牡丹花蕊黄酮对H2O2诱导RAW264.7巨噬细胞损伤的保护作用

目的：研究牡丹花蕊黄酮对H2O2诱导损伤的RAW264.7巨噬细胞的保护作用。方法：实验分为空白组、H2O2损伤组、VC对照组和牡丹花蕊黄酮低、中、高剂量组。应用H2O2建立RAW264.7巨噬细胞氧化损伤模型,噻唑蓝法测定细胞存活率,试剂盒法测定细胞和细胞培养液中谷胱甘肽和丙二醛含量及过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、乳酸脱氢酶活力。结果：牡丹花蕊黄酮的质量浓度在10～30 μg/mL范围内时,可显著促进RAW264.7巨噬细胞的增殖（P＜0.05）。与H2O2损伤组相比,牡丹花蕊黄酮各剂量组能够提高细胞及细胞培养液中总抗氧化能力,谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物酶、过氧化氢酶活力以及还原型谷胱甘肽含量,降低细胞及细胞培养液中丙二醛含量,提高细胞内乳酸脱氢酶的水平。结论：牡丹花蕊黄酮可以促进RAW264.7巨噬细胞的增殖,提高H2O2损伤的RAW264.7巨噬细胞的抗氧化能力,且存在剂量依赖效应。     

海参蛋白肽对H_2O_2诱导RAW264.7细胞氧化损伤的保护作用

以海参为原料,研究海参蛋白肽的抗氧化性以及对H2O2诱导RAW264.7巨噬细胞氧化损伤的保护效果和作用机制。以清除羟自由基(·OH)能力、Fe2+螯合能力和Fe3+还原能力为指标,评价海参蛋白肽的体外抗氧化活性。以H2O2刺激RAW264.7巨噬细胞建立氧化损伤细胞模型,采用2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针法测定细胞活性氧(ROS)水平,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞活力,实时荧光定量PCR测定细胞血红素氧合酶-1(HO-1)m RNA表达水平。结果表明,海参蛋白肽能够清除·OH,具有Fe2+螯合能力和Fe3+还原能力,海参蛋白肽的这种体外抗氧化能力呈现浓度依赖效应。海参蛋白肽显著降低氧化损伤RAW264.7巨噬细胞ROS水平和提高氧化损伤细胞活力(P0.05)。而且,海参蛋白肽显著提高巨噬细胞内HO-1 m RNA表达(P0.05),HO-1抑制剂锌原卟啉IX(Zn PPIX)部分逆转海参蛋白肽对氧化损伤巨噬细胞活力的促进作用。这些结果说明,海参蛋白肽通过上调RAW264.7巨噬细胞HO-1 m RNA表达水平,发挥对巨噬细胞氧化损伤的保护作用。     

金银花黄酮对过氧化氢诱导RAW264.7巨噬细胞损伤的保护作用

探讨金银花黄酮对RAW264.7巨噬细胞抗氧化活性的影响。通过过氧化氢诱导RAW264.7细胞损伤,建立细胞氧化损伤模型,研究金银花黄酮低、中、高剂量组(62.5,125,250 mg/mL)对损伤细胞的保护作用。研究结果表明:质量浓度62.5～250 mg/mL范围的金银花黄酮可显著促进RAW264.7细胞的增殖(P0.05)。金银花黄酮各剂量组显著提高了细胞及细胞培养液中总抗氧化能力(P0.05),显著提高了SOD、GSH-Px、CAT活性及GSH含量(P0.05);显著降低了细胞及细胞培养液中MDA含量(P0.05);显著降低了细胞中LDH活性并提高了细胞培养液中LDH活性(P0.05)。金银花黄酮促进RAW264.7细胞的增殖,并且对过氧化氢诱导的RAW264.7细胞损伤有良好的保护作用,存在剂量依赖效应。本研究为金银花功能性食品及保健品的开发提供理论依据。     

