玉米细菌性枯萎病菌EGase内切葡聚糖酶蛋白纯化研究初探

目的研究玉米细菌性枯萎病菌EGase内切葡聚糖酶蛋白纯化的方法。方法以玉米细菌性枯萎病菌(Pantoea stewartii subsp.stewartii)菌株为材料,分离纯化其内切葡聚糖酶Egase。制备EGase浓缩液,浓缩液经Sephradex~(TM)G-75凝胶过滤层析和DEAE-Sephorose Fast Flow阴离子交换柱层析等提纯步骤,获得了凝胶电泳均一的内切葡聚糖酶。结果经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测为一条电泳带,纯化后的EGase是单体蛋白,分子量约为72.3 k Da。Egase酶反应的最适温度是60℃,最适pH为5.0。结论本研究从玉米细菌性枯萎病菌中分离得到了一种新的内切葡聚合糖酶,对其部分性质进行了表述,为后续EGase基因的克隆及表达研究提供了研究基础。     

基于HDA的超级细菌耐药基因NDM-1检测方法的建立

本研究以建立解旋酶DNA恒温扩增(HDA)检测方法为目的,选择三种超级细菌NDM-1基因(metallo-beta-lactamase 1 gene)为目的基因,设计并合成特异性引物,建立和优化了可快速检测该种基因的HDA检测方法。特异性和灵敏度检测结果表明:该方法对NDM-1基因检测具有特异性,最低检测限可达10fg/μL,灵敏度高于普通PCR。提示HDA是一种针对NDM-1的快速、灵敏、便捷的非PCR核酸扩增技术。     

进境多肉植物细菌性褐腐病的病原分离与鉴定

目的通过对病变叶片进行细菌的分离鉴定,明确韩国进境多肉植物上叶片褐色腐烂病斑的病原。方法采用组织分离法,从韩国进境多肉植物叶片中分离纯化到1株细菌菌株,对该菌株进行了鉴定和生物学特性研究。结果形态及培养特征、生理生化特性的研究结果表明该菌株在营养琼脂(nutrient agar,NA)培养基上单菌落圆形淡黄色,边缘整齐。菌体直杆状,周生鞭毛运动,无芽孢,为革兰氏阴性菌。经形态鉴定、培养特征、生理生化、致病性测定及16S rDNA序列分析,确认引起该多肉植物发生褐腐病的病原是菠萝泛菌(Pantoea ananatis)。结论经过对发生细菌性褐腐病的叶片进行病原分离与鉴定,有效阻止了菠萝泛菌的远距离传播。     

分子生物学鉴定印度进口花生中的花生豆象的探究

目的探究以分子生物学技术和系统进化学手段鉴定具有完整生命周期的花生豆象(印度)的方法。方法对花生豆象线粒体细胞色素C氧化酶亚基I (COI)基因进行PCR扩增,获得COI基因序列,再利用最大简约法(maximum parsimony, MP)构建花生豆象与其他14种豆象基于COI基因片段序列的分子系统进化树,分析亲缘进化关系。结果通过GenBank BLAST证明所得序列为花生豆象的COI基因序列,由GenBank获得登录号。根据系统进化树得出同一地区的四纹豆象和花生豆象亲缘关系较近。结论本研究为采用分子生物学检疫鉴定进境花生豆象奠定了基础。     

玉米内州萎蔫病菌的巢式PCR检测方法

目的建立了一种特异、敏感、快速的玉米内州萎蔫病菌的巢式PCR(Nest-PCR)检测方法。方法根据玉米内州萎蔫病菌(Clavibacter michiganensis subsp.Nebraskensis,Cmn)和C.michganensis种下其他4个亚种细菌Cmm、Cmi、Cms、Cmt的ITS序列差异性基因位点设计Cmn FP-OUTER/Cmn RP-OUTER为外侧引物,Cmn FP-INNER/Cmn RP-INNER为内侧引物的巢式-PCR,并对所有参试菌株DNA和菌悬液进行了扩增。结果经过两轮扩增,能从参试的玉米内州萎蔫病菌中特异性地扩增出1条122 bp的片段,而其他参试菌株没有扩增信号。该巢式PCR检测方法对菌悬液的最低检测限为3.54×102 CFU/m L,检测灵敏度比常规PCR提高了1000倍。结论本研究建立的玉米内州萎蔫病菌的巢式PCR(nest-PCR)检测方法具有良好的特异性和灵敏性,将会在玉米内州萎蔫病的早期诊断及预防传入方面发挥重要作用。     

构建进口高风险食品境外生产企业质量信用体系

随着食品贸易的全球化,食品安全事件不断涌现,进口食品,如进口婴幼儿奶粉、肉类、罐头、燕窝等也屡屡出现问题。目前对进口食品的监管手段仅以注册和入境检验为主,难以涵盖整个过程,再加之不同国家的食品领域的法律法规体系、检测体系、技术标准体系及相应的制度参差不齐,水平不等,因此仅仅依靠目前手段解决进口食品安全监管中的漏洞是不够的,需要探索关头前移和源头控制的管理方法。本研究从进口高风险食品境外生产企业质量信用体系建设入手,建立进口食品安全保障长效机制。首先分析了构建进口高风险食品境外生产企业质量信用体系的必要性,既要保证进口食品的质量安全,又要提高贸易便利化,提高通关效率。随后从政府机构、境外生产企业、进口商以及消费者4个层面剖析了存在的问题,从法律法规、标准化、信用记录等若干方面提出了可行性解决方案。为促进进口企业信用意识和提高产品质量,提供了严密的监管,且提高了效率。     

旅邮检口岸截获杂草疫情分析及防控

目的研究旅邮检口岸截获杂草的疫情现状,探讨防控杂草疫情扩散传播的有效措施。方法统计2011～2015年旅邮检口岸截获杂草的种属类别、频次高低以及来源分布地区和年度截获量的数据信息,分析杂草疫情风险。结果部分体积小、重量轻、带附属结构的杂草种类较易扩散传播,这些入侵的外来杂草能够对生态环境及农业安全生产带来危害。杂草来源地区分布较广,但来源于周边国家和地区的频次较高,年度截获杂草总量呈现逐年递增的趋势。结论旅邮检口岸通过引入先进的智能检测设备并且提升查验人员的专业素质,可以有效减少外来入侵杂草通过口岸入境的数量;通过加强法制宣传结合行政处罚的方式能够有效控制人为因素造成的疫情传播。这些措施能够防止疫情通过旅邮检口岸扩散传播到国内。     

入境动物产品携带杂草疫情分析

系统分析2011~2015年山东口岸进境动物产品中杂草疫情的截获情况,旨在掌握进境动物产品中杂草截获的种类和规律,并有针对性地提出完善检疫监管措施的对策。共截获2407批次的杂草,其中检疫性杂草3科10属30种(属)52批次。按照来源国统计,从来自26个国家和地区的动物产品中截获杂草,其中以澳大利亚截获杂草批次和种次数最多,占到整个截获量的57.2%。根据以上情况分析,应加强进境动物产品中皮、毛的检疫力度。建议从风险评估、产地预检、检疫监管和处理、疫情监测、加强宣传沟通等多方面制定措施,建立外来杂草入侵防范体系,以有效防止外来有害杂草随寄主携带入侵我国。