桑叶浸出液抑制MDA-MB-231细胞增殖和抑制Survivin蛋白表达

为了研究桑叶浸出液对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和对凋亡抑制蛋白Survivin的作用。本实验采用体外培养MDA-MB-231细胞,倒置显微镜观察桑叶浸出液作用后细胞形态变化;CCK-8法检测桑叶浸出液对MDA-MB-231细胞增殖的影响;流式细胞仪分析桑叶浸出液对MDA-MB-231细胞凋亡及周期的影响;Western Blot印迹法检测桑叶浸出液对凋亡抑制蛋白Survivin表达的影响。结果表明桑叶浸出液会引起MDA-MB-231生长形态的变化,抑制细胞增殖,增加细胞凋亡数量,且在桑叶浸出液作用后MDA-MB-231细胞的G0/G1期细胞明显高于正常组(p<0.05),同时桑叶浸出液降低凋亡抑制蛋白Survivin的表达,且表达量随着桑叶浸出液浓度的升高而降低。研究表明,桑叶浸出液能够抑制MDA-MB-231细胞的增殖,促进细胞凋亡及导致G0/G1期阻滞,同时能够降低凋亡抑制蛋白Survivin的表达。     

飞燕草素对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞糖酵解的影响

目的:探讨飞燕草素对乳腺癌MDA-MB-231细胞糖代谢的影响。方法:以不同浓度的飞燕草素作用MDA-MB-231细胞,CCK-8检测细胞活性,免疫组化染色检测Ki67表达,划痕试验检测细胞的迁移能力;葡萄糖摄取、乳糖和三磷酸腺苷(ATP)测定试剂盒检测MDA-MB-231细胞葡萄糖摄取、乳糖和ATP的生成,己糖激酶(HK)活性试剂盒检测HK活性;蛋白质印迹法检测HK、丙酮酸激酶(PK)、乳酸脱氢酶A(LDHA)和M2-型丙酮酸激酶 2(PKM2)表达。结果:飞燕草素能明显抑制MDA-MB-231细胞增殖,20和40 μmol/L飞燕草素能分别降低细胞存活率至75%和72%(P<0.05);20、40 μmol/L飞燕草素能降低乳腺癌MDA-MB-231细胞Ki67表达阳性的细胞数量,差异有统计学意义(P<0.01);飞燕草素能降低乳腺癌细胞葡萄糖的摄取,降低细胞乳糖和ATP的生成,抑制PKM2、HK和LDHA蛋白的表达,降低p-Akt和p-mTOR蛋白表达。结论:飞燕草素能抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞糖代谢,抑制Akt/mTOR通路活性可能是飞燕草素抑制乳腺癌细胞糖酵解的机制。     

绿豆活性肽对HepG2肝癌细胞增殖的抑制作用

分析绿豆分离蛋白的基本成分,采用木瓜蛋白酶酶解制备绿豆活性肽,通过CCK-8法和显微镜观察,研究绿豆活性肽对HepG2人肝癌细胞增殖活性及细胞形态的影响,并利用高效液相色谱法对其分子质量分布进行测定。结果表明,绿豆分离蛋白的蛋白质含量为91.4%;不同浓度的绿豆活性肽对HepG2细胞生长均有明显的抑制作用,且存在时间效应和剂量效应,48 h和72 h的IC50分别为4.106, 2.148 mg/mL;随着绿豆活性肽作用时间的延长,HepG2细胞逐渐变圆、漂浮,特征形态消失;绿豆活性肽成分较为复杂,分子质量较小且呈不规则分布,主要集中在1 000 u以下,占总量的80.42%,而分子质量在3 000 u以上的部分只占3.27%。绿豆活性肽的体外肿瘤抑制活性显著,具有开发利用的价值。     

5﹣十七烷基间苯二酚对三阴性乳腺癌MDA﹣MB﹣231细胞增殖的抑制作用

为研究5-十七烷基间苯二酚(AR-C17)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的作用及其潜在机制,采用CCK-8方法检测不同处理下的细胞存活率变化;DCF-DA荧光探针法检测活性氧(reactive oxygen species, ROS)变化情况;流式细胞术测定胞内肿瘤增殖标记物Ki-67的表达,细胞凋亡的变化,线粒体膜电位的变化及自噬体的形成情况;蛋白印迹法检测Bax、Bcl-2、LC3-Ⅱ等凋亡、自噬相关蛋白的表达情况。结果表明,与对照组相比,AR-C17显著抑制了MDA-MB-231细胞存活率,促进胞内ROS的生成,降低肿瘤增殖标志物Ki-67的表达,降低线粒体膜电位,上调Bax/Bcl-2的蛋白表达比率,增加活性Caspase的表达量,诱导MDA-MB-231细胞发生线粒体途径的凋亡;同时,AR-C17能够增加LC3-Ⅱ蛋白表达量,促进自噬体形成,诱导细胞发生自噬;此外,采用自噬抑制剂与AR-C17共同作用能够降低细胞存活率,进一步促进细胞凋亡。研究结果表明,AR-C17能够诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞发生凋亡和自噬,达到抑制乳腺癌细胞增殖的作用。     

