基于PCR技术的肉类成分溯源鉴定方法研究进展

近几年屡屡曝光的食品安全事故引起了社会的广泛关注,食品安全已经成为社会共同关注的问题,肉类掺假造假现象更是层出不穷,其中用低价鸡肉、鸭肉、猪肉等掺入、冒充牛羊肉成为主要的掺假方式。国内外进行肉类掺假鉴定主要以核酸作为靶标,核酸鉴定也是物种鉴别最常用、最核心的方法,以DNA检测为基础建立起来的DNA条形码、多重PCR、荧光定量PCR、荧光探针等技术也得到空前发展和广泛应用。我国针对动物源性成分检测也制定了相关国家标准和行业标准,但大多现行标准中基于DNA检测建立的PCR技术只能检测单一物种,滞后于技术的发展。目前,基于PCR发展起来的衍生技术凭借其高灵敏度、强特异性和高通量等优势在动物源性成分检测工作中显示出巨大潜力,也是肉类成分鉴定未来的重要方向。本文综述了PCR技术在肉类检测中的研究概况和现行标准的技术概况,以期为肉类成分鉴定研究提供信息。     

4组鱼类DNA条形码引物的筛选与优化

目的通过对DNA条形码氧化酶亚基I基因(cytochrome oxidase subunit I,COI)的4组常用引物进行比较筛选,选择适于舟山鱼类鉴定的最佳引物。方法以舟山主产大黄鱼、小黄鱼、带鱼和乌贼样品DNA为模板,对4组常用DNA条形码引物进行PCR体系优化。通过比较PCR产物量、特异性、灵敏度和测序成功率,综合分析筛选最佳引物组。结果 4组引物均能扩增大黄鱼、小黄鱼和带鱼的DNA,对于乌贼DNA的扩增具有明显差异。COI优化引物具有易于扩增、测序简单等优势,更适于作为海产品鉴定的DNA条形码引物。结论本研究为舟山海产品的市场监管和实验室大量样品检测提供了技术参考。     

一对同时鉴定8种动物源性成分的通用引物的制备及应用

肉类真假鉴定是食品检测工作的内容之一,目前已有多种基于PCR的肉类鉴定方法,但是鉴定种类和效率受限。本研究设计了一对基于普通PCR技术可同时鉴定8种动物源性成分的通用引物并建立了鉴定方法。该引物以线粒体DNA为靶标,利用扩增产物中不同物种间的插入缺失多态性片段大小即可鉴定山羊、绵羊、鹿、水牛、牛、牦牛、猪和骆驼8个物种,扩增后分别得到728 bp、704 bp、504 bp、453 bp、448 bp、431 bp、396 bp和326 bp的片段,每种PCR产物经SspI酶切后产生数量和大小不同的片段,可以进一步清晰鉴别8个物种。引物特异性测试表明和其他常见肉类动物DNA无交叉反应,DNA检测最低限度在0.01~0.05 ng。应用本方法对40份市场肉类及产品的检测表明,羊肉串、羊肉卷以及特色畜产品如驼肉、鹿肉和驴肉存在较多的掺假行为。与其他现有PCR检测方法相比,该方法具有简便易行和高通量的优点,可以作为肉类掺假筛选检测的常规方法。     

鱼翅及其真伪鉴定技术研究进展

鱼翅是鲨鱼鳍软骨制品, 是我国传统的名贵海珍品。由于不同鱼翅的价格悬殊, 一些不法商贩通过以次充好、以假乱真和错误标识等手段谋取利益, 损害消费者权益。另一方面, 鲨鱼的捕捞加速了部分濒危鲨鱼物种数量的急剧减少, 甚至造成物种灭绝, 破坏了生态平衡。因此, 国内外开展了对鱼翅真伪及其鉴定技术研究, 对打击掺假制假行为和鲨鱼保护都具有重要的经济和社会意义。本文分析了鱼翅的营养价值、鱼翅贸易现状以及鱼翅掺假危害, 并着重综述国内外鱼翅真伪鉴定相关技术优缺点以及相应案例, 阐明当前以DNA鉴定技术为核心, 形态学鉴定和理化鉴定技术为辅的鱼翅真伪鉴定策略, 为鱼翅鉴定和鲨鱼种类鉴定的相关研究提供理论基础和技术参考。     

基于PCR多物种鉴定技术及其在肉类 鉴定中的应用

国内外的肉类掺假由来已久,法律上监管部门对此采取了严格监管措施,技术上应用了感官、显微检测和免疫学等相应的检测技术。近几年来,PCR及其衍生技术的快速发展大大推动了肉类鉴定技术的快速发展,尤其在多物种鉴定技术领域建立了如多重PCR、通用单引物多重PCR、通用引物特异性PCR和PCR-RFLP等多项技术。这些技术的发展为肉类及其制品的检测提供了重要手段,代表了检测技术领域发展的方向,但其也各有其优缺点。本文介绍了上述4种多物种鉴定技术及其在肉类鉴定中的应用,并分析了其优缺点,旨在为物种鉴定方法选择及其研究提供参考。     

朊蛋白疾病及其肉食品安全的研究进展

英国疯牛病造成了人类疾病传播的潜在危害,牛羊肉等肉食品的安全备受关注。为了避免疯牛病污染的肉品进入食物链,世界多个研究小组对各类肉食品开展了基于疯牛病传播因子安全方面的研究。疯牛病患病牛肉可以直接感染人类并导致发病,阳性病牛应彻底销毁并进行无害化处理,严禁进入食物链。染病的羊肉和鹿肉属于高度危险食品,也应做销毁处理,而猪肉、马肉、兔肉和水牛肉等则相对比较安全。同时,朊蛋白疾病的感染还与人类自身朊蛋白编码基因多态性有关。在严格检疫的同时,培育抗病品种的家畜以及食用不易感的肉类食品成为未来肉食品安全的一种发展趋势。本文总结了疯牛病、痒病等可传播海绵状脑病患病动物的肉用安全性,还分析了疯牛病可能突破种间屏障而造成跨物种传播的可能性,为肉食品安全及检疫提供参考。     

乌贼DNA条形码的筛选与验证

目的筛选适于鉴定乌贼的DNA条形码,建立鉴定舟山常见乌贼种类的DNA条形码技术体系。方法用聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)对现有5组DNA条形码引物组合进行了筛选,设计一对新的DNA条形码引物以供筛选备用。结果现有引物与部分乌贼的DNA模板存在错配而缺乏通用性,在部分乌贼DNA的扩增受阻。本实验设计的12S rRNA基因引物可以特异性扩增乌贼的DNA,提高了乌贼鉴定的准确度。结论本研究设计的12S rRNA基因引物可以作为现有乌贼DNA条形码鉴定的补充。