生姜油树脂对过氧化氢引起RAW264.7巨噬细胞损伤的保护作用

目的:研究生姜油树脂对过氧化氢引起的RAW264.7巨噬细胞损伤的影响。方法:以生姜油树脂为研究对象,建立RAW264.7细胞的过氧化氢损伤模型,测定质量浓度分别为1、3、5μg/mL的生姜油树脂联合过氧化氢对RAW264.7细胞和细胞培养液中丙二醛、谷胱甘肽、超氧化物歧化酶以及谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化指标的影响。结果:生姜油树脂各剂量组均能显著缓解过氧化氢引起的RAW264.7细胞的损伤,降低细胞及细胞培养液内的丙二醛含量,提高谷胱甘肽含量以及超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性,其中5μg/mL生姜油树脂对过氧化氢引起的细胞损伤的保护作用效果最好。结论:生姜油树脂对过氧化氢引起的RAW264.7细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能是生姜油树脂通过调节细胞氧化还原系统,提高抗氧化能力,有效清除自由基的产生,从而对细胞的氧化性损伤起保护作用。     

绿豆皮黄酮对H2O2诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤的保护作用

目的:研究绿豆皮黄酮对H2O2诱导损伤人脐静脉血管内皮细胞的保护作用及其机制。方法:用体积分数70%的乙醇提取绿豆皮中黄酮,采用高效液相色谱法测定其有效成分;通过H2O2诱导HUVEC细胞损伤,建立细胞氧化损伤模型。试验被分为正常对照组、H2O2组、维生素C组、绿豆皮黄酮低、中、高剂量组(20,60,80μg/m L),通过MTT法测定细胞增殖能力,生化比色法检测各组细胞及培养液中的超氧化物酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)活性以及谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量。结果:H2O2呈剂量依赖性降低内皮细胞活力,并引起细胞凋亡。其中1 000μmol/L H2O2处理HUVEC后,与正常组相比,细胞存活率明显受到抑制,而绿豆皮各剂量组能显著提高细胞和细胞培养液中的GSH-Px、SOD、GSH活性,降低MDA含量,同时降低细胞中LDH活性并增强细胞培养液中的LDH含量。结论:绿豆皮黄酮能抑制H2O2诱导的内皮细胞凋亡,减轻H2O2对内皮细胞的损伤作用,其机制是:绿豆皮黄酮抑制损伤细胞脂质过氧化,提高机体抗氧化酶活性,清除自由基。     

桉叶多酚提取物体内外抗氧化活性评价

桉叶资源丰富且生物活性高,但少有研究对桉叶多酚提取物进行系统的抗氧化活性评价。本实验旨在研究纯化后桉叶多酚提取物体内外抗氧化活性。以化学法、RAW264.7巨噬细胞模型、秀丽隐杆线虫（以下简称线虫）模型为评价方法,以自由基清除率、抗氧化酶活力及线虫寿命等为指标,评价桉叶多酚提取物的抗氧化能力。结果表明,桉叶多酚提取物具有良好的自由基清除能力和还原能力,在一定质量浓度下效果接近抗坏血酸。桉叶多酚提取物能显著提高氧化损伤RAW264.7巨噬细胞内抗氧化酶（超氧化物歧化酶、过氧化氢酶）活力和谷胱甘肽含量,并显著降低丙二醛含量（P＜0.05）,呈量效关系。此外,桉叶多酚提取物显著降低常规培养和氧化损伤条件下线虫体内活性氧积累量（P＜0.05）,提高线虫抗氧化能力,起到延长线虫寿命的作用。桉叶多酚提取物在体内外均表现出良好的抗氧化活性,具备开发食品抗氧化剂或功能食品的潜力。     

