烟草根系分泌物对黑胫病菌菌丝生长的影响

为了探讨烟草品种对黑胫病的抗性机制,以抗黑胫病品种Florida 301、L8、Beinhart1000-1和革新3号,以及感黑胫病品种中烟100、贵烟13、红花大金元和小黄金1025的盆栽烟苗为试验材料,采用生长速率法测定了抗感黑胫病烟草品种根系分泌物对黑胫病菌菌丝生长的影响。结果表明,抗病品种Florida301、L8、Beinhart1000-1和革新3号的根系分泌物对黑胫病菌菌丝生长具有较明显抑制作用,抑制率为5.93%～20.78%;4个抗病品种根系分泌物处理的菌落直径明显小于对照,且差异达到显著水平(P0.05)。感病品种贵烟13、红花大金元和小黄金1025根系分泌物处理与对照相比对黑胫病菌菌丝生长具有一定的促进作用,菌落直径大于对照,差异达到极显著水平(P0.01),菌丝生长抑制率为-16.47%～-2.15%,但感病品种中烟100没有表现出对黑胫病菌菌丝生长的促进作用。因此,烟草根系分泌物对黑胫病菌菌丝生长的作用与烟草品种的抗性有关。     

大蒜与烤烟轮作对烟草黑胫病的防治效果及作用机理初探

为探讨大蒜和烤烟轮作对烟草黑胫病的防治效果,本试验研究了大蒜根系分泌物及主要成分对烟草黑胫病菌的影响。结果表明,大蒜根系分泌物能显著抑制游动孢子的游动及休止孢的萌发;大蒜根系分泌物中的苯并噻唑和2种含硫化合物二烯丙基二硫醚、烯丙基甲基二硫醚对烟草黑胫病菌菌丝生长均具有较强的抑菌活性,其抑制活性均随着供试浓度增加而增强。从而证实:大蒜和烤烟轮作可以通过大蒜的根系分泌抑菌物降低烟草黑胫病的发生和危害,实现病害的生态防控。     

芸薹属植物提取液与异硫氰酸酯类制剂对烟草疫霉菌的抑制作用

为寻找有效防治烟草黑胫病的生物材料,采用生长速率法和抑菌圈法测定了3种芸薹属植物提取液和3种异硫氰酸酯类制剂对烟草疫霉菌菌丝的抑制作用。结果表明:(1)与对照相比,不同浓度的芸薹属芜菁、芥菜和油菜提取液均显著抑制烟草疫霉菌菌丝的生长,EC_(50)值分别为11.39、9.18和5.88 mg/mL,油菜提取液对烟草疫霉菌菌丝生长的抑制效应最佳。(2)与对照相比,不同浓度的异硫氰酸烯丙酯(AITC)和甲基异硫氰酸酯(MITC)制剂也均显著抑制烟草疫霉菌菌丝的生长,EC_(50)值分别为2.07和4.44 mg/L,AITC对烟草疫霉菌菌丝生长的抑制效应最佳;而异硫氰酸苯酯(PITC)对烟草疫霉菌菌丝生长无明显的抑制作用。可见,3种芸薹属植物和2种异硫氰酸酯类制剂(AITC和MITC)对烟草疫霉菌具有较好的生防效应。     

棘孢木霉T-6对烟草促生及对黑胫病和根黑腐病的抗病作用

利用生防菌防治土传病害是植物病害防治中的重要措施,在温室盆栽条件下研究了棘孢木霉T-6对烟草促生和抗病效果。结果表明,棘孢木霉T-6对烟草黑胫病菌、烟草根黑腐病菌的菌丝生长抑制率分别达49.62%、59.23%;温室盆栽条件下,棘孢木霉T-6对黑胫病和根黑腐病的防治效果分别达到74.45%和75.14%。棘孢木霉T-6处理后提高了烟草叶片叶绿素含量、类胡萝卜素含量和超氧化物歧化酶、过氧化物酶、过氧化氢酶的活性,棘孢木霉T-6处理的烟株生长状况明显好于对照。棘孢木霉T-6能够促进烟株生长和提高烟草对黑胫病和根黑腐病的抗性,具有良好的应用潜力。     

