鱼类副乳房链球菌病研究进展

副乳房链球菌Streptococcus parauberis是引起牛源和鱼源链球菌病的主要病原菌,该菌分布广、致病力强,曾给世界范围的鱼类养殖业造成重大经济损失。副乳房链球菌最初被认为是乳房链球菌S.uberisⅡ型,后经分子鉴定确定为新种,可感染包括海淡水、养殖或野生等众多鱼类发病,出现类似败血特性的临床症状,温度是其流行暴发致病的最主要诱因。根据荚膜多糖结构差异可将副乳房链球菌分为多种血清型,不同血清型对宿主的致病力不同。常规生理生化鉴定较难准确鉴别副乳房链球菌,基于PCR技术的分子鉴定是该菌的最常用检测手段。目前,药物防治仍然是副乳房链球菌病防控的首选方法,但菌株已逐渐出现耐药甚至多重耐药,尽管疫苗是最安全有效的防控措施,但商用疫苗还有待于进一步试验。此外,鉴于噬菌体的特性,其有可能成为抗生素类药物的替代品。本文梳理归纳了鱼类副乳房链球菌病原学、流行病学与临床症状、致病机制、检测方法、耐药性、防治措施等方面的研究进展,并提出今后应在加强副乳房链球菌的流行病学与致病机制、科学筛选防治药物、加大疫苗研发力度等方面开展深入研究,以期为养殖生产中鱼源副乳房链球菌病防控提供科学参考。     

黑边石斑鱼卵巢周年发育及血清中性激素含量的变化

为了解黑边石斑鱼Epinephelus fasciatus卵巢周年发育及血清中性激素含量的变化,于2016年8月—2017年9月,在日本长崎市东中国海海域每月对其采样,共计获得样本数量140尾,测定所获样本的体长、体质量、性腺指数(GSI)和性腺发育状态,以及血清中性激素雌二醇(E_2)、性成熟激素17α、 20β双羟孕酮(DHP)和17α、 20β、21-三羟孕酮(20β-S)含量的变化。结果表明:黑边石斑鱼卵巢发育成熟的适宜水温为25～27℃,其GSI在2017年7—8月达到最大值,且性腺发育成熟和产卵时期也出现在此时间段;黑边石斑鱼血清中E_2浓度在2017年8月显著增加(P<0.05),这表明E_2对其性腺发育成熟和产卵具有重要的作用;血清中DHP浓度在2017年7—8月有增加的趋势,而20β-S浓度在2017年1月呈现峰值,此后逐渐降低,这表明在成熟时期DHP较20β-S更具有诱导性腺发育的功能。研究表明,黑边石斑鱼性腺于2017年7—8月发育成熟并产卵,可能是由于水温及性激素E_2和性成熟激素DHP共同调节所致。     

水温和光照调节对五条鰤性成熟及脑垂体促性腺激素fshβ和lhβ基因表达的影响

为了解环境因子对五条鰤Seriola quinqueradiata内分泌系统的影响，分析综合运用水温和光照调节对其性腺发育成熟度及与繁殖相关的促卵泡激素基因(fshβ)和黄体生成素基因(lhβ)表达的影响，试验设置对照组和处理组(每组水槽放置20尾鱼),对照组为自然水温和光照饲养，处理组在水温恒定20℃和光照10L∶14D条件下饲养，试验时间为2018年1月20日—3月20日，每月采样一次，比较各阶段试验鱼的性腺指数(GSI)、性腺发育成熟度、脑垂体中fshβ和lhβ基因含量，以及血清中类固醇激素雌二醇(E_2)和睾酮(T)含量的差异。结果表明：对照组鱼在各采样阶段其GSI均无显著性差异(P>0.05),且性腺发育为未成熟阶段，处理组鱼在试验进行1个月和2个月后，其GSI均显著高于对照组(P<0.05),且性腺发育为成熟阶段；试验进行1个月和2个月后，对照组鱼脑垂体中fshβ和lhβ基因含量均无显著性变化(P>0.05),但处理组鱼脑垂体中fshβ基因含量均显著高于对照组(P<0.05),试验进行2个月后，处理组鱼脑垂体中lhβ基因含量显著高于对照组(P<0.05);试验进行1个月和2个月后，对照组鱼血清中E_2和T含量均无显著性变化(P>0.05),但处理组鱼血清中E_2和T含量均显著高于对照组(P<0.05)。研究表明，综合运用水温和光照调节有利于促进五条鰤脑垂体中fshβ和lhβ含量的增加，从而促进其血清中E_2和T浓度的上升，最终诱导其性腺发育成熟。     