银杏花粉黄酮苷的恶味乳杆菌B2生物转化产物及其抗氧化活性评价

目的：研究恶味乳杆菌B2（Lacbacillus perolens B2）生物转化对银杏花粉黄酮组分及其抗氧化活性的影响。方法：分析银杏花粉及其生物转化产物的提取物和各自石油醚相、乙酸乙酯相和正丁醇相萃取物的得率和高效液相色谱图,通过2,2’-连氮基-双-（3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸）、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除能力评价其体外抗氧化活性,通过对H2O2损伤小鼠巨噬细胞RAW264.7的保护作用评价其细胞抗氧化活性。结果：通过L. perolens B2的生物转化,提取物及各相萃取物得率均有所提高,银杏花粉主要黄酮苷被转化为以山柰酚为代表的黄酮苷元,并富集于乙酸乙酯萃取相。体外抗氧化活性评价显示,通过L. perolens B2的生物转化,提取物和各相萃取物的体外抗氧化能力均得到提高,其中生物转化产物的乙酸乙酯相萃取物的体外抗氧化活性最高。细胞实验显示,供试的银杏花粉及其生物转化产物的提取物和各自的乙酸乙酯相萃取物均可减缓由H2O2损伤导致的RAW264.7细胞凋亡,并且存在剂量依赖关系。生物转化产物的提取物及乙酸乙酯相萃取物对H2O2损伤RAW264.7细胞的保护能力均高于对应的银杏花粉样品,其中生物转化产物的乙酸乙酯相萃取物保护能力最强,当其质量浓度为15 μg/mL时,几乎可以完全保护RAW264.7细胞不受H2O2损伤。结论：通过L. perolens B2的生物转化,银杏花粉主要黄酮苷被转化为以山柰酚为代表的黄酮苷元,提取物及各相萃取物的得率、体外抗氧化活性及对H2O2诱导损伤的RAW264.7细胞的保护作用均显著提高（P＜0.05）,其中生物转化产物的乙酸乙酯相萃取物抗氧化活性最高。     

石榴籽油自由基清除能力及对H_2O_2诱导PC12细胞损伤的保护作用

以吩嗪硫酸甲酯-还原型辅酶I-氮蓝四唑(PMS-NADH-NBT)系统产生超氧阴离子自由基和羟基自由基诱导DNA及蛋白质氧化损伤为模型,考察石榴籽油对超氧阴离子自由基的清除能力以及对DNA和蛋白质氧化损伤的保护作用。通过建立H2O2诱导PC12细胞损伤氧化应激损伤模型,采用甲氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞存活率和细胞损伤程度,硫代巴比妥酸法测定MDA含量,超氧化物歧化酶(SOD)及过氧化氢酶(CAT)试剂盒测定细胞的氧化应激变化,研究不同浓度石榴籽油对H2O2刺激的PC12细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力及丙二醛(MDA)含量的影响。结果表明:石榴籽油清除自由基的能力以及对DNA和蛋白质损伤的保护作用随着石榴籽油浓度的升高而增强。石榴籽油在0.5~4 mg/m L质量浓度范围能显著提高H2O2损伤的PC12细胞存活率,显著减少H2O2刺激的PC12细胞中MDA的生成,提高SOD活力及CAT活性。石榴籽油在体外具有清除自由基,减轻羟基自由基诱导DNA及蛋白质氧化损伤以及保护PC12细胞对抗氧化损伤的作用。     

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷保护RAW264.7细胞免受过氧化氢诱导的氧化损伤

本研究旨在探究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷（cyanidin-3-O-glucoside,C3G）对H2O2诱导RAW264.7细胞氧化损伤的保护作用及其机制。通过噻唑蓝法测定C3G和过氧化氢分别对RAW264.7细胞存活率的影响;采用酶联免疫吸附测定法检测细胞内超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活力以及一氧化氮（nitric oxide,NO）和丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平;利用2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯活性氧荧光探针检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平;通过逆转录定量聚合酶链式反应和Western blot法分别测定相关mRNA和蛋白表达水平。结果表明,C3G（6.25～25.00 μmol/L）能显著抑制H2O2诱导RAW264.7细胞活性降低（P＜0.05）。C3G显著降低H2O2诱导RAW264.7细胞内ROS过表达、MDA水平和NO释放（P＜0.05）,显著增加SOD和GSH-Px活力（P＜0.05）。此外,与空白对照相比,400 μmol/L H2O2处理组中,蛋白激酶Mst1/2和Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白Keap1的mRNA及蛋白相对表达水平显著上调（P＜0.05）,而细胞中核因子E2相关因子和下游抗氧化酶HO-1的mRNA及蛋白相对表达水平显著下调（P＜0.05）;而采用C3G干预RAW264.7细胞,上述相关mRNA及蛋白的相对表达水平被逆转。结论：C3G对H2O2诱导RAW264.7细胞氧化损伤保护作用,可能与激活Mst/Nrf2信号通路和提高抗氧化酶活性有关。     

