牛血清中免疫球蛋白的提取研究

免疫球蛋白是生物体内一种重要的免疫活性物质,对生物体的多种器官和系统有重要影响。该试验采用40%饱和度硫酸铵盐析法、超滤法及盐析-超滤结合法,对牛血清免疫球蛋白进行分离提取,得到免疫球蛋白的粗提物。通过对三种方法的提取率和产品回收率的比较,确定采用盐析-超滤结合法提取效果最佳,其提取率为9.378mg/ml,产品回收率为91%,是一种适合于血清中免疫球蛋白粗提的有效方法。并确定盐析-超滤结合法的最佳试验条件如下:PBS缓冲液pH值为7.4;血清-PBS缓冲液比例为1:1。     

盐析法从牛初乳中提取IGF-1的工艺条件研究

目的:用盐析法从牛初乳中提取IGF-1,确定最佳盐析饱和度。方法:以新鲜牛初乳为原料,调脱脂乳等电点至4.2完全除去酪蛋白,收集乳清后选择不同饱和度硫酸铵盐析,SDS-PAGE、ELISA方法确定最佳盐析饱和度。结果:制备牛初乳IGF-1硫酸铵盐析饱和度为35%,产品回收率为75.338%,纯度为16.694×10-3%。结论:硫酸铵盐析制备IGF-1效率高,成本低,35%饱和度盐析时为最佳制备IGF-1的饱和度。     

响应曲面法优化卵白蛋白提取条件研究

以鸡蛋清为原料,采用饱和硫酸铵盐析和pH值调节相结合的方法对卵白蛋白进行提取。在饱和硫酸铵溶液浓度、提取液pH、提取温度、提取时间等单因素试验基础上,采用响应曲面法对卵白蛋白进行提取条件研究。结果表明,卵白蛋白的最佳提取条件为:饱和硫酸铵溶液浓度61%、pH4.6、提取时间124 min、提取温度52℃时,卵白蛋白的提取率为82.14%,纯度达90.12%。     

头蛋白质分离及抗肿瘤作用的研究

利用Tris-HCl(pH7.5,100mmol/L)提取藠头总蛋白质,用不同饱和度硫酸铵盐析沉淀,检测饱和硫酸铵盐析后藠头蛋白质对小鼠B16黑色素瘤细胞和Meth-A细胞的抑制作用。结果表明:20%～80%饱和硫酸铵盐析制备的藠头蛋白质对白色念球菌、小鼠黑色素瘤细胞的生长均有明显的细胞毒效应,其中80%饱和硫酸铵盐析制备藠头总蛋白质抗菌抗肿瘤活性最为明显。藠头蛋白质经液相色谱-质谱(LC-MS)检测,其主要成分为凝集素、热休克蛋白、蒜氨酸酶、半胱氨酸合酶和肿瘤坏死因子受体蛋白等物质。     

猪血免疫球蛋白提取条件的优化研究

以猪血为原料,以猪血清Ig活性保留率为指标,研究猪血免疫球蛋白的提取工艺。通过单因素试验和正交试验考察硫酸铵盐饱和度、盐析pH值、盐析温度和盐析时间对猪血清Ig活性保留率的影响。试验结果表明:硫酸铵盐饱和度45%,pH值7.2,盐析温度40℃,盐析时间1.0h时,猪血清Ig活性保留率最高,为87.13%。     

嗜酸乳杆菌细菌素Lactobacillin XH2分离纯化研究

采用氯仿萃取和硫酸铵梯度盐析两种方法对嗜酸乳杆菌细菌素Lactobacillin XH2进行粗提,氯仿萃取获得的粗提物抑菌直径为17.40mm;硫酸铵饱和梯度盐析,其中60%~80%饱和梯度粗提物抑菌效果较好,抑菌直径为15.50mm。两种粗提物经离子交换cellufine A-500柱层析纯化后,抑菌效价和比活力显著增强,分别是380.60Au/mL和355.60Au/mL、5.55Au/μg和9.96Au/μg,提纯倍数分别为15.86、28.46。Tricine-SDS-PAGE电泳测得Lactobacillin XH2分子量在14.4~20.1ku之间。     

