时间分辨荧光免疫层析试纸条在油料饼粕黄曲霉毒素B_1检测中的应用

采用黄曲霉毒素时间分辨荧光免疫层析试纸条及配套的时间分辨荧光速测仪,对油料饼粕中黄曲霉毒素B1的快速检测进行了应用研究。该时间分辨荧光免疫分析技术是基于时间分辨荧光免疫层析试纸条和载有Eu（Ⅲ）标记特异性单克隆抗体的样品瓶建立的检测技术。时间分辨荧光速测仪可内置标准曲线,直接输出检测结果。对6种油料饼粕做黄曲霉毒素B1添加回收率实验,回收率在70%~120%之间,批间、批内变异系数〈15%。在实际样品的检测中,时间分辨荧光免疫层析试纸条检测技术与液相色谱-串联质谱法相比,检测结果相对误差〈15%。时间分辨荧光免疫层析试纸条检测技术测定快速、准确,技术稳定、可靠,设备经济、小型,适用于大批量油料饼粕样品的快速检测和风险评估。     

同时检测玉米中黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的时间分辨荧光免疫层析试纸条的研制

研究制备了一种可同时快速定量检测黄曲霉毒素B1 (aflatoxin B1,AFB1)和赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)的二联时间分辨荧光免疫层析试纸条.采用铕系时间分辨荧光微球分别标记AFB1和OTA单克隆抗体,优化荧光微球活化pH值、标记的抗体浓度、荧光探针使用量、检测线包被原浓度、质控线羊抗鼠Ig...     

量子点标记免疫层析试纸条快速检测谷物中赭曲霉毒素A

目的:根据竞争抑制免疫层析原理,构建一种基于量子点标记的免疫层析试纸条用于检测谷物中赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)的残留量。方法:通过活化酯法将羧基功能化的量子点(Quantum dot,QD)与赭曲霉毒素A多克隆抗体(Antibody,Ab)偶联制备量子点抗体偶联物(QD-Ab);通过分别添加不同量的QD-Ab和工作液,优化量子点标记免疫层析试纸条的工作条件;通过商品化试剂盒验证该方法的有效性。结果:当QD与Ab的摩尔比为1:10时,QD-Ab荧光特性最佳;在QD-Ab和工作液添加量分别为1、10 μL时,量子点标记免疫层析试纸条结果最佳;量子点标记免疫层析试纸条的检测限为0.5 μg/L,谷物样品中的检测限为5 μg/kg,整个检测过程不超过10 min;量子点标记免疫层析试纸条特异性良好且具有有效性。结论:该方法操作简便、检测快速、结果准确灵敏,易于判断,可以满足谷物中赭曲霉毒素A残留量现场快速检测的要求。     

荧光定量免疫层析法测定鸡肉和牛奶中的氯霉素

目的 建立一种荧光定量免疫层析法测定动物源性食品鸡肉与牛奶中氯霉素残留的分析方法。方法 将氯霉素鼠单克隆抗体与羧基化铕微球进行偶联标记。经过荧光微球活化、探针偶联等一系列条件优化确定最佳反应体系条件，根据纸条测试线(T线)信号值与质控线(C线)信号值的比值(T/C)和样本中氯霉素浓度建立定量标准曲线。针对鸡肉和牛奶样品，对荧光免疫层析检测方法的灵敏度、准确度和精密度等进行评价，并与液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)标准仪器分析方法进行比较。结果 本研究建立的荧光免疫层析检测方法对鸡肉和牛奶中氯霉素残留的检出限(limit of detection, LOD)分别为0.041 μg/kg和0.040 μg/kg，定量限(limit of quantitation, LOQ)分别为0.079和0.100 μg/kg，添加回收率在76.26%~112.92%之间，变异系数均小于15%。结论 本研究建立的荧光定量免疫层析方法敏度高、稳定性好，且与使用仪器方法得到的检测结果一致性较高，适用于鸡肉和牛奶中氯霉素残留的现场快速检测。     

玉米赤霉烯酮时间分辨荧光试纸条的制备及特性研究（网络首发、推荐阅读）

研究制备一种基于时间分辨荧光免疫层析法的玉米赤霉烯酮（ZEN）快速定量检测试纸条。采用铕纳米微球作为荧光探针,标记抗ZEN的单克隆抗体,应用竞争抑制原理建立免疫层析定量方法并对其进行方法学考核。结果表明：ZEN荧光试纸条的灵敏度为0.1 ng/mL,线性范围为0.1~5.0 ng/mL,玉米、小麦阴性样品的加标回收率在93.45%~112.20%之间,对于同一个样品5次重复测定的变异系数小于15%。ZEN快速定量检测试纸条具有灵敏度高、反应时间短、准确定量、稳定性好等技术特点,适用于谷物及制品中玉米赤霉烯酮的快速定量检测。     

