利用啤酒酵母生产SOD的提取条件研究

研究了利用异丙醇破壁、丙酮二次纯化提取SOD生产工艺,最佳提取条件为:异丙醇浓度为90%、时间120min、pH7.0,粗酶液的收率为73%,所得SOD的酶比活为3048.7u/mg.与胞内SOD提取老工艺相比,具有工艺简单、设备少、操作简便、成本低等特点.(孙悟)     

提取羊血SOD过程中除血红蛋白工艺的研究

采用正交试验分析法对去除血红蛋白工艺进行优化,在单因素的基础上,以SOD粗酶液的活性为指标,研究了沉淀剂的比例、沉淀剂与溶血液的比例、沉淀时间对羊血红蛋白去除效果的影响,确定了最优工艺参数.结果表明,当沉淀剂与溶血液体积比为1:1,95%乙醇与丙酮的体积比为1:1,提取时间为30min时,去除血红蛋白效果最好,此时SOD粗酶液活性为364.26U/mg蛋白.     

响应面法优化猪血超氧化物歧化酶的提取工艺

为了开发利用猪血资源,采用猪血为原料,以超氧化物歧化酶的比活力为指标,对热变性提取过程中影响超氧化物歧化酶活力的水浴温度、水浴时间和硫酸铜加入量三个因素进行考察,并在此基础上,采用中心组合(Box-Behnken)试验设计及响应面分析对猪血超氧化物歧化酶(SOD)的热变性提取工艺进行优化,将最优热变性条件下提取的上清液通过氯仿-乙醇处理,丙酮沉淀提取粗酶液,并采用Sephadex G-100对粗酶液进行纯化。最后采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对纯化后的酶液进行纯度鉴定。结果表明:水浴温度、硫酸铜加入量对猪血SOD活力影响显著(P0.05),热处理最佳工艺为:水浴温度为66℃,水浴时间为25 min,硫酸铜加入量为3.10%,此时粗酶液的比活力为167.74±0.38 U/mg。经Sephadex G-100纯化后酶液的比活力为6594.55±16.20 U/mg,活力回收率为62.15±0.02%,纯化倍数为39.14±0.36。聚丙烯酰胺凝胶电泳分析酶纯度已到达电泳纯。     

大蒜SOD最佳提取条件确定及其生长过程中SOD活力变化研究

采用热变性法、磷酸缓冲液提取法、热变性法+磷酸缓冲液提取法、氯仿-乙醇沉淀法、丙酮沉淀法5种方法对大蒜细胞溶质中超氧化物歧化酶(SOD)进行了粗提、分离纯化.实验结果表明热变性法+磷酸缓冲液混合法所得的SOD的粗提物活性较高;丙酮沉淀法是SOD纯化的最好方法;不同的丙酮加入量与搅拌时间会影响SOD的纯化结果,其最佳条件是加入0.6倍体积的丙酮,搅拌15 min.在此优化条件的基础上,研究不同生长阶段大蒜SOD酶活力,大蒜中SOD酶活力随生长过程,总体成上升趋势.在第五周以后趋于稳定,SOD酶活力达到最高1.210.     

有机溶剂二次沉淀法提取纯化酵母菌超氧化物歧化酶的研究

酿酒酵母BUV094经发酵培养后，离心收集菌体，将菌体用甲苯法破壁得到粗酶液，粗酶液经调节PH除杂蛋白，丙酮二次沉淀三步纯化工艺，得到纯化的SOD，其比活为1015U／mg，收率为65．2％。PAGE电泳后的活性染色显示，酵母超氧化物歧化酶具四条同功酶。该样品经KCN，H2O2，氯仿—乙醇抑制试验，酶类型为Cu／ZnSOD。     

猪肝超氧化物歧化酶的分离纯化与初步表征

研究猪肝SOD的分离提取、纯化以及初步表征。以猪肝为原料,通过抽提液加热、丙酮沉淀和Sephadex G-200层析柱色谱提取、纯化Cu,Zn-SOD;在单因素试验的基础上,采用L(934)设计对提取工艺进行系统优化。结果表明:经过热变性,可以除去大部分杂蛋白,提高了SOD的比活力;最佳的提取条件是:在1.4%的盐浓度下,于70℃水浴中热变性10 min,然后加1.6倍体积的丙酮获得SOD粗沉淀;溶解后的粗酶液经Sephadex G-200层析柱纯化后,经SDS-PAGE电泳检测为单一条带,HPLC检测显示为单一对称峰,均表明最终得到了高纯度的SOD;紫外-可见吸收光谱和ICP-MS分析结果均表明得到的是含铜、锌的SOD,即Cu,Zn-SOD;以邻苯三酚为底物,该酶的Km值为1.574,Vmax为0.268。     

从猴头菇中提取纯化SOD

研究了从猴头菇中提取并纯化SOD的方法和最佳条件.采用乙醇-氯仿法通过均匀实验获得最佳提取条件为1g猴头菇加入到0.15mol·L-1的NaHCO3 5mL中,加入乙醇-氯仿(2:1,v/v)溶液6mL,在30℃下提取3.5h测得粗酶液活性为321.26U.采用丙酮二级纯化法,纯化所得SOD的酶比活为95.58U·mg-1.     

月桂酰氯修饰羊血超氧化物歧化酶工艺优化及酶学性质

以羊血为材料获得超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）酶液,采用月桂酰氯修饰SOD,在修饰温度、修饰时间、月桂酰氯添加量和丙酮添加量的单因素试验基础上,通过正交试验优化工艺参数,并比较修饰酶与天然酶的酶学性质。结果表明：10 mL酶比活力为4 348.6 U/mg的SOD样液在修饰温度60 ℃、修饰时间30 min、月桂酰氯用量0.1 mL、丙酮添加量为酶液体积的1.5 倍条件下充分反应,所得修饰酶活力最强;修饰酶热稳定性、pH值耐受性、半衰期等均优于天然酶。月桂酰氯可用于修饰性能较优的羊血超氧化物歧化酶。     

响应曲面试验优化猕猴桃中SOD的提取工艺

优化猕猴桃中超氧化物岐化酶(SOD)提取工艺,旨在进一步开发植物SOD酶源。选取猕猴桃为原料,在单因素试验基础上,应用Box-Behnken响应曲面设计,以热变性温度、热变性时间、丙酮沉淀处理为试验因素,以SOD酶活性为响应变量,分析并优化SOD的提取工艺。试验确立了最佳的SOD提取工艺参数为热变性温度57.5℃、热变性时间27 min、V_(丙酮)∶V_(SOD酶液)=0.93,此条件下,SOD酶活性为(835±25)U/mL。     

红酵母提取SOD的研究

研究了从红酵母中提取、纯化超氧化物歧化酶(SOD)的方法和条件。所得SOD酶比活2297．20U/mg，对粗酶液的收率为89．94％，纯化倍数为11倍。