烟草赤星病菌对菌核净和苯醚甲环唑的抗药性检测

为了解吉林省和黑龙江省烟草赤星病菌对菌核净和苯醚甲环唑的抗性水平,采用菌丝生长速率法,测定了318株烟草赤星病菌对菌核净和苯醚甲环唑的药剂敏感性,建立敏感基线。运用最低抑制浓度法确定抗性菌株及频率,并比较不同采样地点的抗性水平。结果表明,供试敏感菌株对菌核净的敏感性频率分布呈连续的单峰曲线,接近正态分布,其EC₅₀均值2.916 μg/mL可作为两省烟草赤星病菌对菌核净的敏感基线,抗性频率为21.38%;烟草赤星病菌对苯醚甲环唑的敏感基线为1.198 μg/mL,抗性频率为18.24%。吉林省和黑龙江省烟草赤星病菌对菌核净和苯醚甲环唑产生了不同程度的抗性,不同地点抗性水平存在差异。本研究为烟草赤星病菌的抗药风险评估奠定了基础,为制定吉林和黑龙江两省烟草赤星病科学防治策略和科学用药提供了依据。     

田间不同繁殖代数烟草赤星病菌毒力变异的遗传本质

为弄清烟草赤星病菌毒力与DNA多态性的关系及田间不同繁殖代数烟草赤星病菌毒力变异的遗传本质,分别采用毒力测定和RAPD技术对采集于同一烟田不同生长期的6个烟草赤星病菌株进行测定。结果表明,田间赤星病菌繁殖代数越高毒力越强,毒力差异是病菌基因组DNA致病相关基因差异所致。根据供试菌株在3个烟草品种上的毒力反应,可将其分为2个组,利用RAPD标记可将其分为3个组。12个随机引物扩增供试菌株共产生105个RAPD标记,其中多态性标记占95.24%,表明烟草赤星病菌群体中具有丰富的遗传多样性,毒力多态性与DNA多态性之间存在一致性,但也存在一定的差异。     

52%的菌核·锰锌对烟草赤星病菌的室内及田间毒力测定

室内采用孢子萌发抑制法测定菌核净、代森锰锌以及它们的复配剂52%菌核·锰锌对烟草赤星病菌的毒力,结果表明,菌核净和代森锰锌以适当的比例复配,可明显提高其对烟草赤星病菌孢子萌发的抑制率.计算复配剂共毒系数为385.081 9,表现出增效作用.田间防治试验亦表明,该复配剂可有效地控制赤星病的发生和危害.     

油菜菌核病菌对嘧菌环胺和不同杀菌剂敏感性的相关分析

为了明确油菜菌核病菌对新型杀菌剂嘧菌环胺的敏感性和该药剂与其它杀菌剂的交互抗性,采用菌丝生长速率法测定江苏省不同地区的53个油菜菌核病菌菌株对嘧菌环胺的敏感性,并测定对嘧菌环胺不同敏感性的10个菌株对菌核净、异菌脲、腐霉利、多菌灵、咪鲜胺和戊唑醇等杀菌剂的敏感性。结果表明,菌株间对嘧菌环胺的敏感性差异显著,EC50（抑制中浓度）值在0.0342～1.087 6μg/mL之间;通过EC50值相关性分析,油菜菌核病菌对嘧菌环胺与上述杀菌剂之间不存在交互抗性。     

烟草赤星病菌株毒力与繁殖代数的关系

为明确烟草赤星病菌的毒力与其繁殖代数的关系,在室内采用离体、室外采用活体两种接种鉴定方法分别测定了烟草不同生长阶段分离到的6个赤星病菌株的毒力,并采用聚类分析方法比较了各菌株的毒力差异。结果表明,赤星病菌在田间繁殖代数与其毒力大小有关,生长后期分离的菌株(4、5和6号)比生长前期分离的菌株(1、2和3号)毒力强,即赤星病菌在田间繁殖代数越高,毒力越强。毒力分析聚类树状图也显示了菌株间的毒力差异,根据供试菌株在3个烟草品种上的毒力反应,可将其分为2个组,生长前期分离的菌株为一组,生长后期分离的菌株为一组。     

烟草赤星病防治药剂的筛选

为筛选防治烟草赤星病的高效杀菌剂,测定了5种常用药剂(氟啶胺、啶氧菌酯、啶酰菌胺、嘧菌环胺、噁唑菌酮)对烟草赤星病菌(Alternaria alternata)的室内毒力及田间防效。结果表明,98%氟啶胺对病菌菌丝生长的抑制活性最强,EC_(50)为0.138 2 mg/L,其次为95%嘧菌环胺,EC_(50)为3.568 9 mg/L,而95%噁唑菌酮最弱,EC_(50)为30.098 3 mg/L。田间防效试验表明,5种杀菌剂中以50%氟啶胺SC和62%嘧菌环胺WG的防治效果较好,防效分别为70.44%和63.09%;以50%啶酰菌胺WG防治效果最差,为39.53%。综合室内毒力和田间防治试验结果,在烟草赤星病防治中推荐氟啶胺和嘧菌环胺。     

