矿泉水中铜绿假单胞菌的测定能力验证结果分析

目的分析矿泉水中铜绿假单胞菌检测能力验证(ACAS-PT 736(2019))的结果。方法根据能力验证指导书,并参照GB 4789.2-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》对样品进行稀释,依据GB 8538-2016《食品安全国家标准饮用天然矿泉水检验方法》对可疑菌落进行鉴定,同时对可疑菌落使用VITEK2进行辅助鉴定。结果样品19-P383检测结果为7800 CFU/250 mL,样品19-Q333检测结果为8800 CFU/250 mL。本次能力验证Z值分别为?0.8、?0.1、|Z|均小于2,检测结果满意。结论本实验室具备检测铜绿假单胞菌的能力, VITEK2对可疑菌落进行辅助鉴定的准确性也得到了验证。     

包装饮用水中铜绿假单胞菌检验方法相关问题的探讨

为了研究包装饮用水中铜绿假单胞菌项目的检测,确保铜绿假单胞菌检测的准确性,采用GB8538—2016 《食品安全国家标准饮用天然矿泉水检验方法》中滤膜法测定,探讨了试验过程中水样稀释、滤膜放置、绿脓菌素试验等关键环节对试验结果的影响。结果表明,按照GB 4789.2—2016 《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》中"样品的稀释"对水样进行递增稀释,能够保证滤膜上生长的菌落数量在适宜范围内,提高计数准确性;其次,滤膜的正确使用以及绿脓菌素试验注意事项,能够有效避免漏检和假阴性结果。     

饮用天然矿泉水中产气荚膜梭菌检测方法的改良

将饮用天然矿泉水中产气荚膜梭菌检测国标方法GB 8538-2016《食品安全国家标准饮用天然矿泉水检验方法》作一些改良,以使检测结果更加准确可靠。用产气荚膜梭菌CICC22949人工污染的水样通过孔径为0.22μm的无菌滤膜过滤,分别将胰胨-亚硫酸盐-环丝氨酸琼脂(tryptose-sulfite-cycloserine agar,TSC)培养基和亚硫酸盐-多黏菌素-磺胺嘧啶琼脂(sulfite-polymyxin-sulphadiazxine agarr,SPS)培养基采用双层培养基覆盖法进行试验。改良后的方法在滤膜上有黑色可疑菌落,而国标方法滤膜上的菌落无黑色。TSC培养基上目标菌计数值显著高于SPS培养基计数值(P<0.05)。用新鲜配制的TSC培养基经双层培养基覆盖改良后的方法检测产气荚膜梭菌,现象更明显,结果更可靠,更适合饮用天然矿泉水中产气荚膜梭菌的检验。     

包装饮用水中铜绿假单胞菌定性检验盲样考核的结果与分析

作为包装饮用水中铜绿假单胞菌检验资质的国家食品安全抽检监测承检机构,本实验室参加2016年食药总局食品安全抽检监测承检机构铜绿假单胞菌定性检验盲样考核。按照盲样考核作业指导书和《GB/T 8538-2008饮用天然矿泉水检验方法》的要求检验,并结合全自动微生物生化鉴定系统(VITEK 2)对分离出的可疑菌落鉴定。结果显示,样品1559、1562、1565、1580、1582检出铜绿假单胞菌,1546、1573、1574、1579、1584未检出铜绿假单胞菌。     

铜绿假单胞菌检测能力验证结果与分析

目的 分析实验室对饮用水中铜绿假单胞菌检测能力验证结果。方法 依据能力验证作业指导书幵参照GB4789.2-2016对样品进行稀释,根据GB8538-2016进行检测,同时对可疑菌落使用API20NE与VITEK2进行辅助鉴定。结果 样品18-N361、18-U838能力验证结果为满意。结论 通过此次能力验证,解决了饮用水样品的稀释问题,验证了API 20NE与VITEK2对可疑菌落进行辅助鉴定的准确性。VITEK2能缩短检验时间。     