饵料种类、配比及投喂方式对单环刺螠幼虫生长和变态的影响

为确定单环刺螠Urechis unicinctus人工苗种繁育中适宜幼虫生长发育的最佳饵料种类、配比及投喂方式,通过测定幼虫生长速率、成活率和变态率,对饵料品种、配比及投喂方式等进行了一系列对比试验研究。结果表明:饵料对单环刺螠幼虫生长和变态具有显著影响(P<0.05);单一饵料品种投喂结果显示,小球藻饵料组与球等鞭金藻饵料组的体节幼虫体长日增长率和幼虫成活率显著高于其他饵料组(P<0.05),但这两组间无显著性差异(P>0.05),小球藻饵料组的幼虫变态率(17.24%±0.89%)显著高于球等鞭金藻饵料组和其他饵料组(P<0.05),这表明小球藻是单一饵料投喂单环刺螠较好的开口饵料;混合饵料投喂结果显示,小球藻+球等鞭金藻+酵母粉混合饵料和小球藻+球等鞭金藻混合饵料组中,体节幼虫的体长日增长率和幼虫成活率显著高于其他混合饵料组(P<0.05),但这两个混合饵料组间无显著性差异(P>0.05),搭配投喂小球藻+球等边金藻+酵母粉混合饵料组的幼虫变态率(21.72%±0.85%)显著高于小球藻+球等鞭金藻混合饵料组和其他混合饵料组(P<0.05),这表明小球藻+球等边金藻+酵母粉的混合饵料组幼虫整体培育效果最佳;进一步的饵料配比及投喂方式研究显示,将小球藻、球等鞭金藻、酵母粉3种饵料按照2∶1∶1比例混合,在担轮幼虫前期只投喂小球藻+球等鞭金藻,至担轮幼虫中后期增加投喂酵母粉试验组,获得的幼虫变态率最高(24.73%±0.78%),显著高于其他试验组(P<0.05),且幼虫发育齐整度良好;饵料日投喂量结果显示,初孵担轮幼虫适宜的日投喂量为2×10⁴ cells/mL,随着幼虫发育饵料投喂量逐渐增加,当出现蠕虫状幼虫时日投喂量应增加至10×104 cells/mL,随着幼虫发育饵料投喂量逐渐增加,当出现蠕虫状幼虫时日投喂量应增加至10×10⁴～12×104～12×10⁴ cells/mL。研究表明,单环刺螠幼虫培育的最佳饵料投喂方案为,将小球藻、球等鞭金藻、酵母粉3种饵料按照2∶1∶1比例混合,在担轮幼虫前期只投喂小球藻+球等鞭金藻,至担轮幼虫中后期增加投喂酵母粉。     

蒸煮贻贝冰温贮藏保鲜剂的筛选、优化及评价

目的 筛选用于改善冰温贮藏蒸煮贻贝品质、延长蒸煮贻贝保质期的生物保鲜剂,对复合保鲜剂的配方及保鲜工艺进行优化,并评价其保鲜效果。方法 通过测定保鲜剂作用于贻贝优势腐败菌的抑菌圈大小,筛选出抑菌效果较强的保鲜剂,运用响应面法优化复合保鲜剂配方,采用肉汤稀释法测定最小抑菌浓度(minimuminhibitoryconcentration,MIC);利用正交实验确定复合保鲜剂用于蒸煮贻贝保鲜的最佳工艺;通过测定蒸煮贻贝冰温贮藏8 d后的感官评分、pH、挥发性盐基氮(total volatile basic nitrogen, TVB-N)含量、菌落总数、汁液流失率来评价复合保鲜剂的效果。结果 筛选出的3种保鲜剂分别为溶酶菌、乳酸链球菌素和丁香酚,复合保鲜剂对枯草芽孢杆菌和假单胞菌的MIC分别为16、8μg/mL,复合保鲜剂的优化配方(质量分数)为溶菌酶4%、乳酸链球菌素2%和丁香酚0.75%,最佳保鲜工艺为保鲜剂溶液p H 5.5、料液比1:2.5 (m:V)、浸泡时间60 min,采用优化的配方和工艺用于蒸煮贻贝的冰温贮藏,贻贝品质的综合评分为空白样品的2倍。结论 复合保鲜剂可以有效改善蒸...     

