微生物发酵产大豆异黄酮苷元的连续超声波提取工艺及其定量分析研究

选取浅玫瑰链霉菌、红色糖多孢菌及黑曲霉为发酵菌种,采用Plackett-Burman设计及正交试验,对影响微生物发酵法产大豆异黄酮苷元(染料木黄酮、黄豆苷元、黄豆黄素)的连续超声波提取工艺的主要试验因素进行系统优化。以浅玫瑰链霉菌为发酵菌种的实验结果表明：各主要试验因素对3种异黄酮苷元提取率影响程度大小为：抽提溶剂组分、超声波时间、淋洗液体积。而温度、溶剂流速两个因素与提取效率负相关。连续超声波作用时间及抽提溶剂组分为影响异黄酮苷元提取工艺的两个主要影响因素。当两因素的最优值分别为7min及70%时,总异黄酮苷元提取率为(98.7±1.23)%。通过固相萃取(SPE)可有效去除发酵提取液中杂质对HPLC定量分析的干扰,并使3种异黄酮苷元含量浓缩10倍以上,从而使HPLC方法的检测限达到10-3μg/mL,样品总分析时间小于10min,样品回收率为96.2%～103.4%,RSD值小于2.34%。上述结果表明,该方法可满足微生物发酵法产大豆异黄酮苷元的高效提取纯化及快速定量分析。     

同位素稀释高压液相色谱-串联质谱法测定 鱼虾中丙酸睾酮残留量

目的 采用高压液相色谱-串联质谱(high pressure liquid chromatography-tandem mass spectrometry, HPLC-MS/MS)快速检测鱼虾等水产品中丙酸睾酮残留。方法 向捣碎匀浆后的样品中加入内标诺龙-D3混匀后, 叔丁基甲醚超声提取, 80 ℃冷冻30 min后12000 r/min离心净化。以Eclipse Plus C18为色谱分离柱, 以乙腈0.1%甲酸水溶液为流动相, 流速为0.3 mL/min, 采用三重四极杆质谱在正离子模式下进行选择反应离子监测。结果 丙酸睾酮在0.5~100 ng/mL范围内呈线性关系, 相关系数为0.9989; 方法定量限为0.5 μg/kg。当添加水平为0.5~10.0 μg/kg时, 平均回收率为71.2%~104.5%, 相对标准偏差为2.26%~5.65%。结论 该方法操作简单、快速、灵敏度高, 适用于快速检测水产品中丙酸睾酮的残留量。     

同位素稀释高压液相色谱-串联质谱法测定鱼虾中丙酸睾酮残留量

目的采用高压液相色谱-串联质谱(high pressure liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)快速检测鱼虾等水产品中丙酸睾酮残留。方法向捣碎匀浆后的样品中加入内标诺龙-D3混匀后,叔丁基甲醚超声提取,-80℃冷冻30 min后12000 r/min离心净化。以Eclipse Plus C18为色谱分离柱,以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,流速为0.3 mL/min,采用三重四极杆质谱在正离子模式下进行选择反应离子监测。结果丙酸睾酮在0.5~100 ng/mL范围内呈线性关系,相关系数为0.9989;方法定量限为0.5μg/kg。当添加水平为0.5~10.0μg/kg时,平均回收率为71.2%~104.5%,相对标准偏差为2.26%~5.65%。结论该方法操作简单、快速、灵敏度高,适用于快速检测水产品中丙酸睾酮的残留量。     

加速溶剂萃取-气相色谱法检测鱼粉中7种指示性多氯联苯方法研究

目的 建立采用加速溶剂萃取-气相色谱检测鱼粉中7种指示性多氯联苯残留的方法。方法 采用加速溶剂萃取法, 以正己烷-二氯甲烷(1:1, V:V)为提取剂对鱼粉样品进行提取, 提取温度为120 ℃, 压力为10 MPa, 静态提取时间为8 min, 循环提取2次。用浓硫酸进行净化后, 用气相色谱法进行分析测定。结果 多氯联苯在5~500 ng/mL浓度范围内线性关系良好, 相关系数为0.9986~0.9999, 方法定量限为3.0~5.0 μg/kg, 3个添加水平的平均回收率为85.5%~104%, 相对标准偏差为2.61%~8.26%。结论 本方法精密度好, 准确度高, 操作简单、快速, 适用于鱼粉中多氯联苯的定量检测。     

甲苯萃取-原子荧光光谱法检测鱼肉中甲基汞

目的建立甲苯萃取-原子荧光光谱检测鱼肉中甲基汞的方法。方法样品经48%氢溴酸水解、甲苯萃取、0.05 mol/L硫代硫酸钠反萃取后,应用AFS-9230原子荧光光谱法进行测定,同时经此前处理后的样品采用DMA-80直接测汞仪进行测定,与原子荧光光谱法的结果进行对比。结果原子荧光光谱法以及直接测汞仪直接测定的结果与标准物质定值吻合,确证该方法的可靠性,适用于鱼、贝等水产品中甲基汞的测定。采用该方法对鱼肉中总汞与甲基汞成分分析标准物质GBW10029以及英国食品分析水平评估计划(food analysis performance assessment scheme,FAPAS)的罐装鱼肉样品(样品编号07189)进行了检测,检测结果与参考物定值吻合,回收率分别为96.1%,97.5%。结论该方法操作简单,灵敏度高,重现性好,适用于鱼肉中甲基汞含量的定量检测。     

水产品中红霉素残留测定过程中衍生反应条件的优化研究

目的对水产品中红霉素残留量测定过程中衍生反应的条件进行探讨和研究。方法为了使衍生反应达到最佳化,对影响反应的温度、时间、FMOC-CL的量、反应体系进行了研究。结果红霉素的最佳衍生条件是反应温度45℃、反应时间1 h、50μg FMOC-CL、反应体系V乙腈:VKH2PO4=2:1。结论该衍生反应条件优化得比较成功,适用于所建立的实验方法。