荧光假单胞杆菌G20-9拮抗烟草赤星病菌研究

在室内测定了荧光假单胞杆菌菌株G20-9对烟草赤星病菌的拮抗作用.结果表明,G20-9菌株的无菌发酵液对烟草赤星病菌丝生长量有较强抑制作用,抑制效果为82.1%,稀释2倍的无菌发酵液对茵丝生长的抑制效果优于化学杀茵剂菌核净.应用双抗标记法测定了G20-9菌株在烟草叶面和根际的定殖情况,结果表明,该菌可以在烟草叶面和根际定殖.     

几种药剂防治烟草赤星病的药效试验

为筛选出防治烟草赤星病的有效药剂,选取43%"戊唑醇"、40%"菌核净"、3%"多抗霉素"、80%"代森锰锌"、70%"甲基托布津"、75%"扑海因"、45%"抗赤星一号"等7种药剂,采用菌丝生长抑制法对烟草赤星病进行了室内毒力测定和田间药效试验.结果表明:室内试验中43%"戊唑醇"悬浮剂对供试病菌的毒力最强,EC50值最小,为0.0018 mg/mL,75%"扑海因"可湿性粉剂、40%"菌核净"可湿性粉剂、45%"抗赤星一号"可湿性粉剂、3%"多抗霉素"可湿性粉剂、80%"代森锰锌"可湿性粉剂、70%"甲基托布津"可湿性粉剂的毒力依次减弱,EC50分剐为0.0063、0.1597、0.1891、0.3835、1.755和9.1313mg/mL;室外试验中43%"戊唑醇"悬浮剂的防效最好,7种药剂防治效果依次为43%"戊唑醇"悬浮剂(2000倍液)＞40%"菌核净"可湿性粉剂(600倍液)＞75%"扑海因"可湿性粉剂(600倍液)＞3%"多抗霉素"可湿性粉剂(500倍液)＞45%"抗赤星一号"可湿性粉剂(800倍液)＞80%"代森锰锌"可湿性粉剂(500倍液)＞70%"甲基托布津"可湿性粉剂(700倍液).     

线粒体旁路氧化途径抑制剂水杨肟酸(SHAM)协同下烟草赤星病菌对嘧菌酯的敏感性

测定了线粒体旁路氧化途径抑制剂水杨肟酸(SHAM)协同下烟草赤星病菌对嘧菌酯的敏感性。结果表明:嘧菌酯抑制病原菌菌丝生长和孢子萌发的EC₅₀值分别为25.8300 mg/L和0.0500 mg/L,在100 mg/L SHAM协同下,EC₅₀值分别降低为15.5200和0.0038 mg/L;SHAM对烟草赤星病菌菌丝的生长和分生孢子的萌发没有影响。研究说明SHAM增强了嘧菌酯对烟草赤星病菌的毒力,线粒体电子传递的旁路氧化途径存在于烟草赤星病菌中,且在孢子萌发中的增效强于菌丝生长阶段。      

烟草赤星病菌对嘧菌酯及其添加水杨肟酸后的敏感性检测

为了解烟草赤星病菌对嘧菌酯的敏感性现状,采用菌丝生长速率法,检测了采自山东和湖北烟区的33株烟草赤星病菌对嘧菌酯的敏感性,分析了水杨肟酸协同下烟草赤星病菌对嘧菌酯敏感性的影响。结果表明:嘧菌酯对所有供试烟草赤星病菌的EC₅₀介于60.5230~111.7918 mg·L-1,平均为83.9068±2.4339 mg·L-1;嘧菌酯对采自山东烟区和湖北烟区的赤星病菌的平均EC₅₀分别为82.7986±2.5515 mg·L-1和88.0230±6.6785 mg·L-1。在水杨肟酸协同作用下,嘧菌酯对所有供试烟草赤星病菌毒力的EC₅₀介于19.9090~35.6684 mg·L-1,平均为29.2007±0.7801 mg·L-1,比嘧菌酯单独作用毒力提高了0.70~2.98倍,平均提高了1.87倍;添加水杨肟酸的嘧菌酯对采自山东和湖北烟区的赤星病菌毒力的平均EC₅₀分别为28.5494±0.8914 mg·L-1和31.6197±1.3290 mg·L-1,与嘧菌酯单独作用相比,毒力分别提高了1.90和1.78倍。研究表明,嘧菌酯对烟草赤星病菌的菌丝生长具有一定的抑制作用,添加水杨肟酸能够显著提高嘧菌酯对烟草赤星病菌的毒力,但不同菌株之间的提高倍数有差异。      

