鸡卵清蛋白食物过敏大鼠中药口服治疗的实验研究

目的：建立鸡卵清蛋白（OVA）食物过敏大鼠模型,利用中药复方 Formula-3对食物过敏大鼠进行治疗,探讨其治疗效果及其机制。方法将24只 BN 大鼠按随机数字表法分为 PBS 对照组、OVA 模型组及中药复方 For-mula-3治疗组,每组8只。OVA 模型组与中药复方 Formula-3治疗组在前6周和第7、9、11、13周分别予 OVA（1 mg·mL－1）灌胃致敏,每天1次;于第13周末以 OVA（100 mg·mL－1）进行激发,建立大鼠 OVA 食物过敏模型。其中中药复方 Formula-3治疗组于第7周开始同时给予1 mL 中药复方 Formula-3（150 mg·mL－1）灌胃治疗,每天1次;OVA 模型组则以1 mL 的0．1 mmol· L－1 PBS 灌胃治疗。PBS 对照组致敏、激发和治疗均予以浓度为0．1 mmol·L－1的 PBS 1 mL 灌胃。激发24 h 后处死大鼠,测定3组大鼠血清中 OVA 特异性 IgE 水平、计算肥大细胞脱颗粒的百分比、观察肠道组织超微结构病理变化等,对治疗效果进行评价。结果 OVA 模型组血清中OVA 特异性 IgE 抗体显著高于 PBS 对照组、脱颗粒肥大细胞数量显著多于 PBS 对照组（均 P ＜0．01）;中药复方Formula-3治疗组血清中 OVA 特异性 IgE 水平显著低于 OVA 模型组、肥大细胞脱颗粒显著少于 OVA 模型组（均P ＜0．01）。OVA 模型组肠黏膜微绒毛变形,细胞内细胞器损伤,细胞间连接破坏,炎性细胞浸润增多;中药复方Formula-3治疗组微绒毛均匀整齐,细胞器基本正常,细胞间连接紧密,与 OVA 模型组相比病变明显轻微。结论中药复方 Formula-3能有效地降低食物过敏大鼠血清中 OVA 特异性 IgE,减少肥大细胞脱颗粒并减轻肠道的病理改变,对食物过敏有良好的治疗效果。     

田菁花粉过敏原的分离、纯化及鉴定

目的：初步分离、纯化及鉴定田菁花粉变应原蛋白。方法对田菁花粉粗提液进行提取,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）对粗提液蛋白组分进行分离,并对其分子质量进行测定。收集10例过敏患者血清,通过免疫印迹法（Western-blotting）对花粉变应原成分进行鉴定,用离子交换层析对其变应原进行初步纯化,并通过免疫印迹法进行鉴定。结果田菁花粉有蛋白条带20余条,其中主要条带有12条,16、19和27 ku为其特异性的过敏原,其中16和19 ku 为其主要过敏原。田菁花粉通过离子交换层析纯化出变应原主要集中在Ⅳ和Ⅰ峰,其对应的分子质量为16和19 ku。结论初步分离、纯化及鉴定了田菁花粉变应原,为临床过敏性疾病的诊断和治疗奠定了基础。     

不同加工方式对牛奶过敏原免疫原性的影响

方法:提取其中奶制品的蛋白质,SDS-PAGE分析组分并用混合血清进行免疫印迹。使用间接ELISA比较原奶和加工过的牛奶的IgG结合能力。结果:实验结果表明酸奶和蛋白酶水解(HA)奶粉的蛋白质组分较其他样品有显著变化,印迹结果显示经煮沸的牛奶、配方奶粉、酸奶和HA奶粉免疫原性明显较低,ELISA结果指示经煮沸的牛奶、配方奶粉、酸奶和HA奶粉特异性IgG结合能力均有不同程度的减小。结论:实验结果表明加热、发酵和水解可能使牛奶免疫原性降低。     