基于时间分辨荧光纳米微球的伏马毒素B1快速定量检测卡的制备及应用

为了满足粮食谷物中伏马毒素B1快速定量检测的需求,以伏马毒素B1为研究对象,建立了基于时间分辨荧光纳米微球的FB1荧光快速定量检测卡,检测前无需调整样品提取液pH,并借助酶联免疫试剂盒及高效液相色谱法分析比对了该荧光定量快速检测卡在粮食谷物（大米、玉米、小麦）中的检测性能。结果表明其检测不同样品的LOD在35.37~37.17 μg/kg之间,LOQ在117.9 ~123.9 μg/kg之间,灵敏度良好;线性范围均为250~6 000 µg/kg,相关系数R2在0.997 2~0.999 5之间;不同样品中6个添加水平的加标回收率为83.38%~114.66%,变异系数（CV）小于15%,准确性和重复性良好;国标液相色谱法和伏马毒素B1荧光定量快速检测卡同时检测FB1污染的不同样品,检测结果的符合度为92.53%~106.26%,CV小于10.37%;与其他常见的5种真菌毒素的交叉反应率均小于5%,且添加浓度和检出浓度的差异极显著,表明特异性良好。因此,所制备的FB1荧光定量快速检测卡能够满足粮食谷物中伏马毒素B1现场化快速定量检测的需求。     

扇贝过敏原荧光免疫层析检测方法的构建与应用

目的 构建一种简便、快速、可降低非特异性荧光干扰的时间分辨免疫层析检测方法, 实现快速检测扇贝中原肌球蛋白(tropomyosin, TM)过敏原。方法 本研究采用双抗体夹心免疫层析法, 以含有铕(Eu)纳米微粒的荧光微球作为标签偶联兔抗TM多克隆抗体, 制备荧光探针并对其进行表征。以4 mg/mL兔多克隆抗体作为T线, 羊抗兔免疫球蛋白G (immunoglobulin g, IgG)作为C线组装免疫层析试纸条。结果 本研究组建的试纸条视觉检出限为0.05 μg/mL, 仪器检出限为0.01 μg/mL。试纸条除对虾蟹有交叉反应外, 对其他10余种物种无明显交叉反应。加标样品批内和批间变异系数分别为3.71%~7.94%和12.09%~12.80%, 在不含TM的4种食物基质中加入浓度由低到高的TM, 检测结果与实际加标情况相符。结论 本检测方法准确性良好、灵敏度高、特异性强, 可在多种食物基质中实现对扇贝TM的快速检测。     

荧光免疫定量法即时检测谷物中黄曲霉毒素B1

目的 基于时间分辨荧光免疫层析技术,研制快速定量检测试纸条,用于粮谷物中黄曲霉毒素B1的检测。方法 以荧光微球为标记物,采用DNP独立质控体系和竞争法检测原理,构建了粮谷物中黄曲霉毒素B1荧光免疫定量即时检测（point-of-care testing ,POCT）方法。评价其准确度、重复性、特异性、与仪器确证方法符合度。结果 该方法最适条件为：pH7.8硼酸盐（BB）活化,pH7.5磷酸盐（PB）偶联,微球抗体质量比为5:4,抗原抗体质量比为50:1。检测限在0.299 ng/g -0.997 ng/g之间,定量限在0.544 ng/g -2.663 ng/g。代表性样本准确度为92.2%-111%,重复性为3.2%-7.5%。除与黄曲霉毒素B2有交叉反应（6.1%）,与其他类似物无（<0.1%）。该法检测结果与仪器确证法一致性好,在-12.5%—15.9%之间。结论 提供了一种准确、快速、定量、灵敏、便捷、适合现场检测粮谷物中黄曲霉毒素B1的时间分辨荧光免疫检测试纸条。     

