茶皂素对肾癌细胞ACHN凋亡与迁移的机制研究

目的：探究肾癌细胞ACHN经不同浓度茶皂素(TS)组处理后，对细胞凋亡及迁移的影响及其相关机制。方法：以肾癌细胞ACHN为研究对象，在二甲基噻唑蓝比色法(MTT)细胞活性测定后，将细胞培养在含10%胎牛血清的高糖培养基中，分别用0、10、20、30 mg/L浓度的茶皂素处理细胞24 h。对细胞进行苏木精-伊红染色法(HE)、DAPI染色法(DAPI)观察不同茶皂素处理浓度时肾癌细胞的细胞形态及凋亡情况。划痕实验观察不同浓度茶皂素处理情况下细胞的迁移状况，蛋白免疫印迹法对调控细胞凋亡的蛋白，如Bax、Bcl-2、核转录因子-кB(NF-кB P53)、Caspase-9等与对细胞迁移有影响的基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白进行印迹分析。结果：在一定范围内，随着茶皂素处理浓度的增加肾癌细胞ACHN凋亡程度逐渐增大，对其迁移能力的抑制逐渐增加，对细胞凋亡有促进作用的Bax、P53、Caspase-9等蛋白的表达与无茶皂素处理组相比有增加趋势，而对细胞凋亡有抑制作用的蛋白Bcl-2表达则呈降低的趋势，促进细胞迁移的MMP-2蛋白表达也受到抑制。结论：茶皂素在肾癌治疗方面具有一定的潜在价值。     

山楂原花青素下调Traf6/NF-κB信号通路诱导肝癌细胞凋亡

目的：探讨山楂原花青素（hawthorn procyanidins,HPC）诱导肝癌细胞Huh-7增殖和促进其凋亡的机制。方法：体外常规培养Huh-7细胞株和过表达Traf6基因Huh-7细胞株,配制0、5、10、20、40、80μg/mL不同质量浓度的HPC,采用细胞计数8(cell counting kit-8,CCK-8)试剂盒检测HPC对Huh-7细胞和过表达Traf6基因Huh-7细胞增殖的抑制作用,并选40μg/mL作为HPC实验质量浓度;利用实时定量聚合酶链反应检测Huh-7细胞中Traf6、NF-κB?p65、Bax和Caspase-3的mRNA表达水平;利用蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测Huh-7细胞中Traf6、NF-κB p65、Bax和Caspase-3蛋白表达水平;利用Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测HPC对Huh-7细胞凋亡的影响。结果：HPC质量浓度大于20μg/mL时可以明显抑制Huh-7细胞增殖,并随HPC质量浓度升高Huh-7细胞的相对存活率显著降低（P<0.05）;Traf6蛋白过表达可以促进Huh-7细...     

姜黄素对结肠癌细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用研究

本文研究了姜黄素对结肠癌LoVo细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用。不同浓度姜黄素作用体外培养的人结肠癌LoVo细胞后,倒置显微镜观察LoVo细胞的形态学变化,采用MTT法检测姜黄素对LoVo细胞的增殖抑制能力;RT-PCR技术检测Bax、Bcl-2和Caspase-3的mRNA表达水平;Annexin V-FITC/PI标记检测细胞凋亡率;Western blotting和免疫荧光细胞化学染色检测姜黄素作用前后c-myc蛋白表达的差异。结果表明,姜黄素可显著抑制人结肠癌LoVo细胞的増殖,具有明显的量效和时间依赖性,24、48和72 h姜黄素抑制LoVo细胞的IC50分别为(26.45±0.41)、(19.13±0.09)和(10.12±0.04)μmol/L;姜黄素可激活细胞中Bax和Caspase-3的mRNA表达,抑制Bcl-2的mRNA和c-myc蛋白的表达,姜黄素可诱导LoVo细胞发生凋亡。姜黄素通过上调Bax和Caspase-3表达,下调Bcl-2和c-myc的表达来抑制人结肠癌LoVo细胞的增殖并促使其凋亡。     