云南省文山州广南县吊浆粑食物中毒事件的病原学分析

目的分析云南省文山州广南县一起吊浆粑食物中毒事件,鉴定引起中毒的致病因素。方法在流行病学调查的基础上,对采集的4份食物样品参照GB/T 4789.29—2003进行微生物常规培养,对其中分离的疑似目标菌株进行VITEK 2 COMPACT生化鉴定和16S rRNA序列比对,并对样品进行动物中毒试验,采用液相色谱-质谱联用方法对样品中的米酵菌酸进行定量分析。结果分离的3株食源性致病菌的16S rRNA序列比对和VITEK 2COMPACT生化鉴定结果均为唐菖蒲伯克霍尔德菌(Burkholderia gladioli),均可产毒使小鼠死亡,且样品中米酵菌酸含量超标,产毒量最高达9.67 mg/kg。结论该食物中毒事件是由唐菖蒲伯克霍尔德菌污染吊浆粑,产生大量米酵菌酸所致。从试验过程和结果分析,该菌株应为我国命名的椰毒假单胞菌酵米面亚种(Pseudomonas cocovenenans subsp.farinofermentans)。     

消毒剂在矿泉水卫生控制中的应用

随着天然矿泉水日渐成为人们日常饮用水的主要来源,矿泉水的安全问题得到了越来越多的关注。新的《饮用天然矿泉水》国家标准（GB8537-2008）已于2009年10月1日正式实施,它的实施将使矿泉水的健康安全标准进一步升级。新矿泉水国家标准的最大“亮点”在于增加了溴酸盐的限量指标,规定每升饮用天然矿泉水中溴酸盐含量不得超过001毫克。此外．新国标中微生物指标增加了粪链球菌、铜绿假单胞菌和产气荚膜梭菌3项．去掉菌落总数1项。     

唐菖蒲伯克霍尔德氏菌三种鉴定方法的比较

以食品及环境样品中初步分离的13株疑似唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）为研究对象,通过比较生理生化检 测法、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）法和recA序列分析法,得到快速准确鉴定唐菖蒲伯克霍尔德氏菌的方 法。 结果表明,13株疑似菌株经MALDI-TOF-MS法和recA序列分析法鉴定为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌,而VITEK 2 COMPACT生理生 化法鉴定8株（62%）为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌,其他5株为栖稻假单胞菌（Pseudomonas oryzihabitans）。 在唐菖蒲伯克霍尔德氏菌的鉴 定方法中,MALDI-TOF-MS法和recA序列分析法鉴定结果一致且准确,而VITEK 2 COMPACT生化检测法存在缺陷。 相比传统生理 生化鉴定方法,MALDI-TOF-MS法和recA序列分析法在唐菖蒲伯克霍尔德氏菌鉴定中更为快速、准确。     

矿泉水中铜绿假单胞菌定量检验能力验证的结果分析

为实验室对水中铜绿假单胞菌的检测提供外部质量保证,增强客户及相关委托方对实验室出具可靠数据的信心,我实验室积极参加盲样考核和能力验证活动。本文按照能力验证作业指导书及GB 8538-2016饮用天然矿泉水检验方法操作,以VITEK 2生化鉴定仪辅助鉴定并对结果加以分析。本次实验室参与的矿泉水铜绿假单胞菌检测结果均为满意。     

100份食品样品中金黄色葡萄球菌的检测情况

通过检测2016年玉溪市100份食品样品的金黄色葡萄球菌,了解易被金黄色葡萄球菌污染的食品类别,总结样品中分离出的典型菌和疑似菌的鉴定经验,分析几种方法用于鉴定过程中的优点和缺点。参考国家标准GB 4789.10-2010检测金黄色葡萄球菌,分离和鉴定疑似菌落,并与PCR方法比对。结果表明,肉类食品更易检出金黄色葡萄球菌,PCR方法可用于快速初筛,但仍需进行生化鉴定和血浆凝固酶试验确证。     