鲍鱼内脏蛋白肽的理化性质及其抗氧化活性

对鲍鱼内脏蛋白肽（AVP）的基本成分、分子质量分布和氨基酸组成等理化性质和体外抗氧化活性进行探究。以正常组、模型组和GSH组作为对照，考察低、中、高剂量组（125，250和500 mg/kg AVP） 对D-半乳糖致氧化损伤小鼠的影响，评价AVP的体内抗氧化活性。结果显示：AVP 除含主成分蛋白外，还含有5.11%多糖和少量的矿物质元素，分子质量主要分布在180～500 u范围。AVP中疏水性氨基酸和支链氨基酸分别占结构氨基酸的49.77%和22.92%，清除羟自由基和DPPH自由基活性的EC50值分别为1.54 mg/mL和1.51 mg/mL。AVP抑制脂质过氧化的效果优于维生素C。AVP能提高D-半乳糖致衰老鼠中血清和肝脏的SOD活性，降低血清的MDA含量，减缓肝脏组织氧化损伤。以上结果表明利用鲍鱼内脏制备的AVP具有良好的抗氧化活性，可作为天然抗氧化剂应用在生物制品和食品工业。     

鲍内脏蛋白肽抗氧化和免疫调节活性

以鲍内脏为原料,通过碱性蛋白酶酶解,结合超滤方法,制备了鲍内脏蛋白肽样品。经高效液相色谱 检测,分子质量主要分布在192～938 Da,占比76.3%。鲍内脏蛋白肽具有一定的体外自由基清除能力,对1,1-二 苯基-2-三硝基苯肼自由基的最大清除率为32.7%,对羟自由基清除率的半抑制浓度为2.1 mg/mL,对自由基的 清除效果远低于VC。鲍内脏蛋白肽具有较好的体内抗氧化活性,能极显著增强受伤小鼠体内超氧化物歧化酶 （superoxide dismutase,SOD）活力和提高还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）含量,明显降低丙二醛 （malonaldehyde,MDA）和蛋白质羰基含量,鲍内脏蛋白肽中剂量组SOD活力和GSH含量分别提高了33.2%和 1.3 倍,MDA和蛋白质羰基含量分别降低43.9%和40.7%,其效果已接近或超过了阳性对照的水平,且呈现一定的剂 量效应关系。免疫活性实验结果表明,与空白对照组相比,鲍内脏蛋白肽中剂量组小鼠足跖增厚提高了77.1%,抗 体水平提高了28.0%,脾脏指数提高24.9%,胸腺指数提高了1.2 倍,鲍内脏蛋白肽可以从细胞免疫、体液免疫、非 特异性免疫、免疫器官4 个方面增强小鼠免疫功能,且效果优于阳性对照。     

草苁蓉提取物抑制肺癌细胞增殖分子机制的研究

草苁蓉提取物可通过促进肿瘤细胞凋亡抑制A549肺癌细胞增殖。继续探讨草苁蓉提取物(BRE)抑制肺癌细胞增殖的分子机制。采用流式细胞术检测A549细胞周期分布和细胞凋亡,免疫细胞化学法检测凋亡相关蛋白Bax、Bc1-2、P53和Fas蛋白的表达,ELISA法检测sFAS蛋白的表达。结果表明,BRE改变肺癌细胞周期分布,使多数细胞阻滞于G0/G1期。同时,BRE诱导肺癌细胞凋亡,明显增加Fas表达,增加Bax表达和降低Bc1-2表达,但不改变P53表达以及sFas蛋白水平。提示,BRE抗肺癌细胞增殖作用与其改变细胞周期分布、增高Fas表达和降低Bcl-2/Bax比值而诱导肺癌细胞凋亡相关。     