榛蘑蛋白提取工艺的优化研究

蛋白质是一种保证机体健康的营养物质，具有多种功效。以榛蘑粉末为原料，榛蘑蛋白提取率为指标，采用碱提和超声分步提取榛蘑蛋白，利用响应面法优化榛蘑蛋白提取工艺，等电点法和盐析法相结合沉淀榛蘑蛋白。结果表明，液料比47∶1、碱提pH 10.0、碱提时间1.55 h、碱提温度80℃、超声功率200 W、超声pH 9.0、超声温度30℃的条件下，榛蘑蛋白的提取率为(76.59±0.23)%。榛蘑蛋白质沉淀的方法为先进行等电点沉淀(pI=3.7),然后用90%的饱和硫酸铵进行盐析。试验表明碱提和超声分步提取的方法与传统碱提法相比，可有效提高蛋白提取率。等电点法结合盐析法可提高蛋白得率。该试验结果为榛蘑蛋白的开发利用奠定了基础。     

饱和硫酸铵法提取血清中IgG最佳条件的研究

利用饱和硫酸铵法对牛血清中的免疫球蛋白进行分离提取。得到免疫球蛋白的粗提物，研究不同单因素对IgG质量浓度厦IgG纯度的影响，确定最佳提取参数如下：提取温度为50℃，静置时间为50min，血清-PBS比例2：1（体积比），缓冲溶液pH值7．4，离心机转速4500r／min。     

混合液盐析米曲霉蛋白酶的研究

用2种常用蛋白酶盐析溶液混合液作为米曲霉蛋白酶盐析溶液,与单种盐析溶液提取效果进行比较,得到混合液盐析的酶活力最高为133.116U/mL,硫酸铵溶液盐析的酶活力最高为62.912U/mL,氯化钠溶液盐析的酶活力最高为65.722U/mL,即混合液盐析效果明显优于单种溶液.进一步选取提取时间、提取温度、硫酸铵浓度、氯化钠浓度4个因素做L9(34)正交试验.结果表明,米曲霉的最佳提取条件组合为在40℃抽提60min后用0.2mol/L氯化钠和0.02mol/L硫酸铵混合盐析,得到酶活力为133.116U/mL.     

红毛藻中天然蛋白质色素的提取研究

比较研究了多种细胞破碎方法、硫酸铵盐析浓度对红毛藻中天然蛋白质色素的提取效果,确定组织捣碎法为效率较高的细胞破碎方法,70%饱和度的硫酸铵为较佳的盐析浓度。同时,对蛋白质色素盐析液的稳定性也进行了初步的研究。     

三相分离法提取米糠油的初步研究

对三相分离法提取米糠油及其影响因素进行了初步研究。在稳定化米糠和水的悬浮液中加入硫酸铵和叔丁醇可以形成三相。正交试验结果显示,对米糠油提油率的影响程度为叔丁醇体积>悬浮液pH值>温度>硫酸铵用量。与正己烷萃取法相比,三相分离法提取的米糠油的酸值较高,但过氧化值却明显下降。     

The extractability of winged bean (Psophocarpus tetragonolobus) seed trypsin inhibitors

The extractability of winged bean (Psophocarpus tetragonolobus) seed trypsin inhibitors by aqueous salt solution varies with pH as well as the ionic strength of the extraction medium. With a high ionic strength extraction medium, the extractability of the seed trypsin inhibitors increases with rising pH. With a low ionic strength extraction medium, however, a region of minimum extractability of trypsin inhibitors was observed at pH 4. At pH above 7, the same maximum amount of trypsin inhibitors (1.47 million inhibitor units (i.u.) per 100 g of seed meal) was extracted with both high and low ionic strength extraction media. The solution characteristics of winged bean seed proteins exhibited similar trends. Ninety-five per cent of the extracted seed trypsin inhibitors could be precipitated from 30–70% saturated ammonium sulphate solutions. The winged bean seed trypsin inhibitors isolated by ammonium sulphate fractionation lost all inhibitory activity when heated at 100°C for 10 min at alkaline pH.     

葡萄皮中白藜芦醇提取条件优化

采用响应面优化双水相体系萃取葡萄皮中的白藜芦醇。选取（无水乙醇＋丙酮）质量分数、硫酸铵质量分数、粗提液质量分数三个因素,利用Box-Behnken Design研究各因素交互作用对白藜芦醇萃取率的影响。结果表明,优化萃取工艺条件为（无水乙醇＋丙酮）质量分数22.3%、硫酸铵质量分数24.0%、粗提液质量分数12.6%,在此条件下,白藜芦醇的萃取率可达89.16%。     

