高选择性增菌培养基结合侧向层析免疫方法检测食品中沙门氏菌的有效性研究及评价

目的对高选择性增菌培养基结合侧向层析免疫方法 (Rapid Chek~?)快速筛选检测沙门氏菌方法的有效性进行研究及评价。方法参照GB 4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》、ISO 16140-2-2016《食品链的微生物学-可替代方法的验证方案》,对Rapid Chek~?方法检测食品中沙门氏菌进行了实验室内验证。结果 Rapid Chek~?方法与参照方法的相对准确性、相对特异性、相对灵敏度和相对检测限无差异。结论 Rapid Chek~?方法可以作为一种处理大量样本的日常快速检测方法。     

单核增生李斯特氏菌检测能力验证结果分析

目的验证本实验室对食品中单增李斯特氏菌的检出能力。方法按照能力验证作业指导书、GB4789.30-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌》和SN/T 1870-2016《出口食品中食源性致病菌检测方法实时荧光PCR法》进行检验。首先进行2次前增菌,再按照国标法进行选择分离、纯化、生化鉴定进行检验;同时利用增菌液进行实时荧光PCR方法检验。结果国标法和实时荧光PCR法检验结果均为CODE 40样品检出单增李斯特氏菌,CODE 61样品未检出单增李斯特氏菌。结论组织者对本实验室此次能力验证试验结果评价满意,说明本实验室同时具有传统国标法和实时荧光PCR法检测单增李斯特氏菌的能力。     

单增李斯特氏菌SureTect实时PCR检测方法的比较研究

目的评估食品中单增李斯特氏菌SureTect实时PCR检测方法的性能。方法按照ISO 16140:2003/Amd 1:2011《食品和动物饲料微生物学-可替代方法的验证方案》的要求对该方法进行了实验室内的方法比较研究(即实验室内的验证)。结果对于不同的食品类别,该方法的相对准确性在77%~85%之间,相对特异性在72%~83%之间,相对灵敏度在72%~91%之间,相对检测限在0.02~0.06 CFU/g。统计检验表明,该方法与参照方法在相对准确性、相对特异性和相对灵敏度方面无显著性差异,两种方法的相对检测限也无显著性差异。使用50株目标菌株和30株非目标菌株进行方法选择性实验,两种方法检测结果均一致。结论单增李斯特氏菌SureTect实时PCR检测方法是一种快速、准确和灵敏的检测方法。     

单核细胞增生李斯特氏菌Rapid’L.mono快速筛选方法的评价

目的对单核细胞增生李斯特氏菌Rapid’L.mono快速筛选方法进行评价。方法以国家标准GB4789.30-2016作为参照方法,在检测特异性、交叉反应试验、添加实验、不同批次产品培养条件的影响和实际样品的检测方面对Rapid’L.mono快速筛选方法进行比较和评价。结果 Rapid’L.mono快速筛选培养基准确率达到97%,与30株非目标菌无交叉反应。GB 4789.30-2016方法的检出率高于快速筛选方法,2种方法的检测差异存在统计学意义(χ~2=15.864,P0.05)。培养温度和培养时间的变化对Rapid’L.mono快速筛选方法的检出率没有影响。230份样品中,GB 4789.30-2016方法和Rapid’L.mono快速筛选方法均未检测到阳性结果样品。结论 Rapid’L.mono快速筛选培养基可以作为一种选择性培养基来使用,Rapid’L.mono快速筛选方法可以辅助国标方法应用于食品检测中。     

实时荧光PCR法和国标法检测乳粉中单增李斯特菌的比较研究

目的 提升实验室检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌的速度和准确性。方法 依据《GBS4789.30-2016S食品安全国家标准S食品微生物学检验S单核细胞增生李斯特氏菌检验》和能力验证作业指导书对食品中单核细胞增生李斯特氏菌进行检测, 同时利用实时荧光PCR法对能力验证中的2个样品进行快速筛查,采用VITEK2 Compact30全自动微生物鉴定系统鉴定可疑菌落。结果 GB 4789.30国标法和实时荧光PCR快速筛查法检测,结果均为样品CODE:FC02220028单核细胞增生李斯特氏菌阳性, 样品CODE:FC02220098阴性。结论 本实验室参加了中国食品药品质量检定研究院组织的食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测能力验证,取得了满意的结果。     

