拟穴青蟹原肌球蛋白抗原表位适配体小肽的筛选与鉴定

目的筛选对拟穴青蟹过敏原原肌球蛋白(tropomyosin,TM)抗原表位具有特异性结合能力的适配体小肽,并鉴定适配体小肽对TM的免疫结合活性的抑制作用。方法采用ExPASy peptide cutter软件预测TM分子中胰蛋白酶酶切位点,结合TM线性表位设计反义小肽,经AutoDock 4.0软件模拟分子对接,筛选得到适配体小肽。采用抑制性ELISA的方法,检测筛选的适配体小肽对TM与特异性IgG抗体结合活性的抑制作用。结果 TM氨基酸序列中有25个胰蛋白酶酶切位点,设计TM的31条反义小肽,利用分子对接筛选得到12个适配体小肽。抑制性ELISA结果显示,12条适配体小肽均能明显抑制TM与IgG抗体的特异性结合,其中适配体小肽5抑制能力最强,其抑制率为36.2%。结论通过分子对接筛选得到能明显抑制TM免疫结合活性的适配体小肽,为降低TM致敏性的研究提供理论参考。     

一种Kappa-卡拉胶酶的克隆、表达及其酶学性质研究

将来源于Pseudoalteromonas carrageenovora ASY5菌株的κ-卡拉胶酶基因克隆到载体p ET-28a上,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中表达。克隆得到的κ-卡拉胶酶基因序列全长1194 bp,编码一个由398个氨基酸残基组成的蛋白酶,该蛋白酶的分子量为48 ku,结构域分析表明该κ-卡拉酶符合GH16家族的特点。对重组κ-卡拉胶酶的酶学性质进行考察:重组κ-卡拉胶酶只能够专一性的降解κ-卡拉胶;该酶的最适温度和pH分别是55℃和pH 9.0,重组酶在40℃保温1 h可保持95.0%的活性,在45℃保温1 h残余酶活与对照比较仍保留60.0%,在pH 8.0~10.0的缓冲液中处理30 min,仍能保持80%以上的酶活力,低浓度的Na+和K+以及1mmol/L的Sn~(2+)、Fe3+、EDTA、DTT、Tween-20、Tween-80和Triton X-100、β-mercaptoethanol、SDS、Urea对重组酶活具有显著的促进作用;而高浓度的Na+和K+以及1 mmol/L的Cd~(2+)、Ba~(2+)、Mg~(2+)、Fe~(2+)、Ca~(2+)对重组酶活性有不同程度的抑制作用。     

琼脂复配开发酸奶稳定剂的研究

利用琼脂产品与辅助稳定剂复配开发酸奶稳定剂,优化酸奶稳定剂配方。测定了琼脂产品在酸奶中的粘度与持水性,并以持水性为指标,对该琼脂样品与变性淀粉和果胶进行复配,通过均匀混料实验进行优化。结果表明:1号琼脂的性能指标优于6号和8号琼脂,1号琼脂和改性淀粉的最佳比例为78:22,稳定剂添加总量为0.1%的配比下,酸奶的持水性为53.6%,粘度为2920 MPa·s,酸度为87.9 °T,感官指标符合酸乳制品行业规范。     

戊二酸酐酯化κ-卡拉胶的制备及理化性质

以κ-卡拉胶为原料,戊二酸酐为酯化剂,探讨了戊二酸酐酯化卡拉胶（GC）的制备过程中戊二酸酐浓度、反应pH、反应温度、卡拉胶浓度和反应时间对产物取代度的影响,得到制备GC的工艺条件:戊二酸酐浓度4%,反应pH8～8.5,反应温度30 ℃,卡拉胶浓度7.50%,反应时间2 h,取代度为0.077。利用红外光谱、白度仪、粘度仪、扫描电镜和热重分析仪对产物进行表征。结果表明:GC在红外光谱1734 cm?1和在1576 cm?1处峰具有明显的酯羰基和羧基吸收特性,峰值随着取代度的增加更加明显;与原卡拉胶相比,酯化卡拉胶粉末白度略微增加,颗粒表面变得粗糙,表层出现一定凹陷和孔洞,而热稳定性影响不明显;酯化卡拉胶溶液粘度降低,但乳化性及乳化稳定性均得到显著提升（P<0.05）。κ-卡拉胶经戊二酸酐酯化后,改变了其结构与性质,拓宽了κ-卡拉胶的应用范围。     

果胶酯酶的发酵培养基及培养条件优化

为提高果胶酯酶的产量,以果胶酯酶活力与生物量为指标,对塔宾曲霉CICC 2651产果胶酯酶的发酵培养基和培养条件进行了研究,通过单因素实验得到最优培养基和培养条件为:硫酸铵0.5%,果胶3%,Na₂SO₄ 0.04%,MgSO₄·7H₂O 0.04%,K₂HPO₄ 0.2%,培养温度30 ℃,初始pH为4.5,接种量5%,装液量40 mL。在优化工艺条件下,果胶酯酶活力达到1.53±0.09 U/mL,比初始条件提高了77.9%。通过发酵培养基和培养条件优化,塔宾曲霉CICC 2651发酵产果胶酯酶的能力大幅度提高。     

古田红曲米抗氧化活性物质的分离纯化

本文对产自不同地区的红曲米进行抑菌、抗氧化活性的测定,结果显示古田红曲米的抗细菌活性稍强于其它地区产的红曲米。采用凝胶柱层析、反相和正相硅胶柱层析等分离纯化方法,结合核磁共振波谱及质谱检测等技术手段对古田红曲的甲醇提取活性物质进行分析和结构鉴定。结果表明不同有机溶剂提取物的抑菌效果有很大差异,同浓度下抑菌效果从大到小依次为枯草芽孢杆菌大肠杆菌黑曲霉塔宾曲霉酿酒酵母菌;抗氧化实验中,古田红曲米抗氧化活性较强,此外,古田红曲乙酸乙酯提取物以及50%水-50%甲醇到0%水-100%甲醇提取物的抗氧化活性也较好。最后,从古田红曲米中分离纯化出2个化合物,鉴定为亚油酸和α-亚麻酸,它们均有一定的抗氧化和抗肿瘤等活性。     

辛烯基琥珀酸酯化琼脂对海藻酸钠微胶囊包埋效果的改善作用

将辛烯基琥珀酸酯化琼脂(OSAR)与海藻酸钠(Alg)混合,作为复合壁材用于制备大豆油微胶囊。考察了改性琼脂占比、芯材添加量、乳化温度、氯化钙浓度等因素对微胶囊载油率的影响,并研究复合壁材对大豆油微胶囊包埋产率、乳液与微球性质和形态、体外消化释放率及氧化稳定性的影响。结果表明:复合壁材载油率随改性琼脂占比(OSAR:Alg=0.5:1～3:1)增加先上升后下降趋势;随芯材添加量(1%～5%)增加显著提高而后下降趋势;随乳化温度(40～65℃)的升高而降低至平缓;随氯化钙浓度(1%～5%)增加先平稳后下降趋势;复合壁材(OSAR:Alg=1:1)与纯海藻酸钠相比,包埋产率提高了27.9%,乳液稳定性提高了56.86%,表面油含量降低60.0%、包埋效率提高了3.65%,芯材大豆油体外消化释放率和氧化稳定性也明显提高,获得的微球粒径更小、颗粒表面无孔洞,其载油量达40.5%。该研究表明辛烯基琥珀酸酯化琼脂极大地改善了海藻酸钠微胶囊包埋效果,适合应用于构建脂性物质的包封与递送系统。