贵长猕猴桃腐烂菌的侵染途径及分离鉴定

为了明确贵长猕猴桃腐烂的病原菌种类及其可能的侵染途径,选取其花、鲜果及腐烂果为研究对象,进行菌种分离、形态学和分子生物学鉴定、致病性试验。 结果显示,从猕猴桃花中分离到6种真菌,分别为漏斗多孔菌（Polyporusarcularius）、平革菌属（Phanerochaetesp.）、曲霉属（Aspergillussp.）、橘青霉（Penicilliumcitrinum）、枝孢菌属（Cladosporiumsp.）、镰刀菌属（Fusariumsp.）;从猕猴桃鲜果果肉中分离到裂褶菌（Schizophyllumcommune）,鲜果果皮中分离到3种真菌,分别是蔡氏轮层炭壳菌（Daldiniachildiae）、链格孢菌（Alternariasp.）、烟曲霉（Aspergillusfumigates）;从腐烂果中分离到6种真菌,分别是小新壳梭孢菌（Neofusicoccumparvum）、拟茎点霉（Phomopsissp.）、尖孢镰刀菌（Fusariumoxysporum）和3株青霉菌（Penicilliumsp.）。 其中小新壳梭孢菌和拟茎点霉是贵长猕猴桃腐烂的主要病原菌,贵长猕猴桃病原菌的侵染途径可能主要是在采收、运输和包装过程中进入猕猴桃内,引起猕猴桃的腐烂。     

甜樱桃采后腐烂病原菌的分离与鉴定

为了研究山西省甜樱桃果实采后贮藏过程中的病原菌,本文对低温贮藏过程中发生腐烂的甜樱桃果实的病原菌进行分离纯化。在形态学基础上,结合基因序列分析,对分离获得的2株病原真菌YTA、YTB进行鉴定。YTA和YTB利用真菌通用引物ITS序列进行PCR扩增,将测序所得的基因序列与NCBI的GenBank进行同源序列比对,确定甜樱桃病原菌的生物学分类。结果表明:病原菌YTA为草酸青霉(Penicillium oxalicum),YTB为葡萄孢属(Botrytis sp.),将其重新回接到甜樱桃上,均能引起甜樱桃腐烂。草酸青霉(Penicillium oxalicum),葡萄孢属(Botrytis sp.)均是造成山西省甜樱桃采后腐烂的病原菌。     

贮藏“海沃德”猕猴桃中霉菌的分子鉴定及生物学特性的研究

目的:分离与鉴定陕西省周至县贮藏期腐烂"海沃德"猕猴桃果实中的霉菌,并对其生物学特性进行研究,为今后猕猴桃贮藏保鲜的研究提供理论依据;方法:通过形态观察并结合分子鉴定,确定猕猴桃病原菌的种类;通过对其生长培养基、光照、温度、pH、致死温度和抗紫外能力等生物学特性研究,分析不同病原菌之间的生物学特性的差异。结果:从腐烂猕猴桃中共分离出5株致病菌,鉴定为:Penicillium sp.CLF-S、Penicillium purpurogenum、Penicillium chrysogenum、Penicillium paneum和Trichoderma longibrachiatum。生物学特性结果表明:在豆芽汁培养基上产孢量最大;连续光照条件下孢子产量最高,并且在温度为30℃、pH为6.0～7.0时为产孢量最佳;致死温度80℃以上且抗紫外能力在72.73%～92.45%之间。结论:陕西省周至县"海沃德"猕猴桃贮藏期致病菌主要为青霉菌属和木霉菌属,生长pH和温度范围宽、致死温度高、抗紫外能力较强。     

鲜切生菜贮藏期病原真菌的分离及鉴定

以鲜切生菜为试材,采用传统的微生物分离手段分离纯化在4℃贮藏过程中引起腐烂的主要病原真菌,通过回接试验验证其致病性。通过形态学观察、分子生物学鉴定以及系统发育学分析其分类地位。结果表明:从货架期终点的鲜切生菜中共筛选出菌落形态差别比较明显的病原真菌4株,经鉴定其依次为短柄帚霉(Scopulariopsis brevicaulis)、扩展青霉(Penicillium expansum)、翅孢壳霉(Emericellopsis sp).和暗孢节菱孢(Arthrinium phaeospermum),4种病原真菌中扩展青霉为主要致病菌。     