实验室检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌的控制点分析

目前,检测食品微生物通常参照食品安全国家标准GB4789.30-2016。本文在严格按照GB4789.30-2016规定的流程进行操作的基础上,根据多次阳性对照实验、阴性对照实验以及能力验证实验,总结出食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测的几个关键控制点。     

能力验证中单增李斯特菌的分离与鉴定

摘要: [目的] 通过参加CNAS比对能力验证计划,提高实验室检测校准能力。[方法] 依据GB 4789.30-2016《食品微生物学检验单增李斯特菌检验》基础方法和生化分子学方法相结合，对盲样进行定性检测。[结果] 2个盲样LMO（ZJ）-191和LMO（ZJ）-134分别为检出和未检出单增李斯特菌，检测结果为均通过。[结论] 本次采用多种组合实验方法，更加准确了解到单增李斯特氏菌的各项特征，综合提升了检测准确度和效率。     

基于ISO 16140验证食品中沙门氏菌实时荧光PCR方法

以食品中沙门氏菌为研究对象,以GB 4789.4—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》为参比方法,依据ISO 16140—1:2016《Microbiology of food and animal feeding stuffs-Protocol for the validation of alternative methods》中评价指标、评价方法及评价步骤,对SN/T 1870—2016《出口食品中食源性致病菌检测方法实时荧光PCR法》中沙门氏菌检验方法进行评估。结果表明:该方法在针对食品中沙门氏菌检测时,其准确性、特异性和灵敏度均呈现满意结果,与参比方法具有相似的检出限,具有很好的包含性和排他性,可用于食品中沙门氏菌的快速筛选检测。     

评价平板法定量检测单增李斯特氏菌

目的 评价平板法定量检测单增李斯特氏菌的效果以保障其准确性和灵敏性。方法 选择市场上常用的5种显色培养基和PALCAM琼脂培养基进行试验,根据4789.28-2013对培养基的质量和效果进行评估;依据GB 4789.30-2016进行单增李斯特氏菌平板计数,通过配对t检验法对6种培养基定量结果进行分析,同时比较涂布法和倾注法两种接种方法的差异性。结果 市售的6种培养基半定量测试中,目标菌的生长指数G＞6,非目标菌的生长指数G＜1,质量符合标准检测要求;统计分析显示6种培养基获得的单增李斯特氏菌计数结果无显著差异,但显色培养基的上菌落分布均匀,容易辨认,效果优于PALCAM;同时过分析两种接种方法的检测结果,发现涂布法和倾注法无显著性差异。结论 市售的6种培养基质量符合标准要求,且对单增李斯特氏菌的计数结果具有较好的一致性,涂布法和倾注法两种接种方法具有可交换性。     

食品中微生物检测能力验证结果与分析

目的提高实验室检验人员微生物检测能力和水平,增强实验室竞争力。方法实验室参加中国检验检疫科学研究院测试评价中心组织的食品中单核细胞增生李斯特氏菌、副溶血性弧菌2项检验能力验证。按照盲样作业指导书的要求对样品进行前处理后,依据GB4789.30-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》和GB 4789.7-2013《食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》进行定性检测。结果样品17-P842鉴定出单核细胞增生李斯特氏菌,样品18-E886鉴定出副溶血性弧菌。结论本次能力验证结果满意,为今后实验室检测实际样品提供参考经验。     

单增李斯特氏菌SureTect实时PCR检测方法的 比较研究

目的 评估食品中单增李斯特氏菌SureTect实时PCR检测方法的性能。     

不同增菌液对单增李斯特菌的增菌效果比较

目的比较不同选择性增菌液对单增李斯特菌增菌效果及对干扰菌的抗干扰性。方法参考国标GB/T 4789.30-2016和国际ISO 11290-1-2017,将2种来源的单增李斯特菌(标准菌株、分离菌株)和2种干扰菌(大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌)分别接种到4种不同增菌液中,观察增菌后菌液的生长情况。结果研究发现低浓度菌液(102数量级), Fraser肉汤对单增李斯特菌的增菌效果及抗干扰性优于LB肉汤。选择性添加剂浓度过高会抑制李斯特菌的生长,通过选择合适的选择性添加剂及改变添加剂的浓度可以提高检出率。结论在实验室日常检验过程中,需考虑样品类别,选择合适的培养基。提高检测的准确率。     