青霉菌QMYCS-2菌株的分离鉴定及其对烟草黑胫病的防治作用

为了寻找烟草黑胫病生物防治的有效途径,采用平板涂布法从健康烟株根际土壤中分离筛选出1株对烟草黑胫病菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)具有较强拮抗作用的青霉菌株(QMYCS-2),根据其形态学特征和ITS-r DNA序列分析,鉴定为马德里青霉菌(Penicillium madriti)。QMYCS-2菌株与黑胫病菌对峙培养抑菌结果表明,该菌株对烟草黑胫病菌的生长具有良好的抑制作用,抑制率达到71.76%。选取5种真菌培养液培养QMYCS-2菌株,获得不同的发酵滤液,测定其对烟草黑胫病菌的抑制作用,结果发现马铃薯葡萄糖液体培养基效果最好。比较QMYCS-2菌株发酵滤液与青霉素对黑胫病菌生长的抑制效果发现,二者抑菌效果差异很大,前者抑制率为64.89%~100.00%,后者最高为7.33%。温室测试QMYCS-2菌株发酵滤液对烟草黑胫病的防治效果(防效)达到73.25%,与常规药剂对照甲霜灵锰锌的防效(71.50%)相近。     

肉桂醛对烟草疫霉菌的体外抑制作用

[目的]为探讨肉桂醛对烟草疫霉菌的体外抑制作用。[方法]以烟草疫霉菌为研究对象,研究肉桂醛作用下烟草疫霉菌菌丝的径向生长和细胞膜透性,通过菌丝ROS和PI荧光染色,进一步测定菌丝丙二醛和甘油含量。[结果]（1）肉桂醛能够有效地抑制烟草疫霉菌菌丝的径向生长和破坏菌丝形态,抑制菌丝径向生长的EC₅₀值约为0.93 mmol/L;（2）烟草疫霉菌菌丝ROS和PI荧光染色结果显示,经肉桂醛处理的菌丝,其活性氧含量增加并出现细胞死亡现象,并表现出浓度效应;（3）随着肉桂醛处理浓度的升高,烟草疫霉菌菌丝MDA和甘油含量以及细胞膜透性均呈现逐渐升高的趋势。[结论]肉桂醛可能通过增加烟草疫霉菌胞内ROS含量,引发脂质过氧化反应,刺激丙二醛产生,从而使细胞膜受损,进一步导致细胞死亡,达到抑菌效果。      

拮抗烟草疫霉菌的木霉菌株筛选鉴定及防病促生作用研究

为了获得对烟草黑胫病菌具有较好拮抗效果的木霉菌株,从河南省各烟区烟草根茎类病害发生较重烟田健康烟株的根际土壤中共分离获得疑似木霉菌28株,通过平板对峙培养,筛选出菌株XYPQ-1、ZMD-1和XYLS-5对烟草疫霉菌具有较强抑制作用,5 d后抑菌率达90%以上。利用分子生物学方法分别将其鉴定为绿木霉菌（Trichoderma virens）、拟康宁木霉菌（Trichoderma koningiopsis）和近渐绿木霉菌（Trichoderma paraviridescens）。对其代谢物抑菌活性及防病促生效果进行了初步研究,结果表明,3种木霉菌产生的挥发性和非挥发性代谢物均对疫霉菌具有明显的抑制作用,其中XYLS-5的抑制效果最好,处理后5 d,其挥发性和非挥发性代谢产物的抑菌率分别达61.71%和100.00%。3种木霉菌对烟草黑胫病均具有较好的室内防效,其中XYLS-5的防效最高,达80%以上,且具有促进烟草种子萌发和根系生长的作用,可作为烟草黑胫病生物防治的拮抗菌加以开发应用。     

氮素形态对烟草黑胫病发生的影响

为寻找控制烟草黑胫病发生的有效措施,研究了硝态氮、铵态氮及其配比液对烟草黑胫病菌孢子萌发、菌丝生长以及烟株次生代谢物和抗病性的影响。结果表明,硝态氮、铵态氮及其混合液均可以加速烟草黑胫病游动孢子的萌发,二者混合溶液更有利于黑胫病菌丝的生长。随着溶液中铵态氮浓度的升高,烟株根系木质素、纤维素和MDA含量以及SOD、POD、PAL活性显著升高,增强了烟株的抗病性,从而使其发病率和病情指数显著下降。相关性分析表明,烟株黑胫病发病率和病情指数与其根系木质素、MDA含量和SOD、POD、PAL活性均极显著负相关,黑胫病发病率与纤维素含量显著负相关。因此,烟株黑胫病发病率和病情指数与其次生代谢物密切相关,铵态氮可以显著降低烟草黑胫病发病率和病情指数,但硝态氮和铵态氮最适配比及田间抗病效果还需进行大量相关田间试验研究。     