蓝莓采后主要病原菌的分离鉴定及肉桂精油抑菌效果

为明确山东泰安地区蓝莓采后主要致腐病原菌及肉桂精油对其抑菌效果,从自然腐烂的“晚丰”蓝莓上分离纯化优势菌株,采用传统真菌形态学鉴定方法结合rDNA-ITS序列分析方法进行鉴定,并采用体外熏蒸抑菌实验研究肉桂精油对几种主要致病菌的抑制效果。结果表明,泰安本地蓝莓分离到3 株病原真菌,分别为尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）、链格孢菌（Alternaria alternata）和灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）。体外抑菌实验表明,肉桂精油对尖孢镰刀菌、链格孢菌和灰葡萄孢菌均有较好的抑制效果,其最小抑菌浓度分别为60、30 μL/L和30 μL/L;通过扫描电镜可以看出,与对照组相比,经肉桂精油处理的3 种病原菌菌丝形态均受到严重破坏,发生凹陷、皱缩、粗糙等一系列变形现象。     

桃采后病原菌种类及侵染规律研究

本试验以大久保、京玉等北方地区桃主栽品种为试材，研究采后病原菌种类、侵染和发病规律。结果表明：引起桃采后贮藏过程中腐烂的病原菌有8种。不同菌种在不同温度条件下的回接试验表明8种病原真菌的致病性有较大差异，其中灰霉菌（Botrytis cinerea）致病力最强；芽枝霉（Cladosporium sp.）最弱；根霉和黑曲霉多在常温中致病，且病程一般很短：灰霉、交链孢霉在桃低温和高温中均致腐。     

烟草灰霉病病原鉴定及其生物学特性

对广西烟草灰霉病的病原、生物学特性进行了初步的研究.根据该病原菌的形态特征、致病性及rDNA-ITS序列测定,将该病原菌鉴定为灰葡萄孢(Botrytis cinerea Pers).该病原菌菌丝在5℃-30℃的温度范围内均可生长,产生分生孢子的温度范围为10℃-25℃,菌核形成温度范围为15℃-22.5℃,最适温度均为20℃;分生孢子萌发的温度范围为7.5℃-30℃,最适温度为20℃-25℃.在pH2-9的范围内该菌均能生长,最适pH为6.分生孢子需在高湿条件下才能萌发,相对湿度低于100％时不能萌发.完全光照对该菌菌丝生长有促进作用,而完全黑暗更利于产孢、孢子萌发及菌核的形成.单糖及双糖、有机氮及硝态氮足病原菌较好的C、N源.分生孢子和菌核的致死温度分别是42℃和46℃.     

贵州望谟板栗冷藏期致腐真菌鉴定及其生物学特性研究

板栗腐烂由多种真菌协同侵染造成,尤其冷藏期栗果腐烂率可达15%～20%。该研究以贵州望谟主产区板栗为实验对象,对其冷藏期进行致腐真菌分离纯化、柯赫氏法则致腐性测定、形态学和分子生物学鉴定。结果表明,分离鉴定出的3株致腐真菌分别为层出镰刀菌(Fusarium proliferatum)、皮落青霉(Penicillium crustosum)和链格孢菌(Alternaria alternata)。生物学特性试验表明,层出镰刀菌菌丝生长和产孢最适pH值分别为7.0和8.0,最适菌丝生长和产孢碳源为乳糖,氮源为甘氨酸,温度为25℃,光照条件为24 h黑暗;皮落青霉菌丝生长最适碳源为乳糖、pH值为8.0,最利于产孢的碳源为大豆多糖、pH值为7.0,菌丝生长和产孢最适温度为25℃、氮源为尿素、光照条件为24 h黑暗;链格孢菌分别以蔗糖、麦芽糖为碳源时菌丝生长最快、产孢量最大,菌丝生长和产孢最适温度为25℃、氮源为蛋白胨、pH值为9.0、光照条件为24 h黑暗。贵州望谟板栗冷藏期主要致腐真菌的确定,可为板栗腐烂有效防控及致腐机制研究提供科学依据。     

1株桃果实采后病原真菌的鉴定以及碳源代谢指纹图谱分析

从采后贮藏过程中发病的八月脆桃果实(Amygdalus persica cv.Bayuecui)中分离到1株真菌菌株074#.通过对病原菌形态学观察以及核糖体ITS rDNA序列分析,证明菌株074#为灰葡萄孢霉菌(Botrytis elliptica).致病性试验结果表明,桃果实为灰葡萄孢霉菌的寄主.通过Biolog...     

宁夏枸杞鲜果采后病原菌的分离、鉴定及水杨酸的抑病效果研究

目的 分离、鉴定宁夏中宁地区引起枸杞鲜果采后病害的主要病原菌, 并研究水杨酸(salicylic acid, SA)的抑病效果。方法 采用常规方法从自然发病果实中分离病原真菌, 通过形态学和ITS(internal transcribed spacer)序列信息进行鉴定。使用不同浓度的水杨酸处理病原菌和果实, 观察SA对病原菌体外和体内的抑制效果。结果 共分离到4株病原真菌菌株, 它们均能引起枸杞鲜果的采后腐烂。其中, WB-1鉴定为梨黑斑链格孢(Alternariagaisen), WB-2鉴定为互隔链格孢(Alternariaalternata); WB-3和WB-4分别鉴定为镰刀霉属(Fusarium)和枝孢属(Cladosporium)真菌。SA对3种供试病原真菌的生长均有明显抑制作用, 且SA浓度越高抑制效果越明显。SA浸泡处理对常温和低温贮藏的枸杞鲜果病害有显著的控制效果, 并且SA处理对枸杞果实固形物含量(soluble solids content, SSC)无显著影响。结论 枸杞鲜果采后腐烂由多种病原真菌引起, SA处理对枸杞采后病害具有较好的控制效果, 具有潜在的应用前景。     

