～10mg/L,供试样品检测结果的批内、批间、整体变异系数均低于8％,回收率均高于90％,符合农药残留分析要求。试剂盒在4℃或-20℃下至少可保存6个月用ELISA试剂盒检测杀虫剂克百威残留较常规的仪器分析具有操作简便、灵敏度高、特异性强、快速等特点,并能批量地分析样品,值得在安全食品的生产与环境污染监测中推广应用。     

辣椒制品大肠杆菌O157及志贺氏菌污染调查与风险评估

掌握辣椒制品大肠杆菌O157及志贺氏菌的污染状况,为开展辣椒制品安全风险评估,企业及产品分类管理提供必要的依据。参照GB/T4789.36—2008全自动酶联荧光免疫分析仪筛选法对辣椒制品大肠杆菌O157进行快速筛选试验,大肠杆菌0157检验结果为阳性时,参照GB/T4789.36—2008常规培养法进行大肠杆菌O157分离鉴定确认。参照GB/T4789.5—2003对辣椒制品志贺氏菌进行检验。可疑菌株用API20E生化鉴定试剂盒及VITEK2compact30全自动细菌鉴定分析系统进行生化鉴定,综合生化试验和血清学的试验结果报告。共抽890份样品、包括4类辣椒制品、涉及18个省(区、市)的194家生产企业,进行了大肠杆菌O157和志贺氏菌检验,均未检出目标菌,表明大肠杆菌O157和志贺氏菌在辣椒制品中污染风险较小。