申嗪霉素对烟草黑胫病的毒力及防治效果

为探明申嗪霉素防治烟草黑胫病的潜力,在室内离体条件下测定其对烟草黑胫病菌菌丝生长、孢子囊形成和游动孢子释放的毒力,并通过温室盆栽和大田药效试验明确其对烟草黑胫病菌的防效及对烟草生长的影响。结果表明,申嗪霉素对沂水烟区黑胫病菌孢子囊的形成和游动孢子的释放抑制效果最好,EC₅₀值分别为0.31和0.35 μg/mL。室内防效结果表明,1%申嗪霉素悬浮剂（15 g a.i./hm²）对烟草黑胫病的防效为84.37%,显著高于25%甲霜灵可湿性粉剂（56.33%）和50%烯酰吗啉可湿性粉剂（80.55%）,而田间药效试验结果与室内防效基本一致,在冕宁和诸城两地1%申嗪霉素田间防效分别为90.49%和82.93%,显著高于对照药剂甲霜灵（71.89%,38.87%）和烯酰吗啉（78.42%,69.01%）。除此之外,申嗪霉素较甲霜灵和烯酰吗啉在提高株高、茎粗、有效叶片数及光合速率等指标效果更好。可见,申嗪霉素是防治烟草黑胫病的有效制剂,可作为甲霜灵和烯酰吗啉的轮换药剂使用。     

烟草黑胫病拮抗菌XF10的筛选与鉴定

为丰富烟草黑胫病拮抗细菌菌株资源,有效利用生物防治方法控制烟草黑胫病,在烟草黑胫病发病严重地块的健株根际周围选取土壤样品300份,通过喷施病原指示菌快速初筛、平板对峙培养复筛等方法获得了对烟草黑胫病菌有明显拮抗作用的生防菌株XF10。该菌株菌落为圆形,表面光滑凸起,边缘整齐,可产生橙色色素。经形态特征观察、生理生化特性观察、BIOLOG自动微生物鉴定系统鉴定和16S rDNA序列分析,结果显示:该菌株与假单孢菌属的多个绿针假单胞菌序列的同源性达到99%,为假单孢菌属绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)。XF10菌株的菌液以及胞外代谢产物粗提液对烟草黑胫病菌的抑制率均达80%以上,且该菌株的挥发性代谢产物能有效抑制烟草黑胫病菌菌丝生长,抑制率为86%。     

紫茎泽兰提取物对烟草疫霉菌的抑制作用研究

  目的  为探讨紫茎泽兰提取物对烟草疫霉菌的抑制作用,为其进一步的开发和利用奠定理论基础,  方法  采用室内抑菌试验研究了紫茎泽兰叶、茎、根3个器官的乙醇提取物对烟草疫霉菌丝生长、孢子囊产生及游动孢子释放的影响。  结果  结果表明:紫茎泽兰叶、茎、根3个器官的乙醇提取物均可显著地抑制烟草疫霉菌丝的生长、孢子囊的产生以及游动孢子的释放,抑制效果随处理浓度的增大而增强;叶、茎、根乙醇提取物对烟草疫霉菌的抑菌中浓度(EC₅₀)分别为7.74 mg/mL、13.63 mg/mL和16.38mg/mL;在处理浓度为10mg/mL时,叶、茎、根3个器官乙醇提取物对孢子囊产生及游动孢子释放的抑制率均在50%以上。  结论  紫茎泽兰不同器官乙醇提取物均对烟草疫霉菌均表现出显著的抑制效果,其中以叶片的乙醇提取物的抑菌效果最佳,茎和根次之。      

放线菌F8对烟草黑胫病的拮抗作用及其产酶活性

从山东五莲于里黑胫病烟田健康烟株根际土壤分离到一株拮抗放线菌,编号为F8.为了科学评价该菌株在烟草黑胫病生防中的应用潜力,测定了其抑菌活性、产酶活性及控病效果,并通过形态学及16S rDNA序列分析研究其分类地位.结果表明,该菌株对于供试的烟草黑胫病菌具有较强的抑制作用,经无菌滤液处理后的菌丝生长畸形且停滞;该菌株具有几丁质酶、纤维素酶及蛋白酶活性.温室盆栽试验的防治效果显示接种后30 d,F8发酵液对烟草黑胫病的防效为70.3%;根据菌株形态特征、培养特性、生理生化特性及16S rDNA序列分析,鉴定该菌株为链霉菌属不产色链霉菌(Streptomyces achromogenes subsp. streptozoticus).     