小米糠黄酮对H_2O_2致HepG2氧化应激损伤的保护作用

目的:研究小米糠黄酮对H2O2致HepG2细胞氧化损伤的修复作用及其机制。方法:实验分为正常组、氧化应激模型组以及小米糠黄酮低、中、高剂量组,测定小米糠黄酮对H2O2诱导构建氧化应激损伤模型的细胞增殖率、胞内活性氧水平、抗氧化物酶系和凋亡蛋白表达量的影响。结果表明:小米糠黄酮显著缓解H2O2对HepG2造成的细胞生长抑制(P0.05),显著降低胞内活性氧和丙二醛的水平(P0.05),显著提高超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力(P0.05),并且显著下调bax、p53、Caspase-3凋亡蛋白的表达量(P0.05)。小米糠黄酮对H2O2致HepG2氧化应激损伤具有保护作用,其作用机制可能和抑制细胞凋亡通路蛋白的表达,调控细胞的氧化还原系统、清除胞内活性氧水平、提高胞内抗氧化酶系的活性有关。     

响应面试验优化超声辅助提取金银花叶黄酮工艺及其抗氧化活性

为提高金银花叶中黄酮类化合物的提取率,在乙醇体积分数、提取温度、液料比和超声功率4 个单因素试验的基础上,通过二次通用旋转组合设计试验优化金银花叶黄酮的超声辅助提取工艺条件,并对其体外抗氧化活性进行研究。结果表明,在乙醇体积分数60%、液料比65∶1（mL/g）、提取温度46 ℃、超声功率250 W的条件下金银花叶黄酮提取率最高,可达15.67%,与模型预测值相符。抗氧化实验结果表明,金银花叶黄酮具有较强的抗氧化能力,其清除超氧阴离子自由基的能力与作用时间呈反比,与提取液质量浓度呈正比;清除羟自由基的IC50值为0.11 mg/mL,是对照品的34 倍。     

鱼腥草根和叶醇提物抗氧化活性比较研究

对比鱼腥草根和叶的乙醇提取物抗氧化活性。分别采用70%乙醇制备鱼腥草根醇提物、叶醇提物,通过测定还原能力和对羟自由基(·OH)、超氧自由基(O2-·)、亚硝酸盐(NO2-)的清除作用,评价鱼腥草根、叶醇提物体外抗氧化活性,并测定醇提物中多糖、总黄酮和总酚含量。在不同的抗氧化体系中,鱼腥草根、叶醇提物的抗氧化能力有差异,其中叶醇提物的抗氧化活性明显强于根醇提物。多糖、总黄酮、总酚含量测定结果显示,鱼腥草根醇提物中各活性成分的含量均高于叶醇提物。鱼腥草根、叶醇提物均表现出不同程度的抗氧化活性,且抗氧化活性与活性成分含量呈正相关。     

广枣黄酮清除自由基能力及抗氧化性能的细胞模型法评价

利用制备色谱将广枣黄酮分离成F1和F2两个组分。分别测定广枣黄酮、F1和F2的总抗氧化能力、清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基（•OH）以及超氧阴离子自由基（O2－•）的能力,并与常见的抗氧化剂VC进行对比。结果表明：广枣黄酮具有良好的抗氧化效果,总黄酮的抗氧化能力介于F1和F2之间;F1对DPPH自由基的清除能力以及F1和F2对•OH的清除能力均高于VC,而在总抗氧化能力以及清除O2－•方面F1和F2的效果均弱于VC。另外,细胞模型法评价结果显示,广枣黄酮可清除小鼠巨噬细胞RAW264.7内的活性氧,表现出明显的抗氧化活性。     

金银花叶乳酸杆菌发酵凉茶的研制及其抗氧化活性分析

为获得一款具强抗氧化活性的高保健性金银花叶发酵凉茶,以金银花叶为原材料,通过单因素实验和正交试验,研究了发酵时间、发酵温度、保加利亚乳酸杆菌(L. plantarum 758)接种量及糖的添加量(葡萄糖与蔗糖质量比为3:2)对金银花叶凉茶抗氧化活性的影响并对工艺条件进行了优化,还对比了金银花叶凉茶与市场上常见三种凉茶在抗氧化性及挥发性成分上的差异。结果表明,乳酸杆菌发酵金银花叶凉茶的最佳发酵条件为:发酵时间24 h、发酵温度38℃、接种量4%及糖添加量7%,在此发酵条件下所获得的金银花叶凉茶绿原酸含量达到7.11%,总黄酮含量为22.51%,DPPH自由基清除率为84.23%±3.32%,ABTS自由基清除率为85.30%±2.14%,均显著高于市场上的三种凉茶(P<0.05);金银花叶凉茶中共有挥发性物质32种,其种类和含量都较其它对比组高。总体表明,保加利亚乳酸杆菌(L. plantarum 758)发酵的金银花叶凉茶抗氧化能力突出,具有较高的营养价值和实用功能性。     

