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1.
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3.
目的筛选出口蹄疫病毒(FMDV)基因组上适于设计siRNA的基因片段。方法以FMDV WFL株RNA为模板,用3′RACE法扩增出2C-P3-3′NCR序列,将PCR扩增片段克隆到pMD18-T载体上,转化E.coli DH5α,筛选阳性重组子,进行序列测定,并与参考毒株序列比较。结果扩增的基因片段大小为4033bp,其2C、P3和3′NCR序列的核苷酸序列与参考毒株的同源性分别为87·11%~94·23%、84·91%~96·66%和66·98%~82·35%,2C和P3与参考毒株的氨基酸同源性分别为94·97%~99·39%和91·84%~98·55%,WFL株P3基因的第1150~1270、1680~1840和2080~2490bp以及2C基因的第354~470bp范围内与参考毒株具有高度保守的特性。因此,可以依据siRNA设计原则,在这4个区域内筛选抑制效果好的siRNA。结论成功克隆了FMDV WFL株2C-P3-3′NCR基因的序列,并筛选出4个适于设计siRNA的基因区段。 相似文献
4.
目的研制羊布鲁菌O链M纯化抗原及其单克隆抗体。方法采用冷酚法提纯羊布鲁菌16M的O链抗原,并经琼脂糖凝胶免疫扩散和SDS-PAGE鉴定,用灭活的该抗原免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,并进行鉴定。结果建立3株分泌单克隆抗体的细胞株2D10、3C6和1E10,ELISA效价分别为1.380、1.109和1.048,与大肠杆菌0:157、小肠结肠炎耶尔森菌0:9、鼠伤寒沙门菌和猪胸膜肺炎放线杆菌均无交叉反应。3C6和1E10与牛布鲁菌544A发生交叉反应,2D10的亲和常数达5.30×10~7M~(-1)。结论已制备出纯化的羊布鲁菌O链M抗原及其单抗。 相似文献
5.
目的获得传染性法氏囊病病毒(IBDV)疫苗B87株B节段全长cDNA,并对其序列进行分析,为进一步在分子水平上研究病毒基因组的功能、抗原变异和毒力变异奠定基础。方法使用蛋白酶K和酚/氯仿抽提法提取病毒基因组RNA,用LiCl分级沉淀方法纯化病毒基因组dsRNA,通过RT-PCR一步扩增获得B节段的全长cDNA。将其克隆到pGEM-T载体上,然后测序,并用DNAStar软件进行序列分析。结果测序结果表明,克隆的B87株基因组B节段全长为2827bp,与超强毒参考株UK661和HK46的同源性分别为89.8%和89.3%,与强毒参考株Harbin-1和ZJ2000的同源性分别为90.2%和89.5%;与变异毒株GLS的同源性为97.8%;与弱毒参考株CEF94和Gt株的同源性均为99.8%,与P2株的同源性达100%。结论通过对9株IBDV编码氨基酸序列进行分析、比较,推测B节段上10个独特的氨基酸位点可能与毒力相关。 相似文献
6.
目的建立诊断布病的胶体金免疫层析方法。方法以B.abortus 544A全菌免疫BALB/c小鼠,以杂交瘤细胞技术制备单抗,纯化后以胶体金标记,选择最佳反应模式组装试纸条,并对其进行鉴定。结果已筛选4B8、1G9、1C9和1E24株稳定分泌单抗的细胞株,以其单抗互相配对组合的试纸条均能检出B.abortus 544A菌。其中以1G9为包被抗体、4B8为金标抗体的试纸检测效果最佳,与以B.abortus 544A菌多抗为包被抗体、4B8单抗为金标抗体的试纸对比,检测结果一致,且不与其他菌发生交叉反应。对PCR检测为阳性的70份牛血清样品,两种试纸条检测结果的符合率均为100%。结论所建立的诊断布病的胶体金免疫层析法快速、简便、准确,有望用于布病的诊断。 相似文献
7.
研究了VC环境下西门子840D数控系统的人机界面开发方法。采用UNICODE编程、DDE技术、COM组件及OPC协议开发了脱离于西门子HMI Programming Package开发框架的标准Windows界面,并将所开发的人机界面在840D数控系统上进行模拟,验证了基于VC的840D数控系统人机界面开发方法的正确性。 相似文献
8.
路桥工程作为现代交通网络的重要组成部分,与民众的日常生活息息相关,因此其施工质量成为社会各界的关注焦点.但由于受多方因素的影响,路桥工程在施工过程中经常会出现各种类型的裂缝病害,如果不能够妥善解决,不仅会影响路桥工程本身的建设质量与使用寿命,还会威胁到民众的人身与财产安全.为此,本文通过分析路桥工程施工中的裂缝危害与产... 相似文献
9.
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江苏省昆山市某厂办公楼采用深层搅拌桩基础,桩基静栽试验按79-91《建筑地基处理技术规范》要求进行检测和判定。确定复合地基承裁力时,因取值不当导致检测报告中的承载力偏高,造成质量事故,使建筑物大量沉降,从侧面说明了规范修改取值的必要性。 相似文献