聚集诱导发光微球免疫层析试纸条定量检测水产品中孔雀石绿

目的 建立一种用于定量检测水产品中孔雀石绿的高灵敏免疫层析检测新方法。方法 以聚集诱导发光荧光微球为标记探针,制备荧光免疫层析试纸条,通过T/C比值法构建定量检测孔雀石绿的定量标准曲线,并实现水产品中孔雀石绿的高灵敏、定量检测。结果 本方法定量检测水产品中孔雀石绿具有较高的检测灵敏度,其50%抑制率达到0.172 μg/kg,最低检出限为0.05 μg/kg。样本加标0.25、0.50、1.00 μg/kg的平均回收率介于116.01%~122.76%,变异系数介于8.66%~11.71%(n = 10),表明所建立的荧光免疫层析方法定量检测水产品中孔雀石绿具有较好的准确性精密度。通过检测30份孔雀石绿阴性以及12份阳性的水产样本,结果表明所建立的荧光免疫层析方法无假阳性,且检测孔雀石绿含量与液相色谱-串联质谱方法具有良好的一致性(线性相关系数为0.9695)。结论 本研究以聚集诱导发光荧光微球为新型标记探针,建立了一种高灵敏检测水产品中孔雀石绿的定量方法,为水产品中孔雀石绿的筛查检测提供了技术支撑。     

苯乙醇胺A荧光免疫层析试纸条的制备及特性

为通过荧光免疫层析技术制备一种快速、灵敏、特异性强的尿液中苯乙醇胺A（phenylethanolamine A,PEAA）的检测方法,采用重氮化法合成PEAA人工抗原,并通过免疫、融合、有限稀释法获得特异性抗PEAA的单克隆抗体,通过将量子点微球与PEAA偶联,制备荧光免疫层析试纸条。结果表明：PEAA免疫荧光层析试纸条的检测限为0.496 μg/L,回收率在80%～120%之间,批内、批间变异系数均小于10%,与其他类似物的交叉反应率小于5%,特异性良好。说明将荧光免疫层析技术应用到PEAA检测中是可行的,且制备的PEAA荧光免疫层析试纸条灵敏度高、准确性好、特异性好,应用前景广阔。     

实时荧光定量PCR技术在食品微生物检测和研究中的应用

实时荧光定量PCR技术是通过检测PCR产物中荧：艺讯号强度来达到定量的目的，不仅实现了对核酸信息量的分析比较，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、能有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，近年来该技术开始作为食品微生物的研究手段。本文概述了实时荧光定量PCR技术的原理、优缺点及其在食品微生物检测中的应用与研究进展，并探讨了它的技术发展和应用前景。     

食源性致病菌风险评估研究进展

食源性致病菌是食源性疾病的首要病因, 由其引起的食源性疾病长期以来一直是食品安全的主要威胁, 尤其在发展中国家,形势更严峻, 应引起重视。食品安全风险评估在降低食品安全风险、保障食品安全中发挥的重要作用日益显著。本文对近年来国内外食源性致病菌风险评估的研究进展进行综述,介绍了风险评估实际应用过程中我国学者对国外模型构建的利用和优化, 并总结我国食源性致病菌风险评估中存在的问题, 为更好地开展食源性疾病监测和食源性致病菌风险评估提供参考。     

生鲜肉中牛源性和羊源性成分定量检测方法的建立

目的建立生鲜肉中牛源性和羊源性成分荧光PCR定量检测方法。方法以线粒体细胞色素b(Cytb)基因核苷酸序列为检测靶点,设计并优化引物,建立基于SYBR染料的荧光PCR定量检测方法,并对该方法进行特异性和灵敏度验证。结果在退火温度60℃的条件下,荧光PCR检测体系中各条引物特异性良好,目标成分检测信号Ct值均小于20,非特异性检测信号Ct值均大于35,该方法在模板浓度为0.016~10 ng/μL时线性关系良好;以Ct30作为阳性或阴性结果的判定限,目标源性成分荧光PCR定量检测的灵敏度可达1%。结论本方法可为生鲜肉制品种源鉴定和掺假检测提供理论依据。     

乳酸菌饮料中嗜酸乳杆菌的实时荧光定量PCR检测方法

目的：为快速准确检测乳酸菌饮料中的嗜酸乳杆菌,建立实时荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）检测方法。方法：根据嗜酸乳杆菌NCFM的SPIDR保守区域设计特异性引物与探针,借助建立的实时荧光定量PCR方法进行特异性、灵敏度、重复性以及抗干扰能力验证,并利用模拟样品对方法进行检验,最后对市售的实际样品进行检测。结果：该方法的特异性较好;方法的绝对灵敏度达到3pg,相对灵敏度达103 CFU/mL;重复性检测表明相对标准偏差在2.6%以下。同时进行杂菌干扰实验,在纯基因组水平和培养物水平混合大肠杆菌,扩增均无明显影响,表明建立的方法抗干扰能力较好。利用建立的实时荧光定量PCR方法对模拟样品进行检测并建立标准曲线,得出R2为0.987,线性较好,可进行实际样品的检测。对市售的11 份样品进行检测,其中6 份含有嗜酸乳杆菌菌株,5份不含嗜酸乳杆菌菌株,标记嗜酸乳杆菌的样品全部检测出嗜酸乳杆菌且含量在5.83×102～3.68×104 CFU/mL之间。结论：建立的实时荧光定量PCR方法可快速、准确地检测出乳酸菌饮料中嗜酸乳杆菌。     