金乌贼微卫星标记开发及两个野生群体遗传多样性比较

为进一步了解金乌贼Sepia esculenta野生群体遗传多样性水平,采用磁珠富集法从金乌贼基因组中开发了微卫星标记,并应用青岛(QD)金乌贼野生群体对其多态性进行评价,进而比较了青岛和长江口(CJK)两个野生群体的遗传差异。结果表明:开发标记的种群遗传学评价显示,在269个克隆子中,有192个含有微卫星序列(71.38%),基于该序列设计85对引物,其中20对通过筛选,完美型占60%,非完美型占10%,复合型占30%;经群体验证,表观等位基因数(A)为2～17不等,平均为8.15,观测杂合度(H_O)分布范围为0.146～0.936,平均为0.630,期望杂合度(H_E)分布范围为0.172～0.930,平均为0.702;其中5个位点不符合哈迪—温伯格(Hardy-Weinberg)平衡预期,存在零等位基因可能是其偏离平衡的原因;应用本研究开发的引物对2个近源种扩增,开发的20个标记位点中有6个在针乌贼Sepia andreana中表现为多态,4个位点在曼氏无针乌贼Sepiella maindroni中表现为多态;应用开发的11个位点对青岛和长江口两个野生群体进行遗传差异分析显示,所有位点中,青岛群体共检测到163个等位基因,长江口群体共检测到152个等位基因,每个位点的等位基因数为5～28和6～26不等,平均等位基因数分别为14.818和13.818;青岛群体独有等位基因19个,观测杂合度分布范围为0.250～0.936,平均为0.731,期望杂合度分布范围为0.265～0.930,平均为0.771,多态信息含量为0.223～0.946,平均为0.746;长江口群体独有等位基因8个,观测杂合度分布范围为0.500～0.896,平均为0.731,期望杂合度分布范围为0.623～0.960,平均为0.857,多态信息含量为0.614～0.948,平均为0.845;群体间遗传分化较弱(F_(st)值为0.032 5),群体分配分析结果表明,两个种群中所有个体正确分配到各自种群的概率分别为86.4%和84.0%。研究表明,本试验中开发的微卫星标记位点多样性水平略低于前人的研究,但有一定的跨种扩增通用性,长江口群体多样性水平略高于青岛群体,尽管两个群体间遗传分化程度不高,但存在明显差异。     

大菱鲆源副乳房链球菌的分离鉴定及其毒力基因型

为研究2019年山东省烟台市某大菱鲆Scophthalmus maximus养殖场出现的以突眼、腹水、红肿为主要特征的疾病发病原因,用平板划线法从患病濒死大菱鲆(体质量为195～535 g)肝、肾、脾、心等组织中分离获得1株优势菌,采用形态学观察、16S rRNA序列分析、PCR特异性扩增和人工回归感染试验等方法对优势菌进行鉴定,检测其血清型、毒力基因携带情况,并用纸片扩散法(K-B)检测分离株对23种抗生素的敏感性。结果表明:从病鱼分离获得的菌株为γ溶血的革兰氏阳性球菌,生理生化特征为能水解七叶苷,不能水解精氨酸、赖氨酸等,能利用蔗糖、甘露醇、葡萄糖产酸,不能利用枸橼酸、鼠李糖、尿素等;经16S rRNA序列比对、链球菌特异性引物扩增等鉴定其为副乳房链球菌Streptococcus parauberis;该菌株的毒力基因型为scp B^--bca--bca^--bac--bac^--lmb--lmb^--fbs A--fbs A^--cfb--cfb^--cps D--cps D^--pav A--pav A^--bib A--bib A⁺-sip+-sip⁺-cyl E+-cyl E^--hyl B--hyl B⁺;将分离菌株制备成6.3×10+;将分离菌株制备成6.3×10⁷、6.3×107、6.3×10⁸、6.3×108、6.3×10⁹、6.3×109、6.3×10⁽¹⁰⁾ CFU/mL 4个浓度,腹腔注射健康大菱鲆,得到菌株对受试鱼的半致死浓度(LD_(50))为6.9×10(10) CFU/mL 4个浓度,腹腔注射健康大菱鲆,得到菌株对受试鱼的半致死浓度(LD_(50))为6.9×10⁸ CFU/mL;药敏试验显示,该菌株对β-内酰胺类、喹诺酮类、四环素类、大环内酯类、多肽类、利福霉素类等6类14种抗生素类药物敏感,对氨基糖苷类、磺胺类及呋喃类等3类6种抗生素耐药,对诺氟沙星、强力霉素、多粘菌素B中度敏感。本研究中首次报道了中国鱼源副乳房链球菌自然感染发病,可为鱼源副乳房链球菌分子特性研究、致病机理、药物防治等提供科学参考。     