烟草内生细菌对烟草病害的拮抗和防治作用

利用烟草内生细菌进行了防治烟草黑胫病的试验,获得了对烟草黑胫病有较好防效的内生细菌菌株118、57、93等,其防效分别达69.23%、61.53%和65.38%。其中118菌株具有较广的抗菌谱,对几种主要的烟草病害的病原菌均有拮抗作用,对烟草疫霉菌有明显的拮抗作用,而且对烟草有促生效果,鲜重增产率为13.10%。     

两株生防菌对烟草黑胫病的抑制活性及其鉴定

为测定烟草黑胫病生防菌K9-3和L14-2两菌株的生防潜力,通过对峙培养法、孢子萌发试验和盆栽试验测定对烟草黑胫病病原菌的抑制能力,以双层滤纸法和盆栽检测法测定在烟草根际定殖能力,并根据形态特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析,鉴定K9-3和L14-2两株生防菌。结果表明:在室内试验中,这两株生防菌可抑制烟草黑胫病病原菌菌丝的生长、游动孢子囊的形成、游动孢子的释放和休止孢子的萌发;在盆栽试验中,有效防治烟草黑胫病,L14-2对烟草黑胫病的防治效果达到96.29%,K9-3的防治效果为77.78%。同时,K9-3和L14-2均具有良好的根际定殖能力,以双层滤纸法测定其在烟草根部的定殖密度分别为1.30×105cfu.cm-1和7.00×104cfu.cm-1,在盆栽试验中两菌株在烟草根际土壤和烟草根部保持一定的定殖密度,在烟草根际土壤中的定殖密度随着时间经过有所下降,但在烟草根部定殖密度均稳定保持在105cfu.g-1以上。另外,两菌株的鉴定结果,K9-3鉴定为普城沙雷菌,L14-2鉴定为绿针假单胞菌。     

毒素胁迫烟草抗黑胫病鉴定及抗性指标分析

为建立一种高效准确的烟草黑胫病抗性鉴定方法,以4种具有不同抗性特性的烟草品种为材料,研究培养基附加不同浓度黑胫病病菌毒素及不同胁迫时间对烟草种子萌发和根系生长的影响。结果表明,烟草黑胫病病菌毒素胁迫对烟草种子的发芽率和根系生长均有抑制作用,抑制效果随胁迫浓度的增加而增强,且不同品种对毒素胁迫的耐受力不同,利用体积浓度为50%的毒素胁迫15 d时,抗病品种G28、中抗品种YN116、中感品种净叶黄、感病品种红花大金元的根系长进培养基中的株数比率分别为79.38%、70.74%、33.55%和13.36%。初步确定鉴别烟草种子抗性特性的最佳粗毒素胁迫浓度为50%（即含蛋白质13.53μg/mL,含糖19.64 mg/mL）、最佳鉴定时间为胁迫15 d,利用该方法可在短期内高效准确地鉴定出不同品种（种质）对烟草黑胫病的抗感水平,加快烟草抗黑胫病育种进程。     

寡雄腐霉发酵液对烤烟的促生及防黑胫病效应分析

为了研制高效、无毒、成本低廉的生物农药,安全有效地防治烟草黑胫病,利用自主分离的寡雄腐霉生防菌株(Pythium oligandrum CQ2010)制备发酵液(Pythium oligandrum broth,POB),通过拮抗、盆栽和田间试验研究了POB对烤烟生长和黑胫病的防治效果,以及对小鼠的急性毒性。拮抗试验表明,POB能显著抑制离体烟草黑胫病菌的菌丝生长和孢子萌发。在盆栽试验中,POB能显著提高烟草叶片叶绿素含量(质量分数),增强烟株根系活力,增加烤烟对氮、磷、钾的吸收,促进烟苗生长,生物量比对照提高58.91%,效果优于寡雄腐霉卵孢子制剂。POB还能激活烟草叶片中与抗病性相关酶如过氧化物酶和过氧化氢酶的活性,诱导烟株产生抗病性反应,有利于消除活性氧和过氧化氢,使病害减轻。烤烟幼苗接种黑胫病菌后,施用POB使烟株发病率下降42.95%~65.77%,相对防治效果达到46.99%~57.32%,并显著降低烟草叶片中丙二醛含量,减轻病原菌对细胞膜的伤害。在田间试验中,POB对烟草黑胫病的防治效果达47.91%,烟叶产量提高44.47%,产值增加36.33%。小鼠急性毒性试验表明,用POB大剂量灌胃给药对小鼠体质量无显著影响,供试小鼠外观和行为均无异常,心、肝、肾、肺等器官未见病理改变。因此,POB能有效防治烟草黑胫病,促进烟株生长,提高烟叶产量和产值,且对动物安全无毒。     