纯种强化发酵细菌型水豆豉细菌菌群动态研究

采用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳（PCR-DGGE）技术对利用枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）BJ3-2强化发酵的细菌型水豆豉前发酵及后发酵过程中的细菌菌群种类及数量进行动态研究。结果表明,前发酵42 h后,细菌种类及数量丰富并趋于稳定,后发酵第5天,细菌种类达到最大。整个发酵期间共鉴定出6个属15个种,包括芽孢杆菌属（Bacillus）、沙雷菌属（Serratia）、产碱菌属（Alcaligenes）、肠球菌属（Enterococcus）、不动杆菌属（Acinetobacter）及变形杆菌属（Proteus）。共检测到6种条件致病菌,分别为粘质沙雷菌（Serratia marcescens）、粪产碱菌（Alcaligenes faecalis）、蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）、奇异变形杆菌（Proteus mirabilis）、鲍氏不动杆菌（Acinetobacter baumannii）、屎肠球菌（Enterococcus faecium）,其中,奇异变形杆菌首次报道存在于贵州纯种发酵细菌型水豆豉中。     

蜂蜜中细菌的筛选、鉴定及其抑菌作用

从4种蜂蜜中分离得到8株芽孢杆菌,通过生理生化实验及形态学观察,结合16S rRNA基因序列分析对这些菌株进行了鉴定。初步研究了8株分离菌对大肠杆菌(Escherichia coli)、痢疾杆菌(Shigella dysenteriae S7NaCl)、粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens SYBCT02)的抑菌作用。通过对这些分离菌的抑菌性质的研究,发现有些菌株是通过竞争作用抑制其他菌落的生长,还有些菌株是通过其代谢过程产生的抑菌物质来抑制其他菌落的生长。     

海产品中溶藻弧菌的分离及多种方法鉴定效果的比较

目的了解北京市市售海产品中溶藻弧菌的污染情况,并对使用不同方法鉴定溶藻弧菌的效果进行比较。方法样品经碱性蛋白胨水增菌后,分别于硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖(TCBS)琼脂培养基和科玛嘉弧菌显色培养基上划线培养,实时荧光聚合酶链式反应(PCR)法鉴定可疑菌落。以rpoB基因测序方法为参考,比较了实时荧光PCR和VITEK两种方法的鉴定效果。结果对北京市水产品市场随机采集的116份海产品进行了检测,实时荧光PCR法鉴定出溶藻弧菌阳性样品95份,检出率高达82%。使用科玛嘉弧菌显色培养基的检出率高于TCBS培养基,分别为82%(95/116)和72%(83/116)。经rpoB基因核苷酸序列测定确定95株疑似菌株为溶藻弧菌。采用VITEK 2 COMPACT GN鉴定卡对这95株菌株进行鉴定,31株鉴定为溶藻弧菌,其余未能得到准确的鉴定结果。结论北京市市售海产品中溶藻弧菌检出率高。科玛嘉弧菌显色培养基比TCBS琼脂培养基更适于溶藻弧菌的分离,实时荧光PCR法的鉴定效果优于VITEK法。     

预包装食品中金黄色葡萄球菌3种鉴定方法的比较

目的 比较国家标准方法(GB 4789.10-2016)、VITEK2 Compact全自动微生物鉴定系统、基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法对预包装食品中金黄色葡萄球菌的鉴定效果。方法 使用金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)人工污染12种不同种类的预包装食品,按照GB4789.10-2016进行样品前处理和增菌,通过上述三种方法对上述样品中分离的疑似金黄色葡萄球菌进行鉴定,并对鉴定结果进行比较。结果 三种方法均能够对12种不同种类的人工污染预包装食品中分离的金黄色葡萄球菌进行准确有效的鉴定。相对于国标法,两种仪器鉴定方法无需进行后续溶血分析和血浆凝固酶试验,对操作人员技术要求更低,能够在更短的时间内获得鉴定结果。结论 两种仪器鉴定方法快速、可靠且操作简单,可以作为国标法的有效补充。     