豌豆低聚肽硒螯合物的稳定性研究

以豌豆低聚肽和亚硒酸钠为原料制备豌豆低聚肽硒螯合物,对其水分、酸溶蛋白、总氮、分子质量分布的基础理化性质进行研究,然后以分子质量分布和硒含量为指标对螯合物的热稳定性、酸碱稳定性、消化稳定性进行考察。结果表明,豌豆低聚肽硒螯合物水分含量为(14. 17±1. 12)%(质量分数),酸溶蛋白含量为(23. 22±0. 12)%(质量分数),总氮含量为(23. 87±0. 30)%,分子质量分布在1 000 Da以下的占比超过76%。在温度25～100℃时,分子质量分布在1 000 Da以下的部分比例变化均小于2%,硒含量变化不显著。在pH=3～11,分子质量分布在1 000 Da以下的部分比例变化均小于3%,硒含量虽有一定变化,但含量仍在78%以上。经过胃蛋白酶、胰蛋白酶和2种酶共同消化后,分子质量在1 000 Da以下的部分比例均都在90%以上,而硒含量变化不显著。这说明豌豆低聚肽硒螯合物具有一定的热稳定性、酸碱稳定性和消化稳定性。     

桦褐孔菌提取物抗乳腺癌活性部位筛选及成分分析

以人乳腺癌MDA-MB-231细胞筛选桦褐孔菌抗乳腺癌活性部位,并对其活性部位的成分进行初步分析。采用MTT法检测发酵液不同萃取部位抗乳腺癌活性;通过细胞形态观察进一步了解药物对细胞的影响;划痕试验检测桦褐孔菌活性部位对细胞迁移的影响;采用LC-MS/MS对活性部位的成分进行分析。结果表明,桦褐孔菌石油醚萃取部位对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用最强,且呈量效和时效关系,作用24 h的IC50值为76.17μg/mL;细胞形态观察显示石油醚萃取部位对乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡作用随着药物质量浓度的升高而加强;划痕实验显示,药物对细胞迁移有较强的抑制作用;LC-MS/MS数据初步表征了其中的14个化学成分,初步鉴定了其中的10种成分,这10种成分首次从桦褐孔菌中得到鉴定,虽然其他4个物质未能鉴定,但亦对其相对分子质量和分子式进行了初步表征。证实了石油醚部位是桦褐孔菌抗乳腺癌MDA-MB-231细胞的主要活性部位,能抑制乳腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡,为进一步开发利用桦褐孔菌食药用资源提供科学依据。     

响应面优化鲍鱼内脏抗氧化肽制备工艺及其活性

利用鲍鱼内脏结缔组织为原料,通过酶解法制备内脏多肽,研究鲍鱼内脏蛋白的抗氧化性。考察底物质量分数(1%～5%),酶添加量(3 000～15 000 U/g),酶解温度(40～60℃),酶解时间(1～5 h), pH (5.5～7.5)对鲍鱼内脏抗氧化性的影响;在单因素的基础上结合响应面法,以DPPH自由基清除率为指标,优化出抗氧化肽的最佳制备工艺,进一步研究其体外抗氧化活性。结果表明,风味蛋白酶为最适水解酶,在底物质量分数4.29%、酶添加量10 533.76 U/g、酶解时间3.87 h、酶解温度50℃、pH 6.5,抗氧化肽的酶解效果最佳;在该条件下DPPH自由基清除率达89.18%,其清除DPPH自由基、羟自由基、ABTS自由基的IC_(50)分别为4.61 mg/mL, 16.24 mg/mL和17.41 mg/mL。说明鲍鱼内脏结缔组织能够制备得到良好抗氧化性的蛋白肽。     

羊肚菌多糖抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和诱导细胞凋亡研究

以黑脉羊肚菌多糖为原料,研究羊肚菌多糖对人乳腺癌细胞MDA-MB-231（以下简称MDA）增殖和凋亡的影响。结果表明：在无细胞毒性范围内,羊肚菌多糖能显著抑制人乳腺癌细胞MDA的增殖,半数有效浓度（median effective concentration,EC50）值为0.096 mg/mL,同时人乳腺癌细胞MDA表现出多种细胞凋亡的形态学变化。免疫印迹检测实验结果显示,羊肚菌多糖能抑制B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）蛋白表达,促进Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）表达,同时增加Bax/Bcl-2蛋白表达比值,并呈现出剂量依赖效应。说明羊肚菌多糖能抑制人乳腺癌细胞MDA增殖,促进细胞凋亡。     