野生牛肝菌内生真菌分离鉴定及其生物学特性

采用组织分离法从黄皮疣柄牛肝菌、小美牛肝菌、双色牛肝菌的子实体中,分离纯化获得4株内生真菌,经菌落、菌丝、孢子形态学观察及rDNA ITS分子生物学鉴定,结果显示:菌株LCTG-12为盖姆斯木霉(Trichoderma gamsii)、LCCK-6为克鲁伊假丝酵母(Candida kruisii)、BSHC-18为黄瘤孢菌(Hypomyces chrysospermus)、BBFO-10为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysprum)。对4株内生真菌生物学特性进行研究,其中盖姆斯木霉菌丝生长速度较快,在CPDA培养基上,25 ℃培养5 d菌丝长满平板;液态培养时,该菌株在25 ℃、摇床转速160 r/min、pH5.5、8 d,可获得菌丝干基生物量4.13 g/L。平板对峙实验结果:盖姆斯木霉LCTG-12对黄瘤孢菌BSHC-18和尖孢镰刀菌BBFO-10菌丝生长均有拮抗作用,并且,黄瘤孢菌BSHC-18和尖孢镰刀菌BBFO-10两者之间也具有拮抗作用,表明牛肝菌内生真菌中盖姆斯木霉对腐败菌具有拮抗作用,可为生物防腐提供优良的菌株。     

玉露香梨采后病原菌分离鉴定及其生物学特性研究

真菌侵染造成的腐烂是影响玉露香梨采后贮藏的主要因素。为明确导致玉露香梨采后腐烂的病原菌种类及其生物学特性,对其采后病原菌进行分离纯化,结合形态学和分子生物学特征确定其种类,并明确在不同温度、pH、碳源和氮源条件下病原菌的生长情况。结果表明:Alternaria alternata、Aspergillus、Penicillium polonicum和Fusarium是导致玉露香梨采后腐烂的主要病原菌。Alternaria alternata和Fusarium的最适生长温度为25~30 ℃,而Aspergillus和Penicillium polonicum最适生长温度分别为25~35 ℃和20~25 ℃;Alternaria alternata和Aspergillus的最适生长pH分别为6~10和7,而Penicillium polonicum和Fusarium最适生长pH则均为5~7;Alternaria alternata和Penicillium polonicum的最适生长碳源分别为葡萄糖和甘露醇,Aspergillus和Fusarium最适生长碳源为麦芽糖;Alternaria alternata、Aspergillus和Fusarium最适生长氮源为牛肉膏,而Penicillium polonicum最适生长氮源为蛋白胨。     

Mould and yeast flora in fresh berries, grapes and citrus fruits

Fresh fruits are prone to fungal contamination in the field, during harvest, transport, marketing, and with the consumer. It is important to identify fungal contaminants in fresh fruits because some moulds can grow and produce mycotoxins on these commodities while certain yeasts and moulds can cause infections or allergies. In this study, 251 fresh fruit samples including several varieties of grapes, strawberries, blueberries, raspberries, blackberries, and various citrus fruits were surface-disinfected, incubated at room temperature for up to 14 days without supplemental media, and subsequently examined for mould and yeast growth. The level of contamination (percent of contaminated items/sample) varied depending on the type of fruit. All raspberry and blackberry samples were contaminated at levels ranging from 33% to 100%, whereas 95% of the blueberry samples supported mould growth at levels between 10% and 100% of the tested berries, and 97% of strawberry samples showed fungal growth on 33-100% of tested berries. The most common moulds isolated from these commodities were Botrytis cinerea, Rhizopus (in strawberries), Alternaria, Penicillium, Cladosporium and Fusarium followed by yeasts, Trichoderma and Aureobasidium. Thirty-five percent of the grape samples tested were contaminated and supported fungal growth; the levels of contamination ranged from 9% to 80%. The most common fungi spoiling grapes were Alternaria, B. cinerea and Cladosporium. Eighty-three percent of the citrus fruit samples showed fungal growth at levels ranging from 25% to 100% of tested fruits. The most common fungi in citrus fruits were Alternaria, Cladosporium, Penicillium, Fusarium and yeasts. Less common were Trichoderma, Geotrichum and Rhizopus.     