基于实时荧光PCR对肉制品中羊肉的精确定量

该研究将实时荧光定量PCR技术(real-time fluorescence quantitative PCR,rPCR)与微滴式数字PCR技术(micro-droplet digital PCR,ddPCR)相结合,利用ddPCR建立拷贝数和羊肉质量的函数关系,确立了基于rPCR定量检测羊肉含量的方法。特异性实验结果表明,除绵羊和山羊外,非目标物种DNA未出现特异性扩增;灵敏度实验结果表明,该方法的最低检出限为0.01 ng/μL;通过对已知成分的混合样品和市售样品的检测表明,该方法能够对含量在5%以上的羊肉进行准确定量。因此,该方法在肉制品中羊肉含量检测和掺假鉴别方面具有较好应用潜力。     

实时荧光PCR定量检测肉制品中猪源性成分

为了准确可靠地对肉制品中猪源性成分进行定量检测,通过生物信息学方法筛选到猪细胞核单拷贝基因（carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 2-like,CACA）。以CACA基因为扩增靶标,设计了特异性引物、TaqMan探针,建立了基于实时荧光定量PCR技术检测猪肉含量的方法。实验结果表明,该方法具有良好的种外特异性和种内稳定性,在20~0.032 ng/μL的DNA浓度范围内,模板DNA和扩增Ct值之间存在良好的线性关系,标准曲线为y=?3.508x+28.636,线性决定系数R2为0.997。在相对标准偏差≤25%的条件下,可准确检测猪DNA含量低至0.1%的DNA样品,猪肉含量低至5.0%的肉制品。通过对市售样品的检测,发现有的肉制品中掺有猪肉但未标识,有的配料表中猪肉并非主要成分但实际上猪肉占主要成分。本研究建立的实时荧光定量PCR能够准确可靠对肉制品中的猪肉成分进行检测,对准确鉴别肉制品掺假以及量化肉制品组分具有重要参考价值。     

Quantitative proteomics of Lactococcus lactis F44 under cross-stress of low pH and lactate

Lactococcus lactis encounters 3 environmental stimuli, H⁺, lactate, and undissociated lactic acid, because of the accumulation of lactic acid—the predominant fermentation product. Few studies have examined how these stimuli synergistically affect the bacteria. Herein, we analyzed the dissociation degree of lactic acid at different pH and investigated the cellular response to cross-stress in L. lactis ssp. lactis F44 through quantitative proteomic analysis using isobaric tags for relative and absolute quantitation of 3 groups: 0% lactic acid with pH 4.0 and 0% lactic acid with pH 5.0 for acid stress; 2% lactic acid with pH 7.0 and 3% lactic acid with pH 7.0 for lactate stress; and 2% lactic acid with pH 4.0, 2% lactic acid with pH 5.0, 3% lactic acid with pH 4.0, and 3% lactic acid with pH 5.0 for cross-stress. We observed that the metabolisms of carbohydrate and energy were inhibited, which might be due to the feedback inhibition of lactic acid. The arginine deiminase pathway was improved to maintain the stability of intracellular pH. Additionally, some differentially expressed genes associated with the general stress response, amino acid metabolism, cell wall synthesis, and regulatory systems played significant roles in stress response. Overall, we highlighted the response mechanisms to lactic acid stress and provided a new opportunity for constructing robust industrial strains.     

转基因烟草定性检测方法的研究

本文总结多年的试验研究结果,提出了一套较为完善的转基因烟草定性检测技术,应用该技术,能使转基因烟草的检测精确度由常规PCR的0.1%提高到0.005%。该技术在两次CORESTA转基因烟草盲检合作试验及多年的进出口烟叶、卷烟制品的转基因检测工作中得到广泛的验证。      

翡翠鉴别研究新趋势

翡翠市场的发展，要求其鉴定技术赶上步伐，并对市场进行规范和指导。综述了采用红外光谱分析、激光拉曼探针分析及阴极发光显微镜等测试方法对翡翠进行鉴别研究的进展，对翡翠颜色、透明度及综合定量分级新成果进行了探讨和总结，指出翡翠鉴别研究的新趋势是鉴别定量化。