超滤膜分离鲍鱼内脏酶解物及其体外抗氧化活性的研究

利用超滤膜对鲍鱼内脏酶解物进行分离,考察了各分子量段酶解物的成分组成和抗氧化活性。利用截留分子量为10000 u、3000 u、500 u的超滤膜分离得到FA、FB、FC和FD等四个组分中,FA组分的总糖和蛋白含量分别为34.06%和17.20%,而FB、FC和FD等组分主要是由蛋白组成,其游离氨基酸含量分别高达23.20、25.4、28.68 g/100g。根据Tricine-SDS-PAGE和β-消除反应的分析结果,表明FA中位于间隔胶的高分子组分(HMWF)含有N-糖苷键结合的糖蛋白,而分子量为25 ku的成分主要是蛋白。凝胶渗透色谱数据表明FB、FC和FD的分子量主要分布在300 u左右。另一方面,体外抗氧化结果表明,在低浓度下FA组分具有较强的DPPH自由基清除活性和还原力;当质量浓度高于5 mg/m L时,各超滤组分的DPPH自由基清除活性无明显差异,但FB、FC和FD组分的还原力明显高于FA组分;不管是低浓度还是高浓度,FB、FC和FD组分的羟自由基清除活性都明显高于FA组分。     

鲍鱼肽的制备及其抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖作用

将鲍鱼内脏进行蛋白酶解、超滤和纳滤制备鲍鱼肽,研究不同质量浓度鲍鱼肽对体外培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响。结果表明：鲍鱼肽中除含有71.62%（质量分数,下同）蛋白以外,还含有3.38%碳水化合物和11.48%灰分;鲍鱼肽的分子质量主要分布在350～1 000 Da,丰度较高的蛋白肽分子质量分布在350 Da 附近,表明鲍鱼肽中由2～3 个氨基酸组成的寡肽占比较高。根据四甲基偶氮唑蓝法检测的结果,发现不同质量浓度（1、2、4、8 mg/mL）鲍鱼肽均能抑制MDA-MB-231细胞的生长增殖,并呈现出明显的剂量依赖性。伴随鲍鱼肽质量浓度的增加,贴壁细胞数量逐渐减少,细胞变圆,且部分细胞核出现浓缩。流式细胞术分析结果表明,鲍鱼肽主要将MDA-MB-231细胞阻滞在S期和G2期,诱导MDA-MB-231细胞凋亡和坏死,进而抑制肿瘤细胞增殖。因此,利用鲍鱼内脏制备的蛋白肽是一种具有发展潜力的辅助抗肿瘤功能性食品。     

鱼皮胶原肽对人皮肤角质细胞生长的影响

本文考察了鲨鱼皮胶原酶解物(SH)、罗非鱼皮胶原酶解物(TH)及其分离组分对人皮肤角质细胞(HaCat细胞)生长的影响。结果发现,在细胞生长对数期阶段,添加0.05mg/mL或0.20mg/mL的SH可以明显促进HaCat细胞增殖,然而当SH的浓度提高至1.00mg/mL时HaCat细胞却没有出现显著的增殖。虽然TH也可以促进HaCat细胞增殖,但TH浓度对细胞增殖却没有显著的影响。另一方面,不管是鲨鱼皮胶原酶解物还是罗非鱼皮胶原酶解物,利用SephadexG-15凝胶层析分离获得的组分比单组分Gly-Tyr二肽和酪氨酸具有更好的促进细胞增殖能力,在抑制细胞的MDA生成和提高细胞的SOD活力甚至优于谷胱甘肽。这些结果表明,鱼皮胶原制备的酶解物通过凝胶层析分离的组分拥有优越的促进人皮肤角质细胞生长的能力,作为抗氧化肽具有替代谷胱甘肽应用在化妆品的潜力。     

胶原酶解物对双醛淀粉-明胶复合膜性质的影响

本文考察了罗非鱼皮胶原酶解物(TSCH)对双醛淀粉(DAS)交联明胶膜理化性质的影响,探讨了膜对人皮肤永生化角质(Ha Cat)细胞的相容性。结果发现,TSCH添加量从0增加至16%时,DAS交联明胶膜的抗拉伸强度从55.00 MPa下降至24.85 MPa,而断裂延伸率随着TSCH添加量的增加呈现先增大后减小的趋势。DAS交联明胶膜在30℃水中的溶解率为33.10%,当膜中TSCH含量超过4%后,膜的溶解率接近100%。然而,不管TSCH添加量是多少,经过240 min后膜中含有的TSCH全部释放到水中。SDS-PAGE的结果表明,在DAS交联明胶膜中添加的TSCH会阻碍明胶蛋白分子的相互交联作用。另一方面,将Ha Cat细胞培养于DAS交联明胶膜时,Ha Cat细胞活力只有11.39%,当DAS交联明胶膜中含有8%的TSCH时,Ha Cat细胞活力可以达到108.20%。以上结果表明,添加TSCH的DAS交联明胶膜在化妆品领域将具有一定的应用潜力。