Study of the bacterial ecosystem in tropical cooked and peeled shrimps using a polyphasic approach

The characterization of the microbial ecosystem of cooked tropical shrimps was carried out using a polyphasic approach. First, culture-dependent methods were used for bacterial enumeration and the phenotypic and molecular identification of bacterial isolates. Then, culture-independent methods, including PCR-TTGE (V3 region of the 16S rRNA gene), provided a fingerprinting of bacterial DNA directly extracted from shrimps. Two batches of cooked and peeled tropical shrimps were stored at 5 and 15 degrees C for 5 and 3 weeks, respectively. Trained panelists carried out a sensory evaluation and microbiological enumerations were performed. When spoilage of samples was perceived, several colonies were isolated from the total viable count media. Thus, 137 bacterial strains were identified by phenotypic and molecular tests. Lactic acid bacteria (LAB) constituted the major group with the most represented genera being Carnobacterium (C. divergens, C. maltaromaticum and indiscernible C. alterfunditum/pleistocenium), Vagococcus (indiscernible V. carniphilus/fluvialis) and Enterococcus (E. faecalis and E. faecium). The other groups corresponded to Brochothrix thermosphacta and Enterobacteriaceae (Serratia liquefaciens). In PCR-TTGE profiles some of DNA fragments were assigned to those of standard strains (S. liquefaciens, B. thermosphacta, E. faecalis, C. divergens and C. maltaromaticum) or identified isolates from culture-dependent analysis (E. faecium). Other additional informations were provided by fragment cloning (Psychrobacter sp, Citrobacter gillenii and Firmicute). In conclusion, TTGE is an excellent tool to monitor the evolution of the microbial ecosystem in seafood products.     

3种不同培养基和1种测试片检测水溶性化妆品中菌落总数的结果分析

目的使用t检验法分析3种不同培养基和1种测试片检测水溶性化妆品中菌落总数结果。方法参照《化妆品安全技术规范》(2015年版),使用卵磷脂吐温80营养琼脂、TTC营养琼脂、平板计数琼脂方法进行样品菌落总数检测,然后使用Petrifilm TM菌落测试片检测样品。运用配对t检验法评价4种不同方法对水溶性化妆品中菌落总数计数结果一致性的影响。结果在10~2、10~3 CFU/m L 2种不同浓度,平板计数琼脂法结果波动性最大,无法抑制菌落蔓延,而TTC营养琼脂和菌落测试片相对卵磷脂吐温80营养琼脂,具有抑制菌落蔓延生长、提高计数结果准确性的作用。结论在一定浓度下,可根据实际情况来选择相应培养基检测水溶性化妆品中菌落总数以提高检测效率和质量。     

食品中沙门氏菌快速检测技术方法对比结果分析

目的比较VITEK2COMPACT、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(matrixassistedlaser desorption ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS)、实时荧光PCR法(real-time PCR)、环介导等温扩增法(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)4类方法,分析其对沙门氏菌的快速检测效果。方法挑取12株阳性野生菌株复苏,配以1株标准菌株作为对照,分别用VIKEK2COMPACT、MALDI-TOF-MS、Real-timePCR、LAMP四类方法对其进行检测,并比较4类方法的结果差异。结果 Real-time PCR与LAMP单对通用引物能鉴定到属水平,此外, LAMP测定沙门氏菌时会有假阴性的情况出现;VITEK2生化鉴定能将少数沙门菌株鉴定到种的水平;质谱方法能鉴定到亚种水平,同时会出现鉴定不准确的情况。结论基于沙门氏菌属水平上, 4类方法都能快速准确鉴定沙门氏菌,但在使用快速检测技术时均应考量该方法的优点对实际工作的帮助以及缺点对检验结果的影响,才能提高检测效率。