花生过敏患者血清中抗Ara h1的IgG与IgE分离纯化研究

Ara h1是花生的一种主要致敏原蛋白,能够使花生过敏患者产生特异的IgG与IgE,从而导致花生过敏症状。Ara h1与其特异IgG和IgE的结合是导致花生致敏的一个重要原因。本研究利用Protein A亲和层析柱与Ara h1作为配体的亲和层析柱纯化抗Ara h1的IgG与IgE。高纯度的抗Ara h1特异IgG与IgE对探讨研究其与Ara h1之间相互作用具有重要意义。     

牛奶过敏原β-乳球蛋白的单克隆抗体制备及其双抗体夹心法的建立

目的制备与鉴定牛奶主要过敏原β-乳球蛋白(β-LG)的单克隆抗体,并建立双抗体夹心检测法。方法以β-LG为抗原免疫BALB/c小鼠,融合免疫鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤NS-1。半固体培养基法结合有限稀释法筛选稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株。杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,采用蛋白A亲和层析法获得纯化抗体。利用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型。间接ELISA方法和Western Blot鉴定抗体效价和特异性以及与其他过敏原的交叉反应性。建立双单克隆抗体夹心法,检测β-LG。结果共获得抗β-LG细胞株6株,分别命名为1H8,4A7,4C3,1F9,1G5,3D11,效价均高于20万。经抗体亚型鉴定,6株抗体均为Ig G1型。Western Blot的结果表明6株抗体能识别β-LG。在特异性检测实验中,6株抗体与其他种类食物过敏原无交叉反应,而1G5和3D11与牛奶酪蛋白过敏原有交叉反应性。通过建立双单克隆抗体夹心ELISA法,发现牛奶β-LG蛋白的检出低限为:15.625 ng/m L,标准曲线在15.625~250 ng/m L范围内线性良好。结论获得高效价抗体6株,建立了高效、高特异性的牛奶过敏原β-LG的检测方法,为食品中牛奶过敏原的检测提供了依据。     

Balb/c小鼠花生过敏模型的建立及发病机理

通过皮下注射花生粗蛋白的致敏方式,建立Balb/c小鼠花生过敏模型,探讨食物过敏的发病机制.将16只Balb/c小鼠(雌性)分为PBS对照组和模型组,利用伊红苏木精(haematoxylin and eosin,H&E)染色,用透射电镜观察小鼠肠道炎症和肠绒毛病理变化,发现花生过敏模型组较PBS对照组可见小肠黏膜水肿和炎症细胞浸润,组肠微绒毛严重损伤;通过伊文思蓝尾静脉注射,模型组中小鼠足部出现明显蓝色,而对照组无明显变化;模型组腹腔灌洗液细胞相对PBS对照组炎症细胞数目显著增加,主要以嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和肥大细胞为主,且肥大细胞活化状态明显;酶联免疫吸附法检测发现,血清中IgE、IL-4、IL-5、IL-6和组胺的水平及腹腔上清液组胺的水平,模型组明显高于对照组(P<0.05),IgG2a和IFN-γ的水平模型显著低于PBS对照组(P<0.01).花生模型组较对照组出现一系列的过敏病理变化,为开发治疗花生过敏药物提供了良好的动物模型.     

酱香型白酒中非乙醇类物质抗炎活性研究

研究酱香型白酒中非乙醇物质(maotai-flavor liquor extract,MTE)的体外抗炎活性及其作用机制。采用氯仿萃取及真空冻干获得MTE,液相色谱-质谱联用技术(high performance liquid chromatography-mass spectrometry,HPLC-MS)分析其成分,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导IEC-6细胞建立炎症模型;检测MTE及MTE中26种化合物对LPS诱导的IEC-6细胞凋亡的影响;酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定MTE及α-雪松醇处理细胞对NO及相关炎症因子IL-6、IL-8、TNF-α、IL-10及细胞迁移能力的影响。结果表明,MTE、α-雪松醇(0.22 mg/mL)可显著提高IL-10分泌、降低LPS诱导的细胞凋亡、提高细胞迁移能力,降低IL-6、IL-8、TNF-α等的分泌,上调细胞紧密连接蛋白Occludin和ZO-1 mRNA表达。酱香型白酒中含有的非乙醇物质具有一定的抗炎活性,其中α-雪松醇可显著降低LPS诱导引起的IEC-6细胞凋亡,可通过抑制炎症因子IL-6、IL-8和TNF-α的分泌及提高IL-10分泌发挥抗炎能力。     