远红外锦纶织物对乳腺肿瘤细胞增殖的影响

为探究远红外织物对乳腺肿瘤患者的辅助治疗效应,使用6种不同的远红外锦纶织物和普通锦纶织物对MCF7、Bcap37和MDA-MB-231 3种乳腺癌细胞进行辐射培养,对比分析了织物材料以及辐射时长对3种乳腺癌细胞增殖的影响。结果表明:不同远红外锦纶织物的远红外光发射率有所差异,其中茶叶碳锦纶的远红外光发射率在6种远红外织物中最强;6种远红外织物可不同程度地抑制MCF7和Bcap37 乳腺肿瘤细胞的增殖,对MDA-MB-231细胞也有抑制作用但不显著;随着远红外光辐射时长的延长,远红外锦纶织物的远红外光发射率越高,其抑制乳腺肿瘤细胞增殖的效果越显著,从细胞生物学角度说明远红外织物可抑制且不促进乳腺肿瘤细胞的增殖,为探究穿戴远红外织物作为乳腺癌患者的辅助治疗提供理论参考。     

Fractionation and purification of antioxidant peptides from abalone viscera by a combination of Sephadex G-15 and Toyopearl HW-40F chromatography

Abalone viscera, a protein-rich by-products from the abalone processing industry, are normally discarded as wastes. In the present study, four different proteases were used to hydrolyse abalone viscera to prepare high-activity antioxidant peptides, and their hydrolysis effects were compared. Although the hydrolytic abilities of papain and trypsin were inferior to the alcalase and neutrase, their use resulted in significantly (P < 0.05) higher scavenging activities for DPPH. The hydrolysates mainly consisted of peptides with a molecular weight <3 kDa, and the fractionation was achieved using a combination of Sephadex G-15 and Toyopearl HW-40F gel filtration chromatography, which overcomes the disadvantages of traditional membrane separation technology in fractionating peptides with relatively similar molecular weight distribution. The DPPH scavenging activities of the components containing peptides <1 kDa (fractions E) were significantly (P < 0.01) higher than those containing peptides >1 kDa. The different fractions E were further purified by reversed-phase high-performance liquid chromatography, and a total of 16 target peptides, containing 4-8 amino acids, enriched in hydrophobic amino acids and C-terminal Arg, with molecular weights ranging from 500 to 850 Da, were identified.     

酶法制备壳寡糖及其抗肿瘤活性评价

为进一步分析壳寡糖抗肿瘤活性及其机制,采用酶法制备工艺获取组分清晰的壳寡糖,优化酶解条件为酶解时间4 h、加酶量120 U/g,结合乙醇沉淀、超滤和纳滤联用的工艺获得聚合度2～4的壳寡糖。比较评价壳寡糖及其与阿霉素联用对3种肿瘤细胞的抑制效果,其中作用最为明显的人乳腺癌MDA-MB-231的细胞生存率降低20%。利用细胞迁移实验和激光共聚焦分析机制,得出壳寡糖可抑制MDA-MB-231细胞迁移并促进阿霉素入核。由此说明,壳寡糖可增强MDA-MB-231细胞对阿霉素的敏感性。     

In vitro cytomodulatory and immunomodulatory effects of bovine colostrum whey protein hydrolysates

Bovine colostrum possesses biological compounds involved in the development of the newborn. Among them, the proteins have drawn attention as a source of bioactive peptides. This study shows the in vitro cytotoxic and immunostimulatory potential of two colostrum whey protein (CWP) hydrolysates obtained by in vitro digestion with pepsin and pancreatin. MTT cell viability, apoptosis induction, polymorphonuclear proliferation and phagocytic activity assays were performed. Treatment with the hydrolysates induced a significant decrease in the viability of MDA-MB-231 cell lines due to apoptosis and also a significant increase in the proliferation of blood mononuclear cells. It could also be observed that for the RM-1 and PC-3 prostate cancer cell lines and for the two times of exposure (24 and 48 h), the hydrolysate H1 is significantly more cytotoxic than CWP. These results showed the potential of bovine CWP and its hydrolysates for the treatment of chronic diseases such as cancer.     

皱瘤海鞘抗人肺癌A549细胞组分的分离纯化及化学成分分析

采用四氮甲唑蓝比色法检测皱瘤海鞘（Styela plicata）被囊及内脏团甲醇提取物对体外培养的人肺癌A549细胞增殖的抑制作用,利用倒置显微镜、流式细胞仪及荧光显微镜观察,分析其对A549细胞的形态和细胞凋亡的影响,并且用气相色谱-质谱联用（gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS）技术分析高活性组分6号内脏团柱层析组分（column eluted fraction 6 from visceral methanol extract,VCEF-6）的化学成分。结果表明：在低质量浓度（25～75 μg/mL）范围内,被囊及内脏团醇提物对A549细胞生长没有抑制作用,当质量浓度增大到100 μg/mL以上时,被囊及内脏团醇提物表现出对A549细胞明显的生长抑制作用。醇提物柱层析组分的体外抗肿瘤检测表明,共有8 个组分在100 μg/mL时对A549细胞表现出明显的生长抑制作用,其中VCEF-6抑制A549细胞生长活性最强,24 h时半数抑制浓度为168.7 μg/mL。通过流式细胞术以及荧光显微镜观察表明,VCEF-6抑制肿瘤细胞生长与诱导细胞凋亡有关。GC-MS分析VCEF-6的化学成分结果表明,VCEF-6含有22 种已知物质,其中甾醇类6 种、烷烃类6 种、脂肪酸酯类6 种、芳香族化合物4 种。综上所述,在体外实验中VCEF-6能够抑制A549细胞生长并诱导其凋亡。     

