中国部分地区甲型肝炎病毒基因型分析

目的　分析中国部分地区甲型肝炎病毒 (HepatitisAvirus,HAV)的基因型。方法　采自辽宁 (LN1、LN2、LN3 )、上海 (Lu3 8)和云南 (YN)甲型肝炎病人的粪便标本共 5份 ,从中分离纯化HAV并提取病毒RNA ,以逆转录 半嵌套聚合酶链式反应 (RT hnPCR)合成VP1 2A交接区及VP1氨基端 ,经克隆筛选后进行测序分析。结果　所分离到的 5株HAV野毒株VP1 2A交接区 168个核苷酸 (nt)的片段与IB亚型的野毒株HM175比较 ,核苷酸差异 >7.5 % ;与IA亚型的日本野毒株AH1、AH2、AH3、FH1、FH2和FH3比较差异 <7.5 % ,因而均属IA基因亚型。但与IB亚型的野毒株MBB比较 ,LN1、LN3和Lu3 8在该区域的核苷酸差异 <7.5 %。进一步将LN1的VP1 2A交接区 3 3 9nt的片段、LN3和Lu3 8的VP1氨基端的核苷酸序列与MBB进行比较 ,核苷酸差异 >7.5 % ,表明这 3株HAV仍属IA基因亚型。结论　所分离到的HAV野毒株LN1、LN2、LN3、Lu3 8和YN均属IA基因亚型     

丙型肝炎病毒多表位基因核酸疫苗的构建及其免疫原性

目的构建丙型肝炎病毒(HCV)多表位基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-CtEm,用该重组质粒免疫BALB/c小鼠,并检测其免疫原性。方法用BamHⅠ和HindⅢ双酶切含有HCVC区、E2区模拟表位和NS3~NS5区细胞表位串联基因的原核表达载体pQE30-CtEm,克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),脂质体瞬时转染CHO细胞,并检测其表达。以100μg重组质粒免疫BALB/c小鼠,检测其体液免疫和细胞免疫效果。结果所构建的真核表达载体pcDNA3.1(-)-CtEm在CHO细胞中能获得有效表达。该质粒免疫小鼠后可诱导高水平的抗体,特异性淋巴细胞增殖反应、IFN-γ水平及CTL活性均明显高于空载体和生理盐水对照组。结论已成功构建HCV多表位基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-CtEm,免疫小鼠后可诱导特异性体液免疫和细胞免疫应答。     

四种金属离子亲和层析纯化重组戊型肝炎病毒包涵体的效果比较

目的 选择固相金属亲和层析柱的金属离子,以优化分离纯化重组戊型肝炎病毒包涵体的条件。方法 在同一试验条件下用4种金属离子柱分离纯化目的蛋白。结果 包涵体经不同离子柱层析时目的蛋白的收获率、纯度、洗脱条件各异。结论 镍离子柱纯化效果最佳。     

应用免疫印迹法分析丙型肝炎相关性抗体

应用两种免疫印迹法对二代ELISA测试的69份血清进行了追加试验。结果表明:8份ELISA阴性血清免疫印迹均阴性,61份ELISA阳性血清有1份免疫印迹阴性。ELISA假阳性率为1.67％。在60份免疫印迹阳性血清中,抗结构区(capsid),非结构区NS_3和NS_4抗体的阳性率分别为83％、93.3％和70％。其中丙型肝炎相关性抗体的分布,以抗capsid、NS_3、NS_4抗体都阳性为主(58.7％)。在输血后急性肝炎和肝细胞癌患者中。丙型肝炎相关性抗体的分布没有统计学上的差异。     