进口鲜葡萄市场病害的检测与分析

对上海市场销售的进口葡萄进行了市场病害的检测,在原产于美国和智利的红地球葡萄（red-globe grape）中检出了链格孢（Alternaria spp）、灰霉（Botrytis cinerea）、芽枝霉（Cladosporium spp）和匐柄霉（Stemphulium sp）四个属的潜伏病原真菌,其中Alternaria spp在健康果实中的检出率高达65.8%,携带外来菌的可能性较大。同时进口红地球葡萄存在较严重的SO2伤害,在所检测的样品中有伤害症状的果粒占所检测果粒数的比率最高可达92%。     

采前水杨酸处理对红地球葡萄潜伏侵染及采后灰霉病的防控效果

为明确采前水杨酸处理对葡萄潜伏侵染及采后灰霉病的影响,本研究首先分离并鉴定红地球葡萄生长过程中的主要潜伏侵染真菌,并研究水杨酸（salicylic acid,SA）对灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）的抑菌效果及对果实抗性基因的诱导作用。本文以新疆红地球葡萄为试材,选取0（对照）、0.5、1.0、2.0 mmol/L水杨酸（SA）在膨大期、转色期和采收前2 d （预收期）喷施处理葡萄果穗,采用组织分离法分离不同时期潜伏侵染果实的病原真菌,通过形态学和分子生物学方法,对病原菌进行分类鉴定,明确主要潜伏侵染真菌的种类,统计果实采后损伤接种Botrytis cinerea后病斑直径和发病率的变化,并分析果实相关抗性基因的表达情况。结果表明:采前SA处理可以显著降低果实生长期间潜伏真菌率,对葡萄果实不同部位的潜伏侵染控制效果显著,1.0 mmol/L SA处理组优于其它组,其中对果实底部和果蒂潜伏侵染的控制效果优于顶部和果梗。此外,生长期果实共鉴定出4种主要潜伏病原真菌,分别为灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）、互隔交链孢霉（Alternaria alternate）、变色青霉（Penicillium discolor）和黑曲霉（Aspergillus niger）。1.0 mmol/L SA处理能显著抑制B.cinerea侵染造成灰霉病发病率上升和病斑直径的扩大,SA处理可在贮藏前期诱导采后葡萄果实VvPAL1、VvChi4D和VvGlu1基因的表达,中期后期诱导VvPAL2、VvPAL7和VvPAL15的基因表达,起到提高果实抗病性。因此,SA采前处理能提高红地球葡萄对潜伏侵染病害的抗性,对采后灰霉病也有较显著的抑制效果。     

蓝莓果实常温贮藏过程中表面病原真菌的分离与鉴定

蓝莓果实采后常温贮藏过程中极易腐烂变质,严重影响了蓝莓果实的贮藏品质。以"蓝丰"蓝莓果实为试材,通过对采后常温贮藏过程中自然发病果实表面病原菌的分离与筛选,明确蓝莓腐烂的主要病原菌的种类。采用传统混菌法对表面病原真菌进行培养和纯化,经形态学观察分析,初步确定蓝莓表面病原真菌种类,并进行返接试验再确定。最终采用真菌ITS区特异性引物对所分离的蓝莓病原真菌ITS区进行PCR扩增,测序后比对分析确定蓝莓果实常温贮藏过程中的表面病原真菌为青霉、产黄青霉和链格孢霉。分别确定各菌种的最适生长温度,其中青霉、产黄青霉和链格孢霉的最适生长温度分别为28,26~28℃和26℃。本研究结果为蓝莓果实贮藏保鲜过程中病害的预防和控制提供了理论依据。     

一例茶饮料污染源的分析

某企业生产的一批茶饮料中发现某些产品变质,3份样品出现pH值下降,或产气胀罐现象,或有肉眼可观察到浑浊、变色等感官指标的变化。检测发现引起腐败变质的主要是细菌,其数量≥104 CFU/mL,4株主要污染菌菌株经16S rDNA序列比对,鉴定为假单胞菌属(Pseudomonas sp.)、肠杆菌属(Enterobacter sp.)、芽胞杆菌属(Bacillus sp.)和短芽孢杆菌(Brevibacillus sp.)。样品中还有数量很低(101～102 CFU/mL左右)的霉菌检出,经形态观察初步鉴定为交链孢霉(Alternaria spp.)、枝孢霉(Cladosporium spp.)、曲霉(Aspergillus spp.)和青霉(Penicillium spp.)。该案例中霉菌虽然不是主要的腐败变质菌,但是其菌相组成与空气中主要的霉菌菌相一致,显示该污染的源头可能是空气,细菌的组成也能支持这个推论。实践中,通过更换无菌空气过滤器,确实解决了污染问题,证实了该推论。