烟草病原真菌拮抗性内生细菌的筛选

为利用有益微生物防治烟草某些病害,从7个烤烟品种(云烟85、红大、K326、K346、RG11、G28和NC89)不同生育期的根、茎、叶中分离获得内生细菌1729株,并通过平板对峙培养法筛选出对烟草灰霉病菌、黑胫病菌、赤星病菌和炭疽病菌有较好拮抗活性的菌株61、38、52和55株。结果显示,在各个品种、各个时期及根、茎、叶中均有不同数量拮抗这4种病原菌菌株存在。     

防治烟草赤星病药效试验

为了更有效地防治烟草赤星病 ,用 7种药剂进行了大田喷施对比试验。结果表明 :4 0 %“菌核净”可湿性粉剂 5 0 0倍液、4 0 %“菌核铜”可湿性粉剂 5 0 0倍液、4 5 %“菌克”可湿性粉剂 5 0 0倍液、“云岭酶素”30 0倍液、4 5 %“金叶舒”可湿性粉剂 60 0倍液、3%“多抗霉素”可湿性粉剂 30 0倍液、30 %“大力”可湿性粉剂 5 0 0倍液的相对防效依次为 :92 .5 6%、92 .13%、92 .13%、91.18%、90 .36%、87.5 6%、85 .0 2 %、83.91% ,差异达显著水平     

非病原细菌对烟草赤星病菌的生物抑制作用研究

从烟草根际土壤和烟草、黄瓜、番茄、桑树的茎、叶部位分离了５０株非病原芽孢杆菌和假单孢杆菌,在培养条件下对烟草赤星病菌进行了生物拮抗性测定。结果表明,非病原细菌对烟草赤星病菌有效强的拮抗作用。在不同来源的非病原细菌中,以来自烟草根际的非病原细菌对烟草赤星病菌的拮抗作用最强。在拮抗菌对目标菌烟草赤星病菌生长发育影响中发展,受拮抗菌作用,目标菌菌丝形态产生变异,生长发育受到影响。选取拮抗性较强的拮抗菌,在温室条件下处理（喷洒）烟苗,结果对烟草赤星病具有明显的抑制作用。     

长柄链格孢(Alternaria longipes)和链格孢(A.alternata)的RAPD分析

对来自中国及亚、非、欧三大洲5个国家的10个烟草赤星病菌（Alternarialongies）及5个链格孢菌（A．alternata）标准菌株用6种随机引物（OPR01、OPR12、OPR13、OPR14、OPR15、OPK19）进行了基因组DNA随机扩增多态性分析，对RAPD带型所进行的聚类分析结果表明，所有参试菌株之间相似性很高（90．3％～94．7％），其系统聚类关系与寄主和地理来源没有相关性，证明A．longipes与A．alternata亲缘关系很近，建议将A．alternata确定为烟草赤星病菌的学名。     

枯草芽孢杆菌Tpb55抗菌蛋白纯化特性分析

枯草芽孢杆菌Tpb55分离自烟草叶围,对烟草赤星病菌具有较强的拮抗能力。除去菌体培养液以90%饱和度硫酸铵沉淀所得的拮抗粗提液对热稳定,在pH为5.0～10.0范围内较稳定,对木瓜蛋白酶,蛋白酶K,胃蛋白酶不敏感。粗提液经DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析和Sephadex G-75(1.6 cm×80 cm)凝胶层析,纯化出一种抗菌蛋白,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对蛋白分子量测定,该抑菌蛋白分子量约为47.8 kD,自动Edman降解法从Bst1N端测得的氨基酸序列为:Met-Glu-Ile-Phe-Lys-Tyr-Met-Glu-Thr-Tyr-Asp-Tyr-Glu-Gln-Leu-Val-Phe-Cys-。     

烟草几种重要病害拮抗菌的筛选

从山东滕州,临沂等县（市）的烟草,番茄和辣椒根际采集土壤样本１５份,经内分离纯化获得细菌１０２株,放线菌５５株。以烟草赤星病菌,野火病菌和青枯病菌等为力,对１５７个菌株进行平板对峙培养法抑菌测定,分别筛选出和对１种病原真菌和病原细菌有拮抗活性的细菌３３株和放线菌２２株。