乙醇-硫酸铵双水相萃取黄秋葵叶中的叶黄素

以天然黄秋葵叶经冻干粉碎后的粉末为原料,构建萃取叶黄素的乙醇-硫酸铵双水相体系。在单因素实验的基础上对乙醇质量分数、硫酸铵质量分数和粗提液质量分数进行三因素三水平的响应面优化,结果表明优化萃取工艺条件为粗提液质量分数6%、乙醇质量分数14.5%、硫酸铵质量分数27.5%、得率为1.99 mg/g,且超声辅助萃取叶黄素的动力学研究表明超声辅助萃取叶黄素过程符合二级动力学方程。此方法萃取的叶黄素以V_C做对照,对ABTS自由基和DPPH自由基的IC₅₀值分别为0.2841和0.7633 mg/mL,具有一定的抗氧化性。     

苹果中正己醇降解酶的提取

采用不同方法从苹果中提取正己醇降解酶,优选最适的提酶方式,并在该提取方式下研究酶的初步分离纯化。结果显示:采用丙酮粉法提酶较适合,且SDS-PAGE电泳结果表明不同方法提取粗酶液和经硫酸盐处理后的蛋白在条带数量和分布上都有所变化。30%~70%为适宜的(NH4)2SO4盐析浓度,然后对酶液进行梯度盐析,初步纯化后正己醇降解率为88.56%±0.9847%。     

响应面法优化黑胡萝卜红色素双水相萃取工艺

采用聚乙二醇（PEG）/硫酸铵双水相体系萃取纯化黑胡萝中的花青素。通过单因素实验考察了硫酸铵、PEG6000、粗提液的质量分数对花青素选择性系数和萃取率的影响,并以花青素的萃取率为响应值,结合响应面试验优化萃取工艺。结果表明,各因素对萃取率的影响程度由大到小依次为硫酸铵质量分数>粗提液质量分数>PEG6000质量分数。以双水相体系的总质量为基准,实验最佳萃取条件为:硫酸铵质量分数为20.0%、粗提液质量分数为12.0%、PEG6000质量分数为14.0%,黑胡萝卜红色素的平均萃取率为94.17%。此萃取方法得到的黑胡萝卜红色素具有一定的抗氧化活性,对DPPH自由基清除能力的IC₅₀值为30.51 mg/L。     

双水相技术在萃取橙皮苷中的应用

研究双水相萃取橙皮苷的成相体系及影响萃取率的因素。通过试验研究选择丙酮与(NH4)2SO4-H2O 为双水相体系,研究盐用量、pH 值及粗提物的用量对萃取率的影响。结果表明：在90% 丙酮与(NH4)2SO4 溶液体积各为10ml 的情况下,(NH4)2SO4 用量4.0g、样品0.35g、pH4 的条件下,萃取效率最佳。经萃取,橘皮中的橙皮苷主要进入有机相中,萃取率为98.22%。通过薄层分析,在365nm 紫外灯下,上相溶液与标准品的斑点Rf 值接近,下相溶液检测不到橙皮苷。     

紫菜中藻胆蛋白的提取及纯化

紫菜经800W功率超声波作用800s，用30倍体积的水浸提得到藻胆蛋白的粗提物，再用饱和度为45％的硫酸铵盐析沉淀及透析后，经羟基磷灰石（HA）层析柱，用不同浓度的磷酸缓冲液梯度洗脱，可分离纯化出紫菜藻胆蛋白（含藻红蛋白和藻蓝蛋白），两种活性组分的纯度（Amaxnm／A280nm）达到4．32。藻红蛋白的最大吸收峰在558nm，藻蓝蛋白的最大吸收峰在616nm。     

Production,Characterization and Application of a Thermostable Exo-polygalacturonase by Bacillus subtilis CM5

Exo-polygalacturonase (exo-PG) (PG, EC 3.2.1.67) has various applications in food processing industries, such as in juice extraction and clarification, bakery, and distillery processing. This study reports the exo-PG production by Bacillus subtilis CM5 isolated from cow ruminant microflora, which was comparable to marketed pectinase (Pectinex®, Novozyme, Denmark). The optimum temperature, pH, and incubation period for optimum exo-PG production (82.0–83.2 units) were 50?C, 7.0, and 36 h, respectively. B. subtilis produced more exo-PG in culture medium with peptone (1%) than other nitrogen sources such as beef extract, casein, yeast extract, ammonium sulphate, and ammonium acetate. However, ammonium chloride and urea (1%) inhibited enzyme production. In laboratory fermentor studies, exo-PG production by B. subtilis was 25.6% higher than shake flask cultures. Application of crude exo-PG from B. subtilis resulted in 13.3% increase in yield of carrot juice as compared to juice extracted with Pectinex.