原料人血浆病毒核酸检测试剂适用性的评价

目的评价血液制品生产用原料人血浆病毒核酸检测试剂的适用性。方法常规ELISA法检测合格的18 636份原料血浆样本,分别采用cobas s 201系统的6份和96份样本混合筛查模式进行乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)、丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)、人免疫缺陷病毒(human immunode-ficiency virus,HIV)核酸筛查,对筛查到的反应性样本进行COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HBV/HCV/HIV-1 test(简称CAP/CTM)核酸鉴别试验,评价不同混合筛查模式在实际检测中的适用性。结果 18 636份血浆样本中,6份样本混合筛查模式检测到12份反应性样本,96份样本混合筛查模式未检出反应性样本。CAP/CTM核酸鉴别试验结果表明,12份反应性样本中有6份检测到低浓度(20 IU/mL)HBV核酸,未检测到HIV、HCV核酸阳性样本。结论 96份样本混合筛查模式可有效检测到病毒核酸阳性样本,未发生高浓度病毒样本漏检,未检测到的低浓度样本可通过后续病毒灭活工艺进行有效灭活,不影响血液制品的安全性,且该筛查模式的检测通量更大,更适合用于原料血浆的常规核酸检测筛查。     

应用HEV RNA RT-PCR诊断戊型肝炎的研究

根据我国HEV基因序列分析，设计引物，检测临床上可疑HE患者25例，82份样品。在患者血清及粪便样品中，HEVRNA的阳性率分别为77．78％和63．16％；临床诊断为HE的20例患者，HEVRNA全为阳性，5例抗HEV阴性而未分型的患者，HEVRNA也为阳性。血中HEVRNA可持续90天，粪便中可持续33天。     

日本国厚生劳动省甲型H1N1流感对策推进本部事务局 日本:确诊病例一小时发布

肆虐全球的甲型流感在我国的近邻日本也引起了不小的麻烦。日本国内又是采用怎么样的方式收集和发布相关信息的呢?5月,日本甲型H1N1流感疫情告急。日本关西兵库县和大阪府两地非输入型甲型H1N1流感确诊病例在18日晚增     

生物安全二级实验室认可中关键点的理解与实施（一）

随着各国人员交往的增加、畜产品贸易的不断增长以及人类对自然资源的掠夺性开发,使得动物病原向人类传播的速度得以加快。进入21世纪以来,传染性非典型肺炎（SARS）、高致病性禽流感和甲型H1N1流感相继从动物向人类的传播引起了人们的恐慌。据世界卫生组织（WHO）统计,当今80％的人类新发传染病来源于动物,     

HCV疫苗临床试验的研究进展

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染可引起慢性肝炎,最终导致肝衰竭、肝硬化和肝癌。目前尚无有效的HCV疫苗,其治疗仍以标准化方案聚乙二醇干扰素联合利巴韦林为主。其疗程长,费用高,副作用大,且不能从根本上解决慢性尤其是难治性丙肝的治疗难题,因此,HCV疫苗的研究迫在眉睫。本文就HCV疫苗临床试验的研究进展作一综述。     

治疗性双质粒HBV DNA疫苗制剂的稳定性

目的考察治疗性双质粒HBV DNA疫苗制剂A、B的稳定性。方法按照《中国药典》三部(2010版)方法,对治疗性双质粒HBV DNA疫苗制剂A、B分别进行影响因素试验、加速试验、长期试验,在不同条件下考察样品的基本性状,特别检测质粒DNA的超螺旋比例及进行细胞学转染试验和体内药效学试验。结果双质粒HBV DNA疫苗制剂在破坏性因素的影响下,于光照(4 500±500)Lx、高温(40和60℃)、反复冻融(-20℃←→4℃和-20℃←→RT)条件下5 d均不稳定;匀速振动(140和240 r/min)10 d不稳定;在(25±2)℃、相对湿度(60±10)%的条件下放置1个月不稳定;在温度2~8℃条件下放置2年保持稳定。结论双质粒HBV DNA疫苗制剂对光照、温度敏感,应避光低温保存,避免反复冻融,适合现代快速长途运输,长期保存应在2~8℃条件下,暂定二年有效期,为治疗性双质粒HBV DNA疫苗的临床用样品的运输和保存提供了依据。