促成骨细胞增殖活性骨胶原蛋白肽的靶向筛选及活性分析

酶法制备的骨胶原蛋白肽为混合肽,通常具有多种潜在的生物活性,但目前缺乏基于促成骨细胞增殖活性的靶向性研究。本实验以酶法制备的牦牛骨胶原蛋白肽为原料,采用高效液相色谱法与纳米液相色谱-串联质谱法分别测定混合肽的分子质量与序列构成,基于与表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）的CDOCKER半柔性对接,靶向筛选具有潜在促成骨细胞增殖活性的骨胶原蛋白肽,并进行体外细胞增殖培养验证。结果表明,共鉴定得到78 条牦牛骨胶原蛋白肽,主要以低分子质量肽段为主（小于3 000 Da的组分占91.8%）,通过与EGFR对接发现,多肽GPAGPQGPRGDKGETGEQ（GP-18,1 736.815 Da）、TPEVDDEALEKFDK（TP-14,1 634.775 Da）、GPAGPQGPRGDKGETGE（GP-17,1 608.757 Da）、GKSGDRGETGPAGPAGPIGPV（GK-21,1 875.951 Da）和GKSGDRGETGPAGPAGPIGPVG（GK-22,1 932.973 Da）具有潜在促成骨细胞增殖活性。小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1细胞培养实验结果表明,3.0 mg/mL GK-22促成骨细胞相对增殖率达106%,显著高于空白组（P＜0.05）。本研究可为促成骨细胞增殖活性肽的靶向筛选和工业化制备提供理论参考。     

Cell proliferation inhibitory and apoptosis-inducing properties of anacardic acid and lunasin in human breast cancer MDA-MB-231 cells

The combination of two or more chemopreventive agents is currently being used to achieve greater inhibitory effects on breast cancer cells. Anacardic acid and lunasin are two plant-derived compounds that have been associated with anti-carcinogenic properties. These compounds show inhibitory effects on cell proliferation and inducing properties of apoptosis in human breast cancer MDA-MB-231 cell line. Both lunasin and anacardic acid exert their effects through the modulation of expression of several genes involved in cell cycle, apoptosis and signal transduction. Their combination arrests the cell cycle in S-phase and induces apoptosis at higher levels than that observed when each compound is used individually. This combination also promotes the inhibition of ERBB2, AKT1, JUN and RAF1 signalling gene expression, whose up-regulation has been reported as responsible for breast cancer cells growth and resistance to apoptosis. Our results introduce these two compounds as a promising strategy to prevent/treat breast cancer.     

朝鲜族大酱中异黄酮的提取工艺优化及其抗肿瘤活性研究

为优化朝鲜族大酱异黄酮的提取工艺,并研究朝鲜族大酱中异黄酮的抗肿瘤活性,本实验用超声波法提取朝鲜族大酱中的异黄酮,通过单因素实验和正交实验优化其提取工艺,并通过CCK-8法对正常乳腺细胞、MDA-MB-231和MCF-7两种乳腺癌细胞的增殖抑制情况进行了测定,用Western Blot法检测了朝鲜族大酱中异黄酮处理后的两种乳腺癌细胞凋亡相关蛋白的表达情况。通过单因素和正交试验确定其最佳提取条件为提取时间80 min、料液比1:24、温度50 ℃,此时得率最高,为0.802%。CCK-8结果显示,不同浓度的朝鲜族大酱异黄酮对正常细胞无毒副作用,对MDA-MB-231和MCF-7两种乳腺癌细胞的增殖抑制情况均呈剂量-时间依赖性,且均有显著性差异(p<0.05)。对不同浓度朝鲜族大酱异黄酮处理过的两种细胞凋亡相关蛋白的检测结果显示,两种细胞随着异黄酮浓度的增加,其促凋亡蛋白Bax,caspase-3的表达量与空白对照组相比均显著上升(p<0.05),而抗凋亡蛋白Bcl-2的表达量显著下降(p<0.05),且呈现剂量依赖性。表明朝鲜族大酱异黄酮对乳腺癌细胞的生长能够起到抑制作用。