NDM-1基因新型染料EverGreen实时荧光PCR检测方法的建立

研究初步建立了NDM-1基因的实时荧光PCR快速检测鉴定方法。研究根据超级细菌NDM-1序列,设计并合成了检测引物(ND-E-F和ND-E-R),对NDM-1质粒DNA和其他11个标准菌株进行了EVERGREEN实时荧光PCR检测。结果表明,携有NDM-1基因的质粒DNA模板都出现了很强的特异信号,而其他对照病菌均未出现特异荧光信号,证明这套引物及探针具有NDM-1基因检测的特异性。灵敏度测定结果,此体系可检出10fg/μL质粒DNA模板。研究表明,EverGreen实时荧光PCR方法是一种特异、灵敏、快速的NDM-1基因检测方法。     

基于HDA的超级细菌耐药基因NDM-1检测方法的建立

本研究以建立解旋酶DNA恒温扩增(HDA)检测方法为目的,选择三种超级细菌NDM-1基因(metallo-beta-lactamase 1 gene)为目的基因,设计并合成特异性引物,建立和优化了可快速检测该种基因的HDA检测方法。特异性和灵敏度检测结果表明:该方法对NDM-1基因检测具有特异性,最低检测限可达10fg/μL,灵敏度高于普通PCR。提示HDA是一种针对NDM-1的快速、灵敏、便捷的非PCR核酸扩增技术。     

高效液相色谱法同时测定食品中的12种抗氧化剂

目的：建立一种快速、准确测定食品中12 种抗氧化剂的高效液相色谱法。方法：样品用正己烷溶解,用含抗坏血酸棕榈酸盐(AP)的饱和乙腈萃取,以反相C18 柱为分离柱,以甲醇- 乙腈- 乙酸- 水体系为流动相进行梯度洗脱,采用高效液相色谱- 紫外检测器于280nm 定量检测。结果：12 种抗氧化剂在36min 内完全分离,线性范围为0.2～200mg/L(r=0.9981～0.9999),定量限为0.2～1.0mg/kg,回收率为81.13%～107.57%,相对标准偏差为0.26%～4.52%(n=7)。结论：本方法准确、可靠、简便、检出限低,适合分析大批量样品。     

NDM-1基因PCR检测技术的研究

NDM-1基因是一种"超级细菌"特有的耐药基因,对于菌体的广谱抗药性起着决定性的作用。本研究以实现该基因的快速检测为目的,初步建立了NDM-1基因的PCR快速检测鉴定法。选取肺炎克雷伯氏菌ADB65的NDM-1基因为目的基因,设计并合成了PCR检测引物(ND-319-F和ND-319-R),并以另外11种标准菌株为对照,分别进行了PCR检测。结果表明,携有NDM-1基因的质粒DNA经过PCR反应都扩增出长为319bp的特异性片段,而其他对照病菌均未出现相应片段,证明这对引物具有NDM-1基因检测的特异性。灵敏度测定结果,此体系可检出100fg/μL质粒DNA模板。研究表明,PCR方法是一种特异、灵敏、快速的NDM-1基因检测方法。     

NDM-1基因TaqMAN实时荧光PCR检测方法的建立

研究初步建立了NDM-1基因的实时荧光PCR快速检测鉴定方法。研究根据NDM-1序列,设计并合成了PCR检测引物(ND-T-F和ND-T-R)和探针(ND-T-PROBE),对NDM-1质粒DNA和其他11个标准菌株进行了实时荧光PCR检测。结果表明,携有NDM-1基因的质粒DNA模板都出现了很强的特异信号,而其他对照病菌均未出现特异荧光信号,证明这套引物及探针具有NDM-1基因检测的特异性。灵敏度测定结果,此体系可检出10fg/μL质粒DNA模板。研究表明,TaqMAN实时荧光PCR方法是一种特异、灵敏、快速的NDM-1基因检测方法。     

超级细菌NDM-1基因高通量微球悬浮芯片检测方法的建立

本研究以建立微球体悬浮芯片检测方法为目的,选择三种超级细菌NDM-1基因(metallo-beta-lactamase 1 gene)为目的基因,设计并合成标记特异性探针,与荧光编码微球偶联后与细菌NDM-1基因的PCR产物杂交反应,用微球悬浮芯片检测仪检测荧光信号,建立可快速检测该种基因的微球体悬浮芯片检测方法。特异性和灵敏度检测结果表明:该方法对NDM-1基因检测具有特异性,最低检测限可达10fg/μL,灵敏度高于普通PCR技术,提示微球体悬浮芯片是一种针对NDM-1的快速、灵敏、便捷的新型核酸检测技术。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定果蔬中氟啶虫胺腈、Pyrifluquinazon和螺虫乙酯残留量

建立超高效液相色谱-串联质谱同时测定蔬菜和水果中氟啶虫胺腈、Pyrifluquinazon和螺虫乙酯残留量的分析方法。样品经乙腈均质提取,混合使用乙二胺-N-丙基硅烷和十八烷基硅烷基质分散净化剂净化,以C18色谱柱分离待测物,采用电喷雾离子化,正离子扫描和动态多反应监测模式检测,基质匹配标准溶液外标法定量。氟啶虫胺腈在0.2～100?μg/L之间,Pyrifluquinazon在0.02～10?μg/L之间,螺虫乙酯在0.1～10?μg/L之间的范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999?0。在4个添加水平进行氟啶虫胺腈、Pyrifluquinazon和螺虫乙酯添加回收率实验,平均添加回收率在79.9%～103.9%之间,相对标准偏差在3.3%～8.8%之间。氟啶虫胺腈、Pyrifluquinazon和螺虫乙酯的方法定量限分别为0.334、0.040?5?μg/kg和0.378?μg/kg,检出限分别为0.100、0.012?2?μg/kg和0.133?μg/kg。该方法快速简便、定量准确,可满足多种蔬菜和水果中氟啶虫胺腈、Pyrifluquinazon和螺虫乙酯3?种杀虫剂的残留检测要求。     

NDM-1基因DHPLC快速检测体系的建立

NDM-1基因是一种专属于"超级细菌"的重要特有的耐药基因,在食品潜在污染病原微生物的检测中着重要的作用。本研究以实现食品中超级细菌的快速检测为目标,初步建立了NDM-1基因的PCR-DHPLC快速检测鉴定方法,根据NDM-1基因序列,设计、合成了PCR引物(ND-D-F和ND-D-R),并分别对NDM-1质粒DNA及其他11个标准菌株进行了PCR扩增和DHPLC检测。结果表明,携有NDM-1基因的质粒DNA经过PCR-DHPLC反应扩增出特异性样品吸收峰,而其他对照菌均未出现相应吸收峰,提示本文中设计和应用的PCR引物具有NDM-1基因检测的特异性;灵敏度测定结果显示,此体系检测下限可达100fg/μL,提示PCR-DHPLC方法是一种特异、灵敏、快速的NDM-1基因检测方法。     

利用环介导等温扩增技术检测NDM-1基因的研究初探

以人工合成的NDM-1基因序列为研究材料,在其保守区设计3对4条恒温扩增引物,通过特异性及灵敏度验证实验,初步建立了NDM-1基因的LAMP检测方法。琼脂糖凝胶电泳结果表明,研究中NDM-1基因经过等温扩增后形成了特异性的梯状条带,为食品中潜在超级细菌的现场快速检测提供了一种更加简便快速的方法,可以满足现场检疫的需要。