栽培菊苣籽总黄酮的细胞毒性及清除羟自由基活性成分的识别

采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT)法评价栽培菊苣籽总黄酮对小鼠巨噬细胞RAW264.7的毒性。从总抗氧化能力、清除2,2’-联氮-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐自由基(2,2’-azino-bis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)diammonium salt cation radical,ABTS+·)能力、清除O_2~-·能力以及抑制Fe~(2+)诱发的卵黄脂蛋白脂质过氧化能力4个方面评价栽培菊苣籽总黄酮的抗氧化活性,并与常见的抗氧化剂VC和叔丁基对苯二酚(tertbutylhydroquinone,TBHQ)作比较。之后采用高效液相色谱(high-performance liquid chromatography,HPLC)法对栽培菊苣籽总黄酮中清除·OH的活性成分进行了识别。MTT实验结果显示,菊苣籽总黄酮质量浓度为1 mg/mL时,对RAW264.7细胞具有一定的毒性,而当其质量浓度适当减小后,则基本无毒性。抗氧化实验结果表明:栽培菊苣籽总黄酮的总抗氧化活性和清除ABTS~+·的能力弱于VC和TBHQ,但在低质量浓度时,其总抗氧化活性与TBHQ非常接近;在清除O_2~-·方面,活性由强到弱为VC菊苣籽总黄酮TBHQ;在抑制卵黄脂蛋白脂质过氧化实验中,栽培菊苣籽总黄酮强于VC,但弱于TBHQ。HPLC法结果显示,绿原酸比洋蓟素具有更高的清除·OH的活性,且二者对·OH的清除率分别为66.42%和46.00%。     

首乌叶黄酮抗氧化性能及清除自由基能力的研究

测定了首乌叶黄酮的总体抗氧化能力、清除超氧阴离子自由基能力、清除羟基自由基能力、清除DPPH自由基能力和对卵黄脂蛋白脂质抗氧化能力,并与合成抗氧化剂维生素C(VC)和没食子酸丙酯(PG)进行了比较。结果表明:首乌叶黄酮溶液具有良好的抗氧化效果,在一定浓度范围内,首乌叶黄酮溶液对卵黄脂蛋白脂质抗氧化能力优于VC和PG,其总体抗氧化能力、清除超氧阴离子自由基能力优于PG略低于VC,清除羟自由基能力优于VC低于PG,但清除DPPH自由基能力比VC和PG略弱。     

干燥方式对金银花多酚组分及其抗氧化活性的影响

研究传统热风干燥、自然阴干以及真空干燥、真空冷冻干燥等不同干燥方式对金银花多酚类物质含量及抗氧化活性的影响。采用Folin-酚比色法及高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）法分别检测4 种干燥方式下的金银花总酚及多酚类组分含量,并比较其清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基（•OH）和2,2’-二氮-双（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸）铵盐（2,2’-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonate acid) diammonium salt,ABTS）自由基的能力。结果表明：4 种干燥方式对金银花总酚含量及多酚类组分均有一定影响,其中真空冷冻干燥处理时金银花总酚及多酚类组分损失最小;不同干燥方式对金银花的抗氧化能力影响显著（P＜0.05）,真空冷冻干燥样品清除DPPH自由基、•OH和ABTS＋•的半抑制浓度（IC50）分别为5.43、17.64、44.32 μg/mL;而自然阴干、真空干燥和热风干燥处理的样品清除DPPH自由基、•OH及ABTS＋•的IC50高于真空冷冻干燥金银花相应的IC50。相关性分析显示,金银花酚酸类组分与其抗氧化活性显著相关（P＜0.05）。因此,真空冷冻干燥能较好地保留金银花多酚类物质,且具有较强的抗氧化活性,适宜用于金银花的干燥。