β-胡萝卜素对人膀胱癌T24细胞凋亡和细胞间隙连接蛋白43表达的影响

目的探讨β-胡萝卜素抑制人膀胱癌T24细胞的分子生物学机制。方法不同浓度的β-胡萝卜素作用于T24细胞,利用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测其凋亡指数,半定量RT-PCR检测Cx43、Bcl-2、Bax mRNA的变化,Western blot检测Cx43、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果 10和20μmol/L组β-胡萝卜素均能明显抑制T24细胞的生长和诱导细胞凋亡,其抑制率分别为28.83%、63.02%,并且呈明显的剂量-效应关系(P<0.05),凋亡率分别为0.126±0.022和0.190±0.024(P≤0.01),随β-胡萝卜素浓度增加,细胞凋亡率增大,呈剂量依赖性关系(P=0.002)。与对照组相比,10和20μmol/L组β-胡萝卜素上调Cx43 mRNA及其蛋白的表达,增强细胞间的细胞间隙连接通讯(GJIC)功能(P<0.05),并且呈剂量依赖关系(P≤0.01);下调Bcl-2 mRNA及其蛋白的表达,并且呈剂量依赖关系(P≤0.01);Bax mRNA及其蛋白的表达有上调趋势,但与对照组比较,差异无显著性。结论β-胡萝卜素(10,20μmol/L)能通过有效下调Bcl-2 mRN...     

黄芪甲苷抑制黑色素瘤B16细胞的增殖作用

本文研究了黄芪甲苷抑制黑色素瘤B16细胞增殖并诱导细胞凋亡的影响。将细胞培养成功后,分别分成空白对照组、低浓度组(10 mg/mL)、中浓度组(20 mg/mL)、高浓度组(50 mg/mL),检测黄芪甲苷对黑色素瘤B16细胞增殖及凋亡的影响,并测定Caspase-3、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bax、β-catenin等蛋白的表达量。结果表明,黄芪甲苷具有较好的抗氧化活性,50 mg/mL处理时,其还原能力和DPPH自由基清除能力分别为0.92和70.82%;在此作用浓度下,处理72 h后,其对B16细胞的增殖率和凋亡率分别为15.55%和40.45%,和其他各组均有显著性差异(p<0.05)。此外,在高浓度黄芪甲苷作用下,Caspase-3、Bcl-2、Bax、β-catenin蛋白的表达量分别为0.56、0.58、0.27、0.25,显著区别于其他各实验组(p<0.05),说明黄芪甲苷能抑制较好黑色素瘤B16细胞的增殖,并通过调控Caspase-3、Bcl-2、Bax、β-catenin蛋白表达,诱导细胞凋亡。     

莲房原花青素通过线粒体介导的内源性Caspase途径诱导HepG2细胞凋亡

研究莲房原花青素(LSPCs)诱导肝癌Hep G2细胞凋亡的机制。利用MTT法检测LSPCs对肝癌Hep G2细胞的生长抑制作用,Hochest 33258染色观察凋亡细胞的核形态,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡水平,彗星实验用来检测细胞DNA损伤,JC-1染色用来检测线粒体膜电位,Western blotting法检测细胞凋亡蛋白水平的表达。LSPCs作用细胞后,显著抑制Hep G2细胞的增殖;细胞凋亡征象明显,核染色体高度凝聚,细胞核碎裂,核固缩,染色质凝聚的细胞数从3.86%增至42.76%(p0.01);活细胞率急剧减少,而凋亡率从5.32%增至67.05%(p0.01);LSPCs诱发细胞产生DNA损伤,线粒体膜电位下降,导致Cytochromec、Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达量增加,Bax蛋白的表达量上调,Bcl-2蛋白的表达量下调,Bax/Bcl-2的比值上升。而凋亡抑制剂Z-VAD能够削弱LSPCs对Hep G2细胞增殖的抑制作用,显著下调细胞核聚缩,抑制线粒体损伤及Caspase相关蛋白的表达量,最终阻断LSPCs的致凋亡作用。由此得出结论,LSPCs可通过线粒体介导的内源性Caspase途径诱导人肝癌细胞凋亡。     