洛阳烟区烟株根围抗烟草疫霉放线菌的筛选与鉴定

为筛选对烟草疫霉具有拮抗作用的放线菌菌株,有效防治烟草黑胫病,对洛阳烟区烟株根围土壤中分离的放线菌采用改良平板对峙法与菌丝生长速率法测定了供试菌株及其发酵液对烟草疫霉的拮抗作用,并通过形态学观察、生理生化测定及16S rDNA序列分析鉴定了优势拮抗放线菌的种类。结果表明:在获得的227个放线菌单菌落中,8个菌株的发酵液对烟草疫霉菌丝生长的抑制率达100%,被确定为优势拮抗放线菌。根据这些菌株的形态学观察、生理生化反应与16S rDNA序列分析结果,将菌株YY75鉴定为鲁萨链霉菌(Streptomyces lucensis),菌株YY124、YY135鉴定为高贵链霉菌(S. nobilis),菌株LN204、LN221、LN247鉴定为娄彻链霉菌(S. rochei),菌株SX92鉴定为珊瑚链霉菌(S. coralus),菌株SX59鉴定为金黄回旋链霉(S. aureoverticillatus),均属于放线菌门、放线菌纲、链霉菌目、链霉菌科、链霉菌属。     

氟菌·霜霉威对烟草黑胫病的防效及其对烟株生长的影响

为探明氟菌·霜霉威防治烟草黑胫病的潜力,本研究采用菌丝生长速率法测定了6种杀菌剂对烟草黑胫病菌丝生长的影响,并通过温室盆栽试验明确了氟菌·霜霉威对烟草黑胫病的防效及其对烟株生长的影响。结果表明,氟吡菌胺与霜霉威盐酸盐以质量比1∶10混用（氟菌·霜霉威）对烟草黑胫病菌丝生长的抑制效果最好,EC₅₀值为0.06 mg/L。温室盆栽试验结果表明氟菌·霜霉威在773.4 g a.i./hm2时,对烟草黑胫病的防效可达81.50%,显著高于甲霜灵（55.75%）和烯酰吗啉（67.83%）的防效。氟菌·霜霉威在提高烟草株高、茎粗、有效叶片数及光合速率等指标优于与甲霜灵和烯酰吗啉,表现出良好的促生效果。施用氟菌·霜霉威后,烟株叶片的多酚氧化酶（PPO）、过氧化物酶（POD）和超氧化物歧化酶（SOD）等防御酶活性显著增加,而丙二醛（MDA）含量降低。本结果表明氟菌·霜霉威可作为甲霜灵和烯酰吗啉的替代药剂用来防治烟草黑胫病。      

烟草黑胫病菌高效杀菌剂的筛选

为了筛选防治烟草黑胫病的有效药剂,采用菌丝生长速率法分析了22种杀菌剂对烟草黑胫病菌的抑制作用,测定了其中抑菌效果较好的7种杀菌剂对烟草黑胫病菌菌丝生长的EC50值,并以50%（质量分数）烯酰吗啉悬浮剂和25%（质量分数）甲霜灵可湿性粉剂为对照药剂,通过温室盆栽试验考察了23.4%（质量分数）双炔酰菌胺悬浮剂对烟草黑胫病的防效。结果表明,在供试的22种杀菌剂中,氟吗啉、申嗪霉素、甲霜灵、代森锰锌、丁吡吗啉、烯酰吗啉和双炔酰菌胺7种杀菌剂的抑菌效果较好,其对烟草黑胫病菌的EC50值分别为2.023 0、1.923 0、1.808 2、1.758 0、1.400 0、0.783 0和0.018 0 mg/L。23.4%双炔酰菌胺悬浮剂对烟草黑胫病的病指防效为80.11%,显著高于对照药剂50%烯酰吗啉悬浮剂（64.89%）和25%甲霜灵可湿性粉剂（66.05%）,可有效控制烟草黑胫病的危害。     

烟草黑胫病菌0号生理小种不同条件下培养特性的研究

研究了烟草黑胫病菌0号生理小种的若干培养性状,为进一步展开与之相关的研究和综合防治提供理论基础。用培养基、光照、菌龄、诱导剂和诱导时间等不同因素研究了对烟草黑胫病菌0号生理小种的生长速度、产孢量和游动孢子释放量等方面的影响。结果表明,燕麦培养基较适于其生长和产生孢子囊,光照限制其生长;在本实验周期内,培养21 d的菌丝较适宜诱导,0.1%KNO3溶液浸泡菌丝有助于孢子囊的产生;经26℃培养72 h后,突降12℃处理0.5 h,结合1%葡萄糖溶液可促使孢子囊释放游动孢子,并延长后者的活动时间。