生鲜畜禽肉中沙门氏菌全基因组分析与分子溯源

依据GB 4789.4—2016对从长沙市生鲜市场随机采集的生鲜猪肉、鸡肉进行检验。结果显示:有20份生鲜猪肉样品检出沙门氏菌,检出率为83.3%;有20份生鲜鸡肉样品检出沙门氏菌,检出率为74.1%;总检出率为78.4%。通过对其中40株沙门氏菌进行全基因组测序与分子溯源研究,结果表明:20株猪源性沙门氏菌与20株鸡源性沙门氏菌按分子溯源分析可分为5个明显不同的聚类,清晰反映了沙门氏菌的污染源分布及交叉污染情况,实现了精准溯源;其中发现了15个致病基因,从基因层面阐明了沙门氏菌可能存在的致病基因与致病机制,提示了沙门氏菌潜在的致病风险;试验发现了15个耐药基因,从基因层面阐明了沙门氏菌可能存在的耐药基因与耐药机制。     

野生型金黄色葡萄球菌肠毒素A基因的克隆与分析

根据A、B、C和D肠毒素基因的序列设计特异引物,采用聚合酶链式反应(PCR)方法对食品中的金黄色葡萄球菌进行检测和鉴定肠毒素基因型,并进一步克隆肠毒素基因。结果表明,待检食品中的金黄色葡萄球菌的肠毒素基因为A型,序列长为774bp,编码257个氨基酸残基,同其他肠毒素A高度相似,等电点为8.85,是一种膜结合蛋白,功能结构域和三位结构预测分析发现此蛋白含有肠毒素家族结构域和肠毒素C家族结构域。     

非洲猪瘟病毒核酸荧光定量PCR检测方法研究

目的 建立非洲猪瘟病毒核酸的荧光定量PCR检测方法, 并与微滴式数字PCR检测方法的优缺点进行比较。方法 根据非洲猪瘟病毒保守基因VP72和K205设计合成引物和探针, 探究荧光定量PCR检测方法的反应条件和方法的特异性、线性、灵敏性和重复性, 及其与微滴式数字PCR检测方法灵敏度差异。结果 本研究建立的非洲猪瘟病毒核酸荧光定量PCR检测方法检出限达到0.1 fg/反应, 在0.1~500.0 fg/反应范围内呈现良好的线性关系, 检测重复性变异系数均低于1%, 不与猪瘟病毒、猪蓝耳病毒发生交叉反应。结论 本研究建立的荧光定量PCR法灵敏度高、特异性强, 适用于猪肉及其制品中非洲猪瘟病毒的检测。     

美藤果油的化学成分特征研究

目的：解析进口美藤果油中三酰甘油（triacylglycerol,TAG）、脂肪酸甲酯（fatty acid methyl esters,FAMEs）、生育酚以及多酚等常见的植物油成分特征。方法：本研究采用高效液相色谱（high-performance liquid chromatography,HPLC）结合光电二极管阵列（photo-diode array,PDA）、荧光成像（?uorescence,FR）、常压化学解离器（atmospheric pressure chemical ionization,APCI）、电喷雾电离器（electro-spray ionization,ESI）、气相色谱火焰离子检测器（gas chromatography flame ionization detector,GC-FID）以及质谱（mass spectrometry,MS）技术,对冷榨获得的美藤果油中的TAG、多酚、生育酚以及FAMEs等主要化学成分特征进行解析。结果：不饱和脂肪酸甲酯大约占FAMEs总量的93%。其中,含量最多的是亚油酸（linoleic,L）和亚麻酸（linolenic,Ln）,含量分别达到了50%和36%。主要的TAG类型包含LLnL、LnLnLn和LnLLn三类,LnLLn型约为22.2%。生育酚中,γ-生育酚的含量最高,超过了生育酚总量的50%。多酚成分中,21种类型的多酚通过PDA和MS质谱信息被完整地解析出来。结论：美藤果油富含的L和Ln以及大量生育酚等营养物质,是一种优质食用油。     

饮用水中铜绿假单胞菌全基因组分析与分子溯源

目的：为湖南省饮用水中铜绿假单胞菌的溯源研究和污染防治提供数据支持。方法：按GB 8538—2016检验湖南省部分市县随机采集的桶装水，对分离鉴定的18株铜绿假单胞菌进行全基因组测序、分子溯源以及毒力基因和耐药基因分析。结果：通过系统进化树分析可知，18株铜绿假单胞菌有明显的聚类分布，清晰反映了样本菌株的亲缘远近情况；通过统计分析毒力基因和耐药基因，证实4株铜绿假单胞菌在地域分布、同源性、致病基因和耐药基因型上呈现一致性，推测为同一来源。结论：基于全基因测序、16S rRNA和单拷贝直系同源分析，可实现饮用水中铜绿假单胞菌的溯源、毒力基因及耐药基因分析。