金乌贼微卫星标记开发及两个野生群体遗传多样性比较

为进一步了解金乌贼Sepia esculenta野生群体遗传多样性水平,采用磁珠富集法从金乌贼基因组中开发了微卫星标记,并应用青岛(QD)金乌贼野生群体对其多态性进行评价,进而比较了青岛和长江口(CJK)两个野生群体的遗传差异。结果表明:开发标记的种群遗传学评价显示,在269个克隆子中,有192个含有微卫星序列(71.38%),基于该序列设计85对引物,其中20对通过筛选,完美型占60%,非完美型占10%,复合型占30%;经群体验证,表观等位基因数(A)为2～17不等,平均为8.15,观测杂合度(H_O)分布范围为0.146～0.936,平均为0.630,期望杂合度(H_E)分布范围为0.172～0.930,平均为0.702;其中5个位点不符合哈迪—温伯格(Hardy-Weinberg)平衡预期,存在零等位基因可能是其偏离平衡的原因;应用本研究开发的引物对2个近源种扩增,开发的20个标记位点中有6个在针乌贼Sepia andreana中表现为多态,4个位点在曼氏无针乌贼Sepiella maindroni中表现为多态;应用开发的11个位点对青岛和长江口两个野生群体进行遗传差异分析显示,所有位点中,青岛群体共检测到163个等位基因,长江口群体共检测到152个等位基因,每个位点的等位基因数为5～28和6～26不等,平均等位基因数分别为14.818和13.818;青岛群体独有等位基因19个,观测杂合度分布范围为0.250～0.936,平均为0.731,期望杂合度分布范围为0.265～0.930,平均为0.771,多态信息含量为0.223～0.946,平均为0.746;长江口群体独有等位基因8个,观测杂合度分布范围为0.500～0.896,平均为0.731,期望杂合度分布范围为0.623～0.960,平均为0.857,多态信息含量为0.614～0.948,平均为0.845;群体间遗传分化较弱(F_(st)值为0.032 5),群体分配分析结果表明,两个种群中所有个体正确分配到各自种群的概率分别为86.4%和84.0%。研究表明,本试验中开发的微卫星标记位点多样性水平略低于前人的研究,但有一定的跨种扩增通用性,长江口群体多样性水平略高于青岛群体,尽管两个群体间遗传分化程度不高,但存在明显差异。     

活性炭法制备栉孔扇贝高F值寡肽的工艺优化

摘要 ： 目的 研究活性炭脱除芳香族氨基酸工艺,优化活性炭吸附条件。方法 采用F值、BCAA (支链氨基酸,Branched-chain Amino Acids)保留率和AAA(芳香族氨基酸,Aromatic Amino Acids)去除率3个指标,通过单因素和正交实验研究温度、pH、吸附时间、固液比4个因素对活性炭脱除芳香族氨基酸效果的影响。结果 最佳吸附条件为温度35℃、pH 6、吸附时间2 h、固液比1:10,经活性炭吸附后,酶解液F值达到33.22,制备出了符合高F值要求的栉孔扇贝(Chlamys Farreri)加工副产物酶解液。结论 该活性炭吸附脱芳技术为栉孔扇贝加工副产物的高值化应用及栉孔扇贝的综合应用提供了新的途径。     

两种石斑鱼性腺分化前后脑垂体中FSHβ和LHβ细胞免疫组织化学及其基因表达

为了解石斑鱼Epinephelus性腺分化前后脑垂体中促卵泡激素(FSHβ)和黄体生产素(LHβ)细胞分布及基因含量的变化,以赤点石斑鱼Epinephelus akaara和黑边石斑鱼E.fasciatus为研究对象,采用苏木精-伊红染色法(H.E.)对孵化后55、80、120日龄幼鱼的性腺和脑垂体结构进行组织学观察,同时运用免疫组织化学技术(IHC)对两种石斑鱼脑垂体中FSHβ和LHβ进行识别和定位,并运用qRT-PCR技术测定其脑垂体中fshβ和lhβ基因含量的变化。结果表明:赤点石斑鱼和黑边石斑鱼早期性腺发育分为未分化期、分化期和卵巢期;石斑鱼性腺在55日龄时为未分化阶段,其位于肠道附近且观察到性细胞和血管,80日龄时为性腺分化阶段,性腺原基两端的结缔组织向前延伸并形成突起,表明卵巢腔正在形成,120日龄时为卵巢阶段,卵巢腔已完全形成且观察到卵原细胞,表明石斑鱼性腺已分化为雌性;两种石斑鱼在55、80、120日龄时的脑垂体结构相似,分为神经垂体(NH)和腺垂体(AH),腺垂体进一步细分为前外侧部(RPD)、中外侧部(PPD)和中间部(PI);在55、80、120日龄时,两种石斑鱼脑垂体中均检测到FSHβ和LHβ免疫信号,其主要分布在PPD区域,少量分布在RPD或PI区域;赤点石斑鱼脑垂体中fshβ基因含量在120日龄时显著高于55、80日龄(P<0.05),但lhβ基因含量无显著性差异(P>0.05),黑边石斑鱼脑垂体中fshβ和lhβ基因含量在120日龄时均显著高于55、80日龄(P<0.05)。研究表明,两种石斑鱼性腺在120日龄时已分化完成,脑垂体结构在55日龄时已完全形成且脑垂体中FSHβ和LHβ在两种石斑鱼性腺分化过程中起重要作用,其角色可能是促进个体的早期发育和加速性细胞的增殖。