多重实时荧光定量PCR快速检测婴幼儿奶粉中沙门氏菌、克罗诺杆菌和金黄色葡萄球菌

目的建立多重实时荧光定量PCR(multiplex quantitative real-time PCR,multiplex qPCR)快速检测奶粉中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和克罗诺杆菌3种常见致病菌的方法。方法筛选目标菌株的特异性引物与探针,优化反应体系,建立稳定的多重q PCR反应体系。通过阳性菌株加标的方式验证体系的特异性,并确定人工污染奶粉的检出限。结果各对引物探针对目标菌株均能扩增,多重实时荧光PCR未发现交叉反应,对17株非目标菌进行检测均未检出,人工污染奶粉中克罗诺杆菌和沙门氏菌的检出限均为10~3 CFU/mL,金黄色葡萄球菌的检出限为10~4 CFU/mL。结论本研究方法可实现婴幼儿奶粉样品中3种致病菌qPCR高效率检测。     

皮革肉面纤维束与人造革底基纤维的扫描电镜观察和X射线能谱分析

对多种天然皮革肉面纤维束及人造革底基纤维的形态结构进行了扫描电镜(SEM)观察,并且利用X射线能谱仪(EDS)对上述多种纤维进行了元素分析。结果表明,皮革肉面纤维束与人造革底基纤维在元素组成与形态结构等方面存在着显著性差异。本研究方法与理论可为皮革的鉴别与分类等提供参考依据。     

牛皮革PCR鉴别方法研究

本研究比较了不同的DNA提取方法,最终运用苯酚-氯仿抽提法成功地从牛皮革样品中提取获得质量较高的DNA,建立了牛皮革DNA的提取方法。该方法充分考虑了皮革材料的特殊性,利用裂解缓冲液释放皮革中的核酸,采用高浓度盐溶液除去溶液中的蛋白质,用苯酚、氯仿混合溶液进一步除去蛋白,最终获得纯化的皮革DNA。根据牛线粒体基因序列设计特异性的扩增引物,成功地从皮革样品DNA中扩增出271 bp的牛内源基因片段。本方法通过分析皮革样品中的遗传学信息来鉴定皮革种类,特异性强、灵敏度高,可广泛应用于皮革的鉴别与分类中。     

食品接触材料中3种致病菌的多重荧光PCR检测

建立并优化食品接触材料中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和副溶血性弧菌3种致病菌的多重实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法,评价此方法的特异性和灵敏度,并模拟阳性样品进行检测。结果显示,该方法特异性良好,检测灵敏度均能达到10~3 CFU/mL,为食品接触材料的微生物检测提供技术保障。     

食品接触材料表面细菌生物被膜形成能力的研究进展

食品接触材料的安全性是食品安全领域的重要问题,材料表面的粗糙度、电荷、亲水性能都可影响食源性致病菌的粘附,而细菌粘附往往是生物被膜形成的第1个阶段。文章主要从玻璃、不锈钢、纸质材料等常用食品接触材料表面细菌生物被膜形成能力方面进行了综述,为进一步预防控制食源性疾病提供理论依据。     

多重RT-PCR法检测燕窝及其制品掺伪成分

目的建立一种食用燕窝中主成分及掺伪成分的双重和三重实时荧光PCR检测方法。方法本研究通过合成金丝燕成分、银耳成分、红藻成分特异性的引物和探针,建立燕窝中主成分及掺伪成分的双重和三重实时荧光PCR检测体系,并设计相应的特异性实验保证检测体系的准确性,最后使用所建立的方法对市售样品进行检测并收集数据,验证多重实时荧光PCR检测方法的适用性。结果本方法可在1 d内完成样品的检测,建立的体系对金丝燕成分、银耳成分的检测灵敏度为0.1 ng/μL,红藻成分的检测灵敏度为0.5 ng/μL;燕窝中掺入银耳的检测限可达到0.1%;燕窝中掺入石花菜的检测限可达到0.5%。结论本研究建立的多重实时荧光PCR检测方法具有准确、灵敏度高、特异性好的优点,可用于燕窝及其制品中掺假物成分的准确定性检测。     

羊乳制品中动植物源性成分多重RT-PCR方法研究

羊乳制品因其营养丰富的特点受到消费者的青睐,但也容易成为乳制品掺假的主要目标。通过合成羊源性、牛源性、植物源性成分特异性的引物和探针,建立羊-牛-植物3种源性成分的双重和三重实时荧光PCR检测体系,并设计相应的特异性试验保证检测体系的准确性。本检测体系对羊源性、牛源性、植物源性成分的检测灵敏度可达0.1 ng/μL;羊乳中掺入牛乳的检测限可达到0.1%(体积分数);羊乳中掺入纯豆奶的检测限可达到0.5%(体积分数)。本研究建立的多重实时荧光PCR检测方法可实现准确快速、高特异性、高灵敏度检测羊乳制品中掺假掺杂的动植物源性成分。