双抗体夹心ELISA法测定食物中花生过敏原蛋白成分

通过建立双抗体夹心ELISA法测定食物中花生过敏原蛋白成分,为进出口食品花生过敏原成分检测和由花生导致的食物过敏性疾病的预防提供技术基础.提取花生总蛋白,免疫小鼠制备抗花生总蛋白的多克隆抗体,用该抗体包被酶标板,并用生物素标记该多抗,从而建立双多抗体夹心ELISA法;自制花生总蛋白标准品并检测该方法的灵敏度,同时检测15种食品中是否含有花生蛋白成分.成功地研制出双抗体夹心ELISA法检测食品中花生过敏原蛋白成分,具有特异性,其最低检出限为8ng/mL,标准曲线在8 ng/mL～125 ng/mL范围内线性良好;13种食品检测结果与食物过敏原标签标注内容相符,而2种标示不详的食品检测结果均呈现阳性.     

粉尘螨第十六类变应原的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定

目的 获得大量具有良好IgE结合活性的粉尘螨第十六类变应原（Der f16）的重组变应原,以促进粉尘螨变态反应性疾病的特异性诊断及治疗的研究.方法 挑取经纯培养的粉尘螨,提取总RNA,根据已知Der f16基因序列设计引物,经RT-PCR扩增Der f16基因片段,产物连入pMD32-T载体中.扩增后,利用限制性内切酶EcoR Ⅰ和XhoⅠ双酶切将目的 基因片段连接到pET32a表达载体上,转化到大肠杆菌（E.coli BL21）中经IPTG诱导表达.表达载体经亲和层析纯化,SDS-PAGE检测蛋白纯度,Western bolt检测变应原免疫学活性.结果 以粉尘螨总RNA为模板成功克隆出Der f16基因,与数据库中Der f16基因同源性为100%;经IPTG诱导后,大肠杆菌大量表达Der f16蛋白,所获得的重组蛋白分子质量为73 ku,上清及沉淀物均有蛋白表达,且上清表达量高于沉淀物.重组Der f16能够与螨过敏患者血清中的IgE 反应,而不与健康者血清中的IgE反应.结论成功构建了Der f16的原核表达载体,并高效表达和纯化出具有免疫原性的Der f16重组蛋白.     

深圳市树木花粉调查及其与气候要素相关性研究

目的探讨深圳市树木花粉的种类、数量及季节消长规律与气候要素的相关性,为本地区植被的绿化和花粉症防治提供有效资料。方法应用Burkard采样器于2013年2月1日至2013年10月31日对深圳市（选定深圳市深圳大学校园空旷地带作为监测站）树木花粉浓度进行监测,并对花粉浓度进行统计学分析。结果共收集花粉21 325粒,其中树木花粉19 823粒,占总数的92.9%。鉴定树木花粉23种,以松科（27.0%）和大戟科（13.7%）为主,其他依次为：木麻黄科、杉科、桃金娘科、木樨科、无患子科、桑科、杨柳科等。深圳市全年均有树木花粉飘散,存在2个高峰分别在2—4月和9—10月。树木花粉的传播与日照时数、气压和风速呈正相关;与平均气温、相对湿度和降雨量呈负相关（均P〈0.05）。结论根据深圳市树木花粉的种类、数量及季节消长规律及与气候要素的相关性结果,可以为本地区植被的绿化和花粉症防治提供有效资料。