葡萄籽提取物原花青素诱导人食管癌细胞ECA109凋亡

目的：探讨葡萄籽提取物原花青素（grape seed proanthocyanidins extract,GSPE）诱导人食管癌细胞ECA109凋亡的效果及机制。方法：ECA109细胞用0、25、50、100、200、400 μg/mL GSPE干预24 h,噻唑蓝法检测并计算不同质量浓度GSPE对ECA109细胞的活性抑制情况,选取半数抑制浓度（50 μg/mL）作为干预剂量;流式细胞技术检测细胞凋亡情况;酶联免疫吸附检测法测定炎性因子及Bax/Bcl-2表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction,qPCR）、Western blot检测核因子κB（nuclear factor-kappa B,NF-κB）通路和凋亡相关蛋白Caspase-3的表达情况。结果：不同质量浓度GSPE作用24 h均可抑制ECA109细胞的增殖,细胞凋亡率由54.44%增加到82.80%;酶联免疫吸附检测结果显示,相比于空白对照组,GSPE和NF-κB抑制剂BAY11-7082可显著抑制细胞内炎性因子前列腺素E2（prostaglandin E2,PGE2）的产生以及C型反应蛋白（C reactive protein,CRP）的分泌（P＜0.05）;qPCR和Western blot结果表明GSPE和BAY11-7082处理使Caspase-3 mRNA和蛋白相对表达量显著升高（P＜0.05）,NF-κB信号通路中IκB、p65、p50 mRNA表达量显著降低（P＜0.05）,p-IκB、p65、p50相对表达量显著下降（P＜0.05）。结论：GSPE可通过抑制PGE2、CRP的产生诱导ECA109细胞凋亡,其机制可能与抑制NF-κB通路、活化Bax有关。     

夏枯草提取物对人食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察夏枯草提取物对人食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的影响,探讨夏枯草抗肿瘤作用及机制。方法：不同浓度夏枯草作用于食管癌Eca-109细胞,利用MTr法检测细胞增殖抑制率,免疫组织化学法检测Bcl-2、Bax蛋白表达;Annexin—V—FITC／PI法检测细胞凋亡率。结果：中高剂量夏枯草抑制食管癌Eca-109细胞增殖,并呈量效和时效关系;使细胞凋亡率增高,同时Bcl-2蛋白减少,Bax蛋白表达增加。结论：夏枯草提取物可抑制食管癌Eca-109细胞增殖,使Bcl-2蛋白表达减少,Bax蛋白表达增加,细胞凋亡增加。     

苦荞茶多糖诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的线粒体机制

目的：从线粒体调控机制的角度探讨苦荞茶多糖（tartary buckwheat tea polysaccharide,TBTP）对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响。方法：应用水提醇沉法结合超声辅助技术提取的TBTP处理A549细胞,分为空白对照组和不同质量浓度TBTP处理组。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡水平,采用DHE和Mito SOX染色检测细胞和线粒体活性氧簇水平,采用JC-1染色检测线粒体膜电位变化,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）、Bcl-2、剪切型半胱氨酸蛋白酶（Caspase）-3、细胞色素c的水平。结果：TBTP呈剂量和时间依赖性抑制A549细胞增殖。TBTP处理A549细胞24 h可呈剂量依赖性地促进细胞凋亡。TBTP处理能够显著增加A549细胞和线粒体内活性氧水平,降低线粒体膜电位;同时,TBTP能够增加促凋亡蛋白Bax和剪切型Caspase-3的表达、抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进A549细胞线粒体细胞色素c外流。结论：TBTP能够促进活性氧簇生成、降低线粒体膜电位,进而抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡。     

紫甘薯花色苷通过调控KTN1-AS1表达对肺癌细胞的增殖和凋亡的影响

目的探讨紫甘薯花色苷对肺癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法体外培养肺癌A549细胞,分为对照组、紫甘薯花色苷不同剂量(200,400,800μg/ml)组、si-NC组、si-KTN1-AS1组、紫甘薯花色苷800μg/ml+pc DNA组、紫甘薯花色苷800μg/ml+pc DNA-KTN1-AS1组,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中KTN1-AS1表达水平,蛋白印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、p21、B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)表达水平。结果与对照组比较,紫甘薯花色苷不同剂量组细胞增殖抑制率、凋亡率及p21和Bax蛋白表达升高(P<0.05),cyclin D1和Bcl-2蛋白表达及KTN1-AS1表达降低(P<0.05),且呈剂量依赖性。与si-NC组比较,si-KTN1-AS1组细胞抑制率、凋亡率及p21和Bax蛋白表达升高(P<0.05),cyclin D1和Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。与紫甘薯花色苷800μg/ml+pc DNA组比较,紫甘薯花色苷800μg/ml+pcDNA-KTN1-AS1组细胞抑制率、凋亡率及p21和Bax蛋白表达降低(P<0.05),KTN1-AS1及cyclin D1和Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05)。结论紫甘薯花色苷可能通过下调KTN1-AS1表达抑制肺癌A549细胞增殖,并促进细胞凋亡。