可视化跨越式滚环扩增技术检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌

建立一种新型的单核细胞增生李斯特氏菌检测方法,即通过可视化跨越式滚环等温扩增（saltatory rolling circle amplification,SRCA）技术检测单核细胞增生李斯特氏菌。根据单核细胞增生李斯特氏菌hlyA基因序列设计引物,进行特异性验证,对灵敏度和人工污染样品的检出限进行测定。通过检测70?种实际食品样品对SRCA方法的敏感性、特异性和符合率进行评价。结果表明：所有单核细胞增生李斯特氏菌呈阳性结果,非单核细胞增生李斯特氏菌呈阴性结果,说明该方法特异性良好。SRCA方法的灵敏度为8.9×100?fg/μL,是传统聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）方法的1?000?倍,检出限为2.8×100?CFU/g,是传统PCR方法的1/1?000。在实际样品的检测中,SRCA方法与GB?4789.30—2016《食品微生物学检验?单核细胞增生李斯特氏菌》方法进行比较,其敏感性、特异性和符合率分别为100%、97.01%和97.14%。可视化SRCA技术具有操作简便、设备简单、特异性强、灵敏度高、检出限低、检测成本低等优点,适合在基层单位和中小型食品企业中推广应用。     

基于高分辨率溶解曲线分析鉴别食品中的3种李斯特氏菌

本研究利用高分辨率熔解曲线的方法,以iap基因为靶标新设计一对引物同时鉴别单增李斯特氏菌、伊氏李斯特氏菌和英诺克李斯特氏菌,其余14种常见食源性病原微生物扩增为阴性结果,单增李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌的检出限为10个拷贝,英诺克李斯特氏菌的检测限为50个拷贝。本研究对78份样品进行HRM-realtimePCR法、GB4789.30-2016和SN/T1870-2016(荧光PCR法)的检测,并对3种方法的检测结果进行统计学分析。结果显示:HRM法和国标方法、HRM法和荧光PCR法的检测结果之间存在统计学差异,国标方法和荧光PCR法检测结果之间无统计学差异。本研究建立的基于HRM-real time PCR法检测3种李斯特氏菌的方法快速高效、特异性好、成本低,适用于食品中李斯特氏菌的日常检测和监管。     

乳粉中单核细胞增生李斯特氏菌能力验证结果分析

摘要：目的 对本实验室单核细胞增生李斯特氏菌检测能力进行验证,以提高或保证实验室能力验证工作中对单核细胞增生李斯特氏菌检测结果的准确性。方法 按照样品的作业指导书开启样品,按照GB 4789.30-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验》进行检验,同时用MALEI-TOF-MS质谱仪对可疑菌进行鉴定,对2种方法结果进行比对。结果 FC02220009样品检出单核细胞增生李斯特氏菌;FC02220080样品未检出单核细胞增生李斯特氏菌。国标方法和MALDI-TOF-MS方法鉴定结果一致。结论 为保证检验结果准确可靠,避免假阴性出现,可多种鉴定手段同时进行。     

散装熟肉制品中单增李斯特菌污染状况分析

目的分析散装熟肉制品中单增李斯特菌污染状况。方法根据GB 4789.30-2016《单核细胞增生李斯特氏菌检验》规定的方法对散装熟肉制品的加工用原料、生产环境、各加工环节中产品以及不同销售环境下产品中的单增李斯特菌进行定性和定量检测。结果原料肉的总体带菌率达到21%;生产环境中第三区(远离食品接触面的区域)检出率为2%,其余区域未检出;各加工环节中产品单增李斯特菌检测结果均小于10CFU/g;不同销售环境下产品中单增李斯特菌检测结果小于10 CFU/g的比例为93%,处于10～50 CFU/g之间的样本占比6%,大于50 CFU/g的占比为1%。结论原料散装熟肉制品中单增李斯特菌污染的主要来源,蒸煮等加工环节能有效地杀灭单增李斯特菌。销售环境也关系到散装熟肉制品单增李斯特菌的污染程度,对于未包装